半夏厚朴汤对抑郁症型大鼠的治疗作用研究

秦中朋

（河南中医药大学第一附属医院第一临床医学院，郑州450046）

半夏厚朴汤对抑郁症型大鼠的治疗作用研究

秦中朋

（河南中医药大学第一附属医院第一临床医学院，郑州450046）

目的建立抑郁症大鼠模型，并研究半夏厚朴汤对大鼠抑郁症的治疗作用及作用机制，为临床防治抑郁症提供实验和理论依据。方法将SD大鼠12只随机分为四组：正常组(3只)，模型组(3只)，半夏厚朴汤组(3只)，西药氟西汀组(3只)。后三组进行电击足底、通宵照明、禁水或禁食、换笼饲养、昼夜颠倒等，各种刺激随机选用，制造抑郁症大鼠模型。分别用半夏厚朴汤、氟西汀和生理盐水给对应抑郁症大鼠模型灌胃。用水迷宫、敞箱实验、糖水试验等分别测试正常组、模型组与药物组大鼠的反应。最后断头取血，取海马，测试海马中乙酰胆碱变化，并根据西医发病机制筛选特异性较高的指标，进行多重比较研究。对比分析得出半夏厚朴汤对抑郁症大鼠的影响。结果半夏厚朴汤组一般状况（皮色、精神、饮食等）优于对照组大鼠；半夏厚朴汤组大鼠在糖水试验中变现的认知状况优于对照组；半夏厚朴汤组海马重量大于其他组大鼠。且血清乙酰胆碱和海马乙酰胆碱含量分析高于模型组和氟西汀组。结论半夏厚朴汤对抑郁症大鼠具有治疗作用，且效果优于西药氟西汀。

抑郁症；半夏厚朴汤；疏肝解郁；动物实验；痰气郁结

据世界卫生组织(WHO)预计，到2020年，抑郁症将位于各类疾病发病率的榜首[1]。同时在我国，抑郁症的患病人数已经超过1亿，因此对于抑郁症的预防与治疗已成为亟待解决的问题。近年来中药经方治疗抑郁症以其独特的优势得到了广泛的研究，中药经方具有成分简单、作用环节多、靶点多且副作用小的特点，基于个体化的综合治疗和整体调节模式，在治疗抑郁症方面得到了众多患者——特别是许多不愿意接受西药治疗的轻中度抑郁症患者的喜爱。半夏厚朴汤出自中医四大经典的《金匮要略》[3]，原方由清半夏130 g，厚朴45 g，茯苓60 g，生姜75 g，苏叶30 g等中药加减组成，是治疗中医辨证症型——痰气郁结型郁证（俗称“梅核气”）的经典方剂。方中半夏厚朴生姜以辛苦之性苦以降逆，辛以散结；以紫苏之性行其郁结，以茯苓之性渗湿化痰，合奏起效使气顺痰消，解郁降逆，并达到对抑郁症症病人整体调理的目的。本实验采用西医理论，使用中药方法，以抑郁症大鼠为模型探究半夏厚朴汤对抑郁症的治疗作用机制，目的为临床医务工作者提供更科学的数据分析和参考。

1 材料与方法

1.1 实验材料12只雄性6月龄大鼠，重量（230～270）g，省动物中心出售，许可证号：SCXK（豫）2010—0002，河南省动物质量监督监测站（质量合格证：NO. 41003100001905），实验单位许可证号：SYXK（豫）2010—0001。

1.2 药物及试剂紫苏叶30 g（批号1504087），清半夏48 g（批号1403713），姜厚朴36 g（批号1505034），茯苓50 g（1507026），生姜60 g（批号1506044）等均为中药配方颗粒[4]；盐酸氟西汀分散片20mg，小包装注册证号：H20110443，进口药品大包装注册证号：H20110515，分包装药品批准文号：国药准字J20120001，生产厂：PAYHEON FRANCE（法国）。分包装厂：礼来苏州制药有限公司。

1.3 动物分组与给药方法在实验开始前，随机将12只大鼠分成4组：正常对照组(3只)：实验过程中不给予任何刺激，给药过程中按10ml/kg给予0.9%生理盐水，1次/日。模型组(3只)：对大鼠施以群养加慢性不可预见的中等强度刺激，然后在给药过程中按10 m l/kg给以0.9%生理盐水，1日给予1次。半夏厚朴汤组(3只)：先对大鼠用群养加慢性不可预见的中等强度刺激，然后给以0.4mg/ml半夏厚朴汤液灌胃(相当于生药30 g/Kg)，1日给予1次。西药氟西汀组(3只)：先对大鼠用群养加缓慢不可预见的中等强度刺激，然后给以浓度为4 g/ml的剂量灌胃(相当于1.8mg/Kg体重)，1日给予1次。

1.4 模型制备方法根据文献（简单易操作的大鼠CUMS抑郁症模型的构建方法）[5]的方法进行改进。正常组共一笼饲养大鼠3只，不给以任何强度刺激。剩下的三组在进行实验的1周内，分别接受各种不同程度的应激性感应和慢性刺激，包括：禁食(24 h断料)，禁水(24 h断水)，通宵照明，冰水游泳(4℃，5 min)，电击足底(36 v，每隔1 min刺激1次，每次持续10 s，共20次)，夹尾(距尾根1 cm处，1 min)。每天不确定性的安排四种刺激，分别给予不重复的一种，目的是使大鼠没有预感反应。

1.5 行为学测试方法及检测指标

1.5.1 认知记忆功能评估Morris水迷宫，敞箱实验，糖水实验等。认知功能检测——Morris水宫检测学习、记忆功能：采用最新型的Morris测试仪进行检测。敞箱实验：实验装置为容积为60×80×80 cm的无盖方箱、箱子内部除底板外全部涂黑、底板设计为纯白色，并将底板均匀地用记号笔划成25个方格，大小等为16 cm×16 cm。刺激操作开始前将大鼠轻放于方箱底板中心，注意周围条件应在安静下进行，单独的对大鼠进行统一为3 min的测试，观察者在行为实验室内采用摄像系统观察记录大鼠在旷场内前的动作表现。同时注意大鼠与另一只大鼠测量之间应使用用11%的酒精清洗方箱周壁表面及箱子底板，以免实验的其他误差干扰接下来的数据记录。上面计数完毕后，取两项数目之和记为敞箱实验总得分。

糖水消耗量实验：造模前，先对大鼠进行1%蔗糖水摄水训练运动，具体方法即在每笼同时放置2个水瓶，以24 h为周期，设置为第1个周期内2瓶同时装有1%等量的蔗糖水；接下来的第2个周期，1个瓶装有1%蔗糖水，另1个瓶则装等量的纯净水。在周期结束后，测量并计算：大鼠在24 h的禁食禁水后，1 h饮用1%蔗糖水和纯水的量。

1.5.2 细胞因子及神经递质含量测定ELISA法检测血浆内神经递质：Ach含量。

1.6 研究的统计方法1）计量资料以均数±标准差表示。2）多组间均数比较采用方差分析。3）计数资料以百分率（%）表示。4）采用SPSS22.0统计软件。5）P＜0.05为数据可用，差异有统计学意义。

2 实验结果

2.1 大鼠一般状况的变化对大鼠进行刺激后，抑郁症模型大鼠模拟出了类似抑郁症患者的躯体运动障碍以及精神萎靡压抑两种症状，如食欲下降，体重减轻(增长减慢)等。因此记录大鼠的一般状况可以在一定程度上反映半夏厚朴汤的作用效果（见表1）。

表1 对抑郁症大鼠施以半夏厚朴汤后的一般情况的变化结果

通过对大鼠一般情况的对比比较，可以看出各组大鼠在灌胃后精神条件、体态皮毛、饮食情况的显著变化。实验结果显示半夏厚朴汤组一般情况优于对照组大鼠，从而可得出半夏厚朴汤对抑郁症大鼠有一定的改善。

2.2 大鼠体重记录及变化分析抑郁症模型大鼠出现类似抑郁症患者的运动能力明显迟钝，沉默寡欢以及体重减轻(增长减慢)的情况等。因此记录大鼠的一般状况可以在一定程度上反映半夏厚朴汤的作用效果（见表2，图1）。

表2 半夏厚朴汤对大鼠体重影响结果（±s）

表2 半夏厚朴汤对大鼠体重影响结果（±s）

组别动物（只）造模刺激前体重（g）造模刺激后体重（g）正常组模型组氟西汀组半夏厚朴汤组210.33±4.51 211.00±21.66 188.00±24.64 200.67±12.34总数12 204.08±18.61 202.50±17.94 3 3 3 3 210.33±4.51 212.33±22.19 188.33±26.41 205.33±12.67

图1 体重折线图

2.3 敞箱实验敞箱实验现已成为抑郁症模型实验最有代表性的实验检测之一，对抑郁症大鼠进行敞箱实验结果观察分析如下。（见表3，图2，图3，图4，图5）

表3 大鼠敞箱实验行为学评分（±s）

表3 大鼠敞箱实验行为学评分（±s）

组别动物（只）中心格停留时间（s）正常组模型组氟西汀组半夏厚朴汤组3.00±1.41 7.50±0.71 6.50±2.12 4.50±2.12总数8 5.36±2.26 2 2 2 2水平得分44.00±8.49 26.50±7.78 20.50±7.78 25.00±8.49 29.00±11.36垂直得分修饰次数13.00±1.41 8.50±0.71 10.00±1.41 5.00±2.83 19.00±0.00 37.50±4.95 37.50±12.02 27.50±30.41 9.12±3.36 30.38±14.99

图2 中心格停留时间均值折线图

图3 水平得分均值折线图

图4 垂直得分均值折线图

图5 修饰次数得分均值折线图

2.4 水迷宫实验结果本次Morris实验通过人为刺激让大鼠置于水迷宫中，诱使其进行游泳，观察结果分析如下（实验结果见表4）。

表4 水迷宫实验结果

2.5 对抑郁症大鼠海马乙酰胆碱含量的影响人的脑组织中有大量的乙酰胆碱，乙酰胆碱的含量与年龄的增长呈负相关关系。身体健康的老人乙酰胆碱的含量比年轻时会下降超过30%，而患有老年痴呆症的病人乙酰胆碱减少更为严重，甚至会高于80%。因此研究检测大脑海马匀质中乙酰胆碱的含量也是研究抑郁症很重要的方法，使用半夏厚朴汤后对比结果如下。（见表5，图6）

表5 Ach含量值数据表

图6 大鼠大脑Ach浓度与OD值的标准曲线图

3 讨论

本实验通过查找大量论文材料，对抑郁症的现代研究治疗情况进行了分析总结，同时探究了抑郁症的中西医机理，使实验进行有了科学理论的基础支撑和指导。实验按照科学方法建立抑郁症大鼠动物模型，设立空白、模型、西药、中药等四组对其体重及海马匀浆乙酰胆碱等指标进行比较，来验证其治疗疗效，同时实验引用国际公认和通用的方法验证了中药经方半夏厚朴汤对于抑郁症的治疗作用机制及作用效果。

我们从国内外的文献中筛选出应激抑郁症模型（CUMS）为实验的造模模型[6-8]。模型以大鼠在接受不同的应激后表现出一系列的情绪和动作异常改变，如躯体运动障碍、食欲下降、体重减轻(增长减慢)等，同时成功地模拟了人类抑郁症患者出现的精神情感异常，如焦虑、冷默、压抑等。造模前期大鼠表现狂躁不安，乱动多动、躁乱撕咬，造模成功不久，即出现了中医所谓的郁证表现，大鼠不欲饮食或食量降低，趋于安静，蜷缩不再好动，毛发逐渐失去光泽，自我清洁次数减少，灌药的抵触性降低。随着喂药的时间延长，西药组、加味小柴胡汤中、大剂量组饮食、体重及活动度增进，逐步回升到造模初期水准，均比模型组有显著差别。实验结果显示半夏厚朴汤组一般情况优于对照组大鼠，从而可得出半夏厚朴汤对抑郁症大鼠的症状有一定的改善。敞箱实验行为和水平运动测定进一步验证了实验的结论，9月8日的数据显示大鼠造模成功，抑郁症大鼠给药后，9月10日的数据显示给药组抑郁症有所减轻，尤其半夏厚朴汤组效果较明显。水迷宫实验由于实验器材限制，没有足够的实验给大鼠引导，故所得数据存误差。差异显示无统计学意义，同时实验也存在问题在于抑郁大鼠模型的建立的成功与否，这些针对实验结果产生了一定的影响。现在医学对于人类抑郁症的诊断只是从常见症状、精神表现等方面做出的推测诊断，并不能绝对的诊断抑郁症，更难得对其辨证论治。而对于不会言语的大鼠，我们对其一般表现、精神状态都不能作绝对的评估。因此，造模成功的检测方法仍需改进和探讨。同时暴露出了一个迫切的问题，现今临床工作者们对抑郁症的辨证分型标准至今仍然是众说纷纭，因此尽快统一一个标准一致的抑郁症症状分型非常重要。

同时因为实验过程中由于条件限制并未进一步检测大鼠的大脑内单胺类递质、神经小分子递质、神经营养因子等多种物质的含量变化，并未从分子水平探究解释抑郁症的机制，不能从西医理论充分验证抑郁假说中某些指标的变化，所以接下来我们会进一步通过分子水平研究半夏厚朴汤对抑郁症的作用机理。

综上所述，通过半夏厚朴汤对抑郁症型大鼠的治疗作用研究结果显示：中药经方半夏厚朴汤确实存在减轻和改善抑郁症的功效，同时本次实验也在一定程度上证明了半夏厚朴汤对抑郁症的治疗作用比西药复方氟西汀分散片的作用更好。同时实验也启示我们应该不断深入和加强对于抗抑郁中药经方及其中药有效成分提取的实验研究，以便可以尽快发现抗抑郁中药的有效成分而研发成成分简单的、可广泛应用的、让患者更易接受的药物，也有利于中医药走向世界，以便造福更多的抑郁症患者。

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Study on the Therapeutic Effect o f Banxia Houpu Decoction on Dep ression ModelRats

QINZhongpeng

(The FirstClinicalM edicalCollege,the Affiliated Hospitalof Henan University of TraditionalChineseMedicine,Zhengzhou 450046,China)

Ob jectiveTo establish the depression ratmodel,and to study the therapeutic effect and themechanism of Banxia Houpu decoction on rats of depression,to provide experimental and theoretical basis for clinical prevention and treatment of depression.Methods12 SD ratswere random ly divided into four groups：normal group(3 rats),model group(3 rats),banxia Houpu decoction group(3 rats)and fluoxetine group(3 rats).The three groups were electric shock foot,night lighting,water deprivation or fasting,for cage rearing,day and night,and so on,a variety of stimuli random ly selected,manufacturing depression ratmodel.Respectively with fluoxetine and saline banxiahoupu decoction,correspondingmodel rats with depression.The watermaze,open field test and sucrose consumption testwere tested in the normal group,model group and drug group rat reaction.Finally,the blood was taken,the hippocampus was taken to test the changes of acetylcholine in the hippocampus,and the specificity of the higher index was selected according to the pathogenesis ofWestern medicine.Comparative analysis of the effect of Banxia Houpu decoction on depression in rats was carried out.ResultsThe general condition of Banxia Houpu decoction group(skin color,spirit,diet,etc.)was better than that of the control group.Banxia Houpu decoction group rats were realized in sucrose test in cognitive status was better than the control group.Banxia Houpu decoction group was greater than the weight of other groups of rats'hippocampus.The levels of acetylcholine and acetylcholine in serum were higher than that in themodel group and the fluoxetine group.ConclusionBanxia Houpu decoction has a therapeutic effecton depression in rats,and the effect isbetter than Westernmedicine fluoxetine

depression;Banxia Houpu decoction;dispersing stagnated liver qi for relieving qi stagnation;animal experiment;stagnation of phlegm and qi

10.3969/j.issn.1672-2779.2017.05.055

1672-2779（2017）-05-0130-04

：李海燕本文校对：刘增芳

2016-11-08）