地瓜藤提取物的活性成分研究

成英++刘素君++宋九华

摘要：研究地瓜藤（Ficus tikoua Bur.）提取物的活性成分，经初步提纯后得到3个含量较多的组分，分别对其进行抗氧化和抗菌试验。结果表明，C组分对DPPH自由基、羟基自由基以及超氧阴离子自由基的清除率均比A、B组分的要高，且随着浓度的增加，各组分的清除率均呈上升的趋势。C组分对大肠杆菌、表皮葡萄球菌、志贺杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制作用比A和B组分强，且3种组分的抑菌作用均随浓度的增加而增加。A、B、C 3种组分的MIC分别为1.03、1.04、0.51 mg/mL。

关键词：地瓜藤（Ficus tikoua Bur.）；活性成分；抗氧化；抗菌

中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2017）01-0112-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.01.028

Active Components Research of Ficus tikoua Bur. Extracts

CHENG Ying，LIU Su-jun，SONG Jiu-hua

（Department of Chemistry， Leshan Normal College，Leshan 614004，Sichuan，China）

Abstract：The active components of Ficus tikoua Bur. crude extracts was studied. Three components extracted from Ficus tikoua Bur. were tested respectively through the antioxidant and antibacterial experiments. Results showed that the C composition was higher than part A and B on DPPH，hydroxyl and superoxide anion free radical. With the increase of concentration，the removal rate of three components were rised. The C composition was stronger than A and B for four bacteria，and increased with the increase of the concentration. At last，the MIC of A，B，C were 1.03 mg/mL，1.04 mg/mL and 0.51 mg/mL，respectively.

Key words： Ficus tikoua Bur.； active components； antioxidant； antibacterial

地瓜藤（Ficus tikoua Bur.）为桑科榕属植物地瓜榕的全草，具有清热解毒、祛风化湿、舒筋活络、通利乳汁、益气健脾、消肿止痛、活血等功效。中国约有120多种，其中作为药用的有20个种和3个变种，但进行过化学成分和药理作用研究的仅有10余种[1]。该属植物因生于荒滩野岭，被人们视为“野草”，国内外对此研究较少，主要集中在化学成分的研究[1，2]，而对其药理活性的研究较少。本研究利用溶剂提取法提取地瓜藤中活性物质，采用抗菌及抗氧化试验[3]探讨其生物活性，以便深入研究地瓜藤的活性成分，扩大其药源，以期充分利用中国野生植物资源。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂及仪器

地瓜藤采自乐山郊区，由乐山师范学院生命科学学院鉴定。

正丁醇、甲醇、乙酸乙酯、无水乙醇（均为AR）、琼脂粉（成都市科龙化工试剂厂）；蛋白胨、牛肉膏（北京奥博星生物技术有限责任公司）；DPPH（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，日本和光纯薬业株式会社生产）；大肠杆菌、表皮葡萄球菌、志贺杆菌、金黄色葡萄球菌，由乐山师范学院微生物实验室提供。

V-630型紫外分光光度计（日本分光株式会社）；LDZX-40H型立式自动电热压力蒸汽灭菌器；LR-250生化培养箱（上海一恒科学仪器有限公司）；QYC-200型恒温摇床（上海福玛试验设备有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 提取与分离 地瓜藤粉末用95%的乙醇在常温下进行渗滤，浓缩渗滤液，将浓缩液（400 g）分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，各部分再用梯度洗脱的方式进行分离浓缩，最后得到A组分10 g（石油醚∶乙酸乙酯=5∶1）、B组分7 g（乙酸乙酯∶丙酮=1∶7）、C组分8 g（正丁醇∶乙醇=2∶1），这3个组分含量较多，分别将其进行抗菌和抗氧化试验。

1.2.2 提取物抗氧化性质研究

1）提取物对DPPH自由基的清除作用：称取一定量样品，分别用无水乙醇配成浓度为2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 mg/mL的待测溶液，吸取各待测溶液2.0 mL，加入0.2 mmol/L DPPH溶液2.0 mL，搖匀，放置30 min，其吸光度为A样品。样品溶液2.0 mL与无水乙醇2.0 mL混合液的吸光度为A对照，2.0 mL DPPH溶液与2.0 mL无水乙醇的吸光度为A空白。对DPPH自由基的清除率按公式计算：清除率=[1- （A样品-A对照）/A空白]×100%。

2）提取物对羟基自由基的清除作用：根据Fenton反应，取1 mL 0.75 mmol/L邻二氮菲无水乙醇溶液，加2 mL的0.2 mmoL/L磷酸盐缓冲液（pH 7.4），充分混匀后加入0.75 mmol/L硫酸亚铁溶液 1 mL，最后加入0.01%H2O2 1 mL为对照；反应液在37%保温1 h，于536 nm处测定吸光度。按照以上方法，依次加入1 mL浓度为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mg/mL的样品为处理样，在536 nm处测定吸光度，平行测定3次。对羟自由基的清除率按公式计算：清除率=（A处理-A对照）/（A空白-A对照）×100%。

3）提取物對超氧阴离子自由基的清除作用：取4.5 mL pH 8.2的Tris-HCI缓冲液（50 mmol/L）加入3.2 mL去离子水和1 mL样品溶液，空白管用去离子水代替。混匀后在25 ℃水浴中保温20 min，取出后立即加入25 ℃预热的0.3 mL邻苯三酚（3 mmol/L），迅速摇匀后倒入比色皿，在325 nm处每隔30 s测定吸光值A1，共测4 min，推迟30 s。空白管不加样品，直接加入邻苯三酚在325 nm处每隔30 s测定吸光值A0。分别计算出邻苯三酚自氧化速率k1、k0。根据公式计算清除率：清除率=[（k0-k1）/k0]×100%。

1.2.3 提取物抑菌活性研究

1）纸片药敏试验：采用滤纸片法[3-5]对3个组分进行试验。分别称取A组分0.165 1 g，B组分0.166 4 g，C组分0.164 8 g，用灭菌去离子水溶解。将灭菌后的纸片（6 mm）放于溶解有组分和装有灭菌去离子水的烧杯中浸泡2 h。浸泡后的纸片自然晾干。取9个倒有培养基的培养皿，在无菌条件下将大肠杆菌、表皮葡萄球菌、志贺杆菌、金黄色葡萄球菌的菌液均匀涂布在培养基上。将培养皿放置在恒温培养箱中于37 ℃下培养24 h，用游标卡尺测量抑菌圈直径。

2）MIC试验：准确称取A、B、C 3种组分0.329 4、0.332 8、0.327 0 g，分别用灭菌去离子水溶解，用倍比稀释法配制具有浓度梯度的溶液，共72份溶液。另取3份溶液为无药空白对照。分别取若干纸片（6 mm），放置在上述溶液中浸泡2 h。浸泡完成后取出自然晾干，备用。

固体培养基的制备、灭菌、接种、培养和抑菌圈的测量等操作与药敏试验相同。

2 结果与分析

2.1 地瓜藤提取物抗氧化性质分析

从图1、图2、图3可以看出，地瓜藤提取物C组分对DPPH自由基、羟基自由基以及超氧阴离子自由基的清除率均比A、B组分的要高，且随着各组分浓度的增加，地瓜藤提取物对DPPH自由基、羟基自由基以及超氧阴离子自由基的清除率均呈上升的趋势。

2.2 抑菌试验研究

2.2.1 纸片药敏试验 如图4所示，地瓜藤提取物3种组分对大肠杆菌、表皮葡萄球菌、志贺杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制程度不同。地瓜藤提取物C组分对这4种菌群的抑制程度均大于A组分和B组分。试验中各组分浓度均为16 mg/mL。

2.2.2 MIC试验 由图5可知， 随着地瓜藤提取物各组分浓度的升高，各组分对大肠杆菌、表皮葡萄球菌、志贺杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制程度增大，其中地瓜藤提取物C组分对4种菌群的抑制作用比A和B组分强。A、B、C 3种组分的MIC分别为1.03、1.04、0.51 mg/mL。

3 小结

通过粗提，从地瓜藤中提取了3种含量较大的组分，对这3种组分分别进行了抗氧化和抗菌试验。从试验结果可以看出，C组分对DPPH自由基、羟基自由基以及超氧阴离子自由基的清除率均比A、B组分高，且随着浓度的增加，各组分的清除率均呈上升的趋势。在抑菌试验中，C组分对大肠杆菌、表皮葡萄球菌、志贺杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制作用也比A和B组分强。A、B、C 3种组分的MIC分别为1.03、1.04、0.51 mg/mL。

参考文献：

[1] 关永霞，杨小生，佟丽华，等.苗药地瓜藤化学成分的研究[J].中草药，2007，38（3）：342-344.

[2] 郭良军，谭兴起，郑 巍，等.地瓜藤化学成分研究[J].中草药，2011，42（9）：1709-1711.

[3] 柏宏伟，成 军，杨 柳，等.板栗雄花序萃取物抗氧化及抑菌效果[J].林业科学，2015，51（5）：145-152.

[4] 张馨予，陈芳芳.气质联用技术的应用[J].现代农业科技，2011（10）：13-16.

[5] 富 玉.天然产物中有效成分分离及测试方法概述[J].中国测试技术，2007，33（2）：22-24.