HPLC法测定一匹绸中东莨菪苷和东莨菪内酯的含量

李兵++蒙秋艳++廖广凤++卢汝梅++朱小勇

摘要：建立了一匹绸中东莨菪苷和东莨菪内酯的含量测定方法。色谱柱为ODS-C18，用甲醇-0.2%磷酸梯度洗脱，流速为0.8 mL/min，柱温30 ℃，检测波长为346 nm。东莨菪苷、东莨菪内酯0.019 2～0.096 0 mg/mL（r=0.999 9）、0.004 48～0.022 40 mg/mL（r=0.999 5）呈现良好的线性关系，方法学验证结果符合要求。本方法简便准确，精密度和重复性好，可作为一匹绸药材的含量检测方法。

关键词：一匹绸；HPLC；东莨菪苷；东莨菪内酯

中图分类号：R284.1；S567 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2017）01-0123-02

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.01.031

Determination of Scopolin and Scopoletin in Argyreia acuta by HPLC

LI Bing，MENG Qiu-yan，LIAO Guang-feng，LU Ru-mei，ZHU Xiao-yong

（Guangxi University of Chinese Medicine， Nanning 530200，China）

Abstract： A HPLC method was established for determination contents of Scopolin and Scopoletin in Argyreia acuta Lour. The separation was performed on ODS-C18 column，with gradient elution in methanol -0.2% H3PO4 solution at the flow rate of 0.8 mL/min. The column temperature was 30 ℃，and the detection wavelength was 346 nm. The results showed that Scopolin and Scopoletin had good linear relationships in range of 0.019 2～0.096 0 mg/mL（r=0.999 9） and 0.004 48～0.022 40 mg/mL（r= 0.999 5）. The methodological results were in line with requirements. The method is simple and accurate， with good precision and repeatability， which could be used for the quality control of Argyreia acuta Lour.

Key words： Argyreia acuta Lour.； high performance liquid chromatography； scopolin； scopoletin

一匹綢为旋花科银背藤属植物白鹤藤（Argyreia acuta Lour.）的干燥全草，具有祛风除湿、化痰止咳、散癖止血、解毒消痛等功效；用于治疗肾炎水肿、肝硬化腹水、风湿疼痛、慢性气管炎、乳痛等症[1]。一匹绸是广西壮医临床常用的解毒药，壮语称为Godakhab（棵百合），又名白面水鸡、白背丝绸等，壮医认为其具有调水道、气道，除湿毒功效，已收载于《广西壮族自治区壮药质量标准》中，但现行质量标准没有对其中主要有效成分进行含量测定，仅对其中咖啡酸含量进行测定[2]。

本课题组对一匹绸的化学成分进行了研究，从中分离得到抗炎有效成分东莨菪苷和东莨菪内酯[3]，而一匹绸中东莨菪苷、东莨菪内酯含量测定的方法尚未见报道。本试验建立了HPLC法，同时测定了其中东莨菪苷和东莨菪内酯含量，旨在为一匹绸的质量评价和质量标准提供参考。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

KQ5200B型超声波清洗仪（江苏昆山市超声仪器有限公司）；BSA224S型赛多利斯电子天平，1100型安捷伦液相色谱仪，GL Sciences Inertsil ODS-3 C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）。东莨菪内酯（批号110768-200504，中国药品生物制品检定所），东莨菪苷（批号YY91053，上海源叶生物科技有限公司）。

一匹绸药材1～6号采于广西各地，经广西中医药大学梁子宁副教授鉴别为旋花科银背藤属植物白鹤藤的干燥全草。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件 色谱柱，GL Sciences Inertsil ODS-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为甲醇-0.2%磷酸梯度洗脱，流速0.8 mL/min；检测波长346 nm；柱温30 ℃。

1.2.2 对照品溶液的制备 精密称定东莨菪苷、东莨菪内酯适量，甲醇溶解，配置成东莨菪苷、东莨菪内酯浓度分别为0.074 1、0.022 3 mg/mL的混合对照品溶液，用0.45 μm微孔滤膜过滤即可。

1.2.3 供试品溶液的制备 取不同产地药材各1 g，分别加20 mL甲醇，称重，超声提取2 h，冷却至室温后补重，滤过取续滤液，用0.45 μm微孔滤膜过滤，制得供试品溶液。

2 结果与分析

2.1 线性关系考察

配置东莨菪苷含量为0.019 2、0.038 4、0.057 6、0.076 8、0.096 0 mg/mL，东莨菪内酯含量为0.004 48、0.008 96、0.013 44、0.017 92、0.022 40 mg/mL的混合对照液5份，分别进样5 μL，测定峰面积，得标准曲线方程分别为：东莨菪苷y=15 238.055 7x-5.272 649 9（r=0.999 9），在0.019 2～0.096 0 mg/mL线性关系良好；东莨菪内酯y=29 093.227 3x+6.080 748 1（r=0.999 5），在0.004 48～0.022 40 mg/mL线性关系良好。

2.2 精密度试验

取对照品溶液连续进样6次，每次5 μL，在“1.2.1”色谱条件下测量东莨菪苷、东莨菪内酯峰面积，计算其RSD值分别为0.16%、0.28%，表明精密度良好。

2.3 稳定性试验

取供试品溶液，在0～12 h内每隔2 h进样5 μL，在“1.2.1”色谱条件下测量东莨菪苷、东莨菪内酯峰面积，计算其RSD值分别为1.33%、2.28%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.4 重复性试验

取同一批药材（产地广西武鸣县）共6份，各1 g，按“1.2.3”制备供试品溶液，分别进样5 μL，在“1.2.1”色谱条件下测量东莨菪苷、东莨菪内酯峰面积，计算其RSD值分别为2.07%、1.66%，表明重复性良好。

2.5 加样回收率试验

取药材（产地广西武鸣县）0.5 g，各6份，分别加入对照品（其中东莨菪苷0.698 0 mg，东莨菪内酯0.087 0 mg）并加20 mL甲醇，按“1.2.3”制备供试品溶液，分别进样5 μL，在“1.2.1”色谱条件下，测定峰面积，计算6份供试品中东莨菪苷和东莨菪内酯的平均回收率及RSD值，结果见表1。

2.6 样品测定

取各产地药材1 g，按“1.2.3”制备样品供试液，在“1.2.1”色谱条件下，分别进样5 μL，记录色谱图，按外标法测定东莨菪苷、东莨菪内酯峰面积，计算其含量。試验结果见表2。

3 讨论

3.1 色谱条件优化

据文献报道[4]，东莨菪苷、东莨菪内酯的紫外最大吸收波长为346 nm，故选定346 nm为测定波长。分别考察不同比例乙腈-水、甲醇-水、甲醇-0.2%磷酸流动相，结果发现在甲醇-0.2%磷酸流动相条件下峰型较好，分离度达到要求，故选择甲醇-0.2%磷酸为流动相。以此流动相条件测量时分别进行不控温和控制柱温20和30 ℃，结果表明控制柱温为30 ℃时效果更好更稳定。

3.2 样品提取条件优化

试验采用了单因素考察分析方法。分别使用甲醇、95%乙醇进行提取，结果表明甲醇提取效率更佳。考察回流提取、超声提取，两种方法提取效率接近，因超声提取法操作简便，故选择超声提取方法。分别用10、15、20、25、30倍量甲醇进行提取，结果表明20倍量甲醇提取东莨菪苷和东莨菪内酯含量较高。考察提取时间及提取次数，分别提取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h，发现在20倍量甲醇超声提取2.0 h提取较完全，以此法进行2次提取，第二次提取液中东莨菪苷、东莨菪内酯的含量极低，故而只需提取1次便可。

参考文献：

[1] 江苏新医学院.中药大辞典[M].上海：上海科技出版社，1977.

[2] 广西壮族自治区食品药品监督管理局.广西壮族自治区壮药质量标准（第一卷）[M].南宁：广西科学技术出版社，2008.

[3] 杨泽华.壮药一匹绸化学成分及抗炎活性的研究[D].南宁：广西中医药大学，2015.

[4] 徐 飞，王晓中，张 雷，等.HPLC测定宁夏枸杞中东莨菪素和东莨菪苷含量[J].中国实验方剂学杂志，2012，13（18）：67-69.