烟草赤星病室内防治药剂筛选及田间防治效果

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（1.西南大学植物保护学院，重庆 400716；2.湖南省烟草公司邵阳市公司，湖南 邵阳 422001）

烟草赤星病室内防治药剂筛选及田间防治效果

陈杰1，李六英1，高敏1，马冠华1*，陈国康1，于庆涛2

（1.西南大学植物保护学院，重庆 400716；2.湖南省烟草公司邵阳市公司，湖南 邵阳 422001）

采用菌丝生长速率法和孢子萌发法，测定了10种杀菌剂对烟草赤星病菌（Alternaria alternata）的抑菌效果，采用田间小区试验对活性较好的4种杀菌剂进行防治效果比较。10种农药室内毒力试验结果显示，10%苯醚甲环唑水分散粒剂、10%多抗霉素可湿性粉剂、50%咪鲜胺锰盐可湿性粉剂、32.5%苯醚甲环唑·嘧菌酯悬浮剂、30%苯醚甲环唑·丙环唑悬浮剂和30%肟菌酯·戊唑醇悬浮剂抑制菌丝生长和孢子萌发的效果好；430 g/L戊唑醇悬浮剂抑制孢子萌发单一效果好；40%腈菌唑可湿性粉剂、40%菌核净可湿性粉剂和 6%嘧肽霉素水剂对菌丝生长和孢子萌发的抑制效果都差。4种农药田间试验表明，10%苯醚甲环唑水分散粒剂、30%肟菌酯·戊唑醇悬浮剂、30%苯醚甲环唑·丙环唑悬浮剂和 32.5%苯醚甲环唑·嘧菌酯悬浮剂对烟草赤星病的防效分别为90.60%、88.21%、87.21%和83.84%，均表现出良好的效果，推荐使用此4种杀菌剂用于生产上烟草赤星病的防控。

烟草赤星病；药剂筛选；防治效果

烟草赤星病（Alternaria alternata）是烟草成熟后期重要的叶部真菌病害，严重威胁我国各地烟叶生产[1-3]。该病潜育期短、流行速度快，在烟株打顶后，病菌从下部叶片开始自下而上逐步发展，环境适宜时，短期内即可造成大流行，给烟叶生产带来巨大损失[4-5]。

化学药剂防治仍是控制烟草赤星病的最主要措施[6-7]，目前国内防治该病的化学药剂以菌核净为主。菌核净为内吸性杀菌剂，长期大量使用易产生抗药性，在部分烟区已表现出防效降低现象[8-9]。其农药残留较高，可大大影响烟叶品质[10]。为有效控制烟草赤星病的发生及流行，延缓该病菌的抗药性发展，筛选高效轮换药剂愈加迫切。本研究按照化学分类选择10种不同作用机理的药剂进行室内毒力测定，筛选出室内毒力活性较好的4种药剂进行田间小区防治试验，拟找出对烟草赤星病防控效果较好可用于交替或轮换的药剂，为烟草安全生产提供一定依据。

1 材料与方法

1.1 材料

供试病原菌：烟草赤星病菌YN-1由西南大学植物生态病理研究所提供。

供试烟草品种：K326，由玉溪中烟种子生产有限责任公司生产。

供试培养基为马铃薯琼胶培养基(PDA)：马铃薯200 g；琼胶17～20 g；葡萄糖20 g；水1000 mL。

供试药剂：50%咪鲜胺锰盐可湿性粉剂（美国富美实公司）、430 g/L戊唑醇悬浮剂（拜耳作物科学中国有限公司）、10%苯醚甲环唑水分散粒剂（利民化工股份有限公司）、40%腈菌唑可湿性粉剂（美国陶氏益农公司）、10%多抗霉素可湿性粉剂（日本科研制药株式会社）、6%嘧肽霉素水剂（大连奥德植保有限公司）、32.5%苯醚甲环唑·嘧菌酯悬浮剂（青岛润生农化有限公司）、40%菌核净可湿性粉剂（江西禾益化工股份有限公司）、30%苯醚甲环唑·丙环唑悬浮剂（四川国光农化股份有限公司）和30%肟菌酯·戊唑醇悬浮剂（天津汉邦植物保护剂有限责任公司）。

1.2 试验方法

1.2.1 室内药剂筛选 （1）对病菌菌丝生长的抑制作用测定采用菌丝生长速率法[11-12]。将供试菌株接种于PDA平板上，25 ℃恒温培养7 d，制备直径为6 mm的菌饼备用。各药剂稀释的浓度梯度依次为50%咪鲜胺锰盐可湿性粉剂：0.5、2.5、5、10、50 μg/mL；430 g/L戊唑醇悬浮剂：4.3、17.2、43、86、340 μg/mL；10%苯醚甲环唑水分散粒剂：0.01、0.05、0.1、0.5、5 μg/mL；40%腈菌唑可湿性粉剂：5、10、50、100、500 μg/mL；10%多抗霉素可湿性粉剂：0.5、1、5、25、50 μg/mL；6%嘧肽霉素水剂：120、300、600、1500、3000 μg/mL；40%菌核净可湿性粉剂：1、5、10、50、100 μg/mL；32.5%苯醚甲环唑·嘧菌酯悬浮剂：0.026、0.13、1.3、2.6、6.5 μg/mL；30%苯醚甲环唑·丙环唑悬浮剂：0.05、0.5、2.5、10、25 μg/mL；30%肟菌酯·戊唑醇悬浮剂：0.45、0.9、1.8、4.5、9 μg/mL；在培养皿中加入1 mL配好的药液和9 mL培养基，混匀，制成不同含药浓度的PDA，将直径为6 mm的菌饼接种于含药PDA培养基上。设加1 mL无菌水的PDA培养基为对照，每处理3次重复。置于25 ℃培养箱中培养，于7 d后用十字交叉法测量菌落直径[8]，求出毒力回归方程，并计算各药剂对病菌的有效抑制中浓度（EC50）及相关系数（R）。

（2）对病菌孢子萌发的抑制作用测定。用无菌水调节孢子浓度（10×20倍下每视野20～30个），配成孢子悬浮液。配制各待测药剂浓度梯度同上。用移液枪吸取50 μL孢子悬浮液于凹玻片内，再分别加入50 μL各浓度梯度的药液，配成含系列药剂质量浓度的孢子悬浮液。设不加药液处理为对照，每处理 3次重复。将凹玻片置于培养皿内保湿培养，24 h后镜检孢子萌发情况，每处理随机观察3个视野，共100个孢子。计算孢子萌发率及药剂对孢子萌发的抑制率，求出毒力回归方程，计算出各药剂对烟草赤星病菌孢子萌发的抑制中浓度(EC50)及相关系数(R)[12]。

1.2.2 田间药效试验 （1）试验设计：试验地为重庆市涪陵区焦石镇，土壤肥力基本一致。设置4个处理，即A：10%苯醚甲环唑水分散粒剂（有效成分用量为150 g/hm2）；B：32.5%苯醚甲环唑·嘧菌酯悬浮剂（有效成分用量为487.5 g/hm2）；C：30%苯醚·丙环唑悬浮剂（有效成分用量为450 g/hm2）；D：30%肟菌·戊唑醇悬浮剂（有效成分用量为 225 g/hm2）。施用等量清水（CK）作对照，每个处理3次重复，共15个小区，采用随机区组排列，试验田四周设保护行。按照各药剂要求的浓度，分别于2015年7月13日、7月19日和7月31日施药，共施药3次，第1次施药时未发生赤星病。

（2）数据调查方法：在第3次用药后20 d，每个小区采用5点法取样，每点调查5株，以叶片为单位全株调查。

病害严重度分级标准：0级，全叶无病；1级，病斑面积占叶片面积的1%以下；3级，病斑面积占叶片面积的2%～5%；5级，病斑面积占叶片面积的6%～10%；7级，病斑面积占叶片面积的11%～20%；9级，病斑面积占叶片面积的21%以上。参照文献[12]计算病情指数和防治效果。

2 结 果

2.1 杀菌剂对烟草赤星病菌丝生长的抑制效果

10种杀菌剂对烟草赤星病菌丝的生长都有一定的抑制作用（表1）。不同药剂的抑制效果有着明显差异，其中，10%苯醚甲环唑水分散粒剂、32.5%苯醚甲环唑·嘧菌酯悬浮剂、30%苯醚甲环唑·丙环唑悬浮剂和 30%肟菌酯·戊唑醇悬浮剂、10%多抗霉素可湿性粉剂、50%咪鲜胺锰盐可湿性粉剂对烟草赤星病菌菌丝的抑制效果较好，EC50分别是0.1448、0.9947、1.6058、2.2864、4.4691和5.0088 μg/mL；而40%菌核净可湿性粉剂、430 g/L戊唑醇悬浮剂和 40%腈菌唑可湿性粉剂的抑制效果较差，EC50分别为26.1781、27.5984和34.4867 μg/mL；6%嘧肽霉素水剂对菌丝的抑制效果最差，EC50为480.8993 μg/mL。

2.2 杀菌剂对烟草赤星病菌孢子萌发的抑制效果

10种杀菌剂对烟草赤星病菌的孢子萌发都有一定的抑制作用，但各药剂的抑制效果明显不同（表 2）。其中，32.5%苯醚甲环唑·嘧菌酯悬浮剂、430 g/L戊唑醇悬浮剂、30%苯醚甲环唑·丙环唑悬浮剂、10%多抗霉素可湿性粉剂、30%肟菌酯·戊唑醇悬浮剂、10%苯醚甲环唑水分散粒剂、50%咪鲜胺锰盐可湿性粉剂对赤星病菌孢子萌发的抑制效果较好，EC50分别为0.3390、0.5840、0.8613、1.0134、1.2183、4.3815和4.4517 μg/mL；40%腈菌唑可湿性粉剂和 40%菌核净可湿性粉剂的抑制效果较差，EC50分别为15.4551和16.2605 μg/mL；6%嘧肽霉素水剂的抑制效果最差，EC50为 205.4619 μg/mL。

表1 10种杀菌剂对烟草赤星病菌菌丝生长的抑制效果Table 1 The activities against mycelial growth of Tobacco Brown Spot of ten fungicides

表2 10种杀菌剂对烟草赤星病菌孢子萌发的抑制效果Table 2 The activities against spore germination of Tobacco Brown Spot of ten fungicides

2.3 杀菌剂对烟草赤星病田间小区防治效果

4种化学药剂对烟草赤星病都有较好的防治效果（表3）。10%苯醚甲环唑水分散粒剂、30%肟菌酯·戊唑醇悬浮剂和30%苯醚甲环唑·丙环唑悬浮剂防效分别是90.60%、88.21%和87.21%，3种药剂对烟草赤星病的防治效果无显著差异。其中10%苯醚甲环唑水分散粒剂和 30%肟菌酯·戊唑醇悬浮剂的防效显著好于32.5%苯醚甲环唑·嘧菌酯悬浮剂，但32.5%苯醚甲环唑·嘧菌酯悬浮剂与 30%苯醚甲环唑·丙环唑悬浮剂之间防效无显著差异。

表3 4种杀菌剂对烟草赤星病的田间小区防治试验Table 3 The field experiment effect of Tobacco Brown Spot control of four fungicides

3 讨 论

烟草赤星病主要为害成熟期烟叶，发生严重时对产量影响极大，生产上长期使用菌核净已使得部分地区病菌抗药性发展较快[13]，导致防治效果不理想。本试验通过对赤星病菌的菌丝生长和孢子萌发测定表明，40%菌核净可湿性粉剂对病菌的EC50值远高于10%苯醚甲环唑水分散粒剂等4种药剂，表明菌核净防治效果变差的根本原因是对病菌的抑制作用减弱，这与李梅云等[8]的研究结果一致。

不同种类的杀菌剂对病原菌的作用机制各有特点，因此，筛选更多种类的有效药剂是必要的。本研究按化学分类选择了常见的杀菌剂作为代表，将各种杀菌剂在相同实验条件下进行比较分析，便于筛选效果好的杀菌剂。其中，戊唑醇、苯醚甲环唑、丙环唑为三唑类内吸性杀菌剂，咪鲜胺锰盐为咪唑类杀菌剂，作用机理都为影响甾醇类生物合成，使菌体细胞膜功能受到破坏，导致病原菌死亡。本研究中430 g/L戊唑醇悬浮剂对抑制烟草赤星病孢子萌发单一效果好，抑制菌丝生长效果比其他几种三唑类杀菌剂差，尽管三唑类的杀菌剂具有相似的作用机制，但不同的三唑类杀菌剂在抵抗相同的病原菌方面也会表现出不同的抗菌活性和机制，从而防治效果间也会存在差异。赵华等[14]研究表明，戊唑醇对链格孢分生孢子萌发的抑制效果好，对菌丝生长和分生孢子盘形成的抑制作用差。多抗霉素为多氧嘧啶核苷类，作用机理为抑制细胞壁几丁质的合成；嘧菌酯为甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂，其作用机理是抑制线粒体呼吸作用；肟菌酯为甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂，作用机理为通过阻止病菌细胞ATP的合成，从而抑制其线粒体呼吸来达到抑菌的效果。本研究结果表明，三唑类苯醚甲环唑分别与三唑类丙环唑，甲氧基丙烯酸酯类嘧菌酯复配，对病菌孢子萌发和菌丝生长抑制效果好。而菌核净的作用机制可能是干扰膜上脂质的合成[15]，与以上几种药剂的抑菌机理有着差异。生产上可以选择多种防治效果好的杀菌剂轮换使用，从而减轻抗药性，提高产量。

4 结 论

10种农药室内毒力试验结果表明，10%苯醚甲环唑水分散粒剂、10%多抗霉素可湿性粉剂、50%咪鲜胺锰盐可湿性粉剂、32.5%苯醚甲环唑·嘧菌酯悬浮剂、30%苯醚甲环唑·丙环唑悬浮剂和 30%肟菌酯·戊唑醇悬浮剂对赤星病菌菌丝生长和孢子萌发均有好的抑制效果；田间试验结果表明，10%苯醚甲环唑水分散粒剂、30%肟菌酯·戊唑醇悬浮剂、30%苯醚甲环唑·丙环唑悬浮剂和32.5%苯醚甲环唑·嘧菌酯悬浮剂4种农药对烟草赤星病有较好的防治效果，可在生产上轮换或交替使用来防治烟草赤星病，提高烟草种植的经济效益。

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Indoor Screening and Field Trial of Fungicides against Tobacco Brown Spot

CHEN Jie1, LI Liuying1, GAO Min1, MA Guanhua1*, CHEN Guokang1, YU Qingtao2
(1. College of Plant Protection, Southwest University, Chongqing 400716, China; 2. Shaoyang City Branch of Hunan Provincial Tobacco Corporation, Shaoyang, Hunan 422001, China)

The aims of this investigation were to screen for effective fungicides to control tobacco brown spot. The indoor toxicities of ten fungicides againstA. alternatawere tested by the method of colonial growth-rate and spore germination. The field trial was conducted with four selected fungicides. The results of the indoor experiment showed that the fungicides with strong activities against both mycelia growth and spore germination ofA. alternatawere difenoconazole 10% WG , polyoxin 10% WP, prochloraz-manganese chloride complex 50% WP, difenoconazole·azoxystrobin 32.5% SE, difenoconazole·propicondzole 30% SE and trifloxystrobin·tebuconazole 30% SE. In addition, tebuconazole 430 g/L SC had strong activities against spore germination but not mycelia growth ofA. alternate. The fungicides with weak inhibitory activities were myclobutanil 40% WP, dimetachlone 40% WP and cytosinpeptidemycin 6% AS. The results of the field experiment indicated that the control effect of difenoconazole 10% WG, trifloxystrobin·tebuconazole 30% SE, difenoconazole·propicondzole 30% SE and difenoconazole·azoxystrobin 32.5% SE were 90.60%, 88.21%, 87.21% and 83.84%, respectively. These four fungicides could be used in control of tobacco brown spot.

Alternaria alternata; screening fungicides; control effect

S435.72

1007-5119（2017）01-0073-05

10.13496/j.issn.1007-5119.2017.01.013

重庆市烟草专卖局（公司）项目“重庆烟草有害生物综合治理专项”（NY20140401070002）

陈 杰（1993-），女，硕士研究生，主要从事植物病原学研究。E-mail：21616122@zju.edu.cn。*通信作者，E-mail：nikemgh@swu.edu.cn

2016-06-02

2016-11-03