低氧状态下骨肉瘤细胞侵袭能力研究

柯珍勇

（重庆医科大学附属第二医院，重庆 400000）

骨肉瘤（osteosarcoma）是目前临床已知的侵袭能力强、恶性程度高的肿瘤类型，多发于青少年人群且预后极差、远期生存率偏低，尽管随着医学技术的快速发展，使得恶性肿瘤治疗手段日益丰富，但是时至今日骨肉瘤的治疗仍然为困扰临床的棘手问题之一[1]。近些年来低氧状态与肿瘤生物活性功能、细胞增殖活性之间的关联性逐渐被医学界所熟知。对于骨肉瘤而言，细胞侵袭能力是决定其预后的关键性因素，低氧状态下骨肉瘤细胞生物活性功能的研究成为研究的热门议题之一。鉴于此，本次研究围绕低氧状态下骨肉瘤细胞侵袭能力展开研究，现内容报道如下。

1 实验材料与方法

1.1 实验材料

本次研究使用的人成骨肉瘤细胞（MG-63）均为2015年8月～2016年8月由上海信然生物技术有限公司购自。

1.2 方法

1.2.1 人成骨肉瘤细胞培养

采用紫外线对实验室内空气进行消毒处理，随后将人成骨肉瘤细胞取出后置入恒温水浴箱中在37℃条件下快速复温后利用移液器将其加入含有2.5 mL细胞培养液的试管之中。以10000 r/min离心5 min，分离上清液后分离细胞悬液并将其置于包含有青霉素100 U/L以及链霉素100 U/L的培养液中以37℃恒温孵育，二氧化碳体积分数控制在5%，每日及时清除死亡细胞并更换培养液。

1.2.2 人成骨肉瘤细胞分组

在人成骨肉瘤细胞步入对数生长期，并在细胞培养液已经更换24 h后置于二氧化碳细胞培养箱之中密闭培养，氧气浓度分别设置为1%和21%，孵育24 h后进行分组[3]。

1.3 观察指标

将HIF-1αmRNA表达、E-cad mRNA表达、细胞克隆率、细胞迁移率、细胞侵袭率、细胞黏附率作为观察指标。

1.4 统计学方法

采用SPSS 17.0统计学软件对数据进行处理，计量资料以“x± s”表示，采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组HIF-1αmRNA和E-cad mRNA表达水平比较

观察组HIF-1αmRNA表达高于对照组，E-cad mRNA表达低于对照组，二者相比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 两组细胞侵袭能力比较

观察组细胞克隆率、细胞迁移率、细胞侵袭率高于对照组，细胞黏附率低于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。

3 讨 论

骨肉瘤发生、发展以及对正常细胞侵袭过程中肿瘤细胞始终处于永生化状态，其增至火星明显增加，并且伴有原发灶以及转移灶的生长[4]。高代谢状态下肿瘤内普遍存在着不同程度的缺氧情形，而对于正常细胞来讲，充足的氧气供给是维持细胞功能正常运转的必备条件之一[5-6]。

本次研究证实，观察组H I F-1 α m R N A表达（0.52±0.07），高于对照组的（0.14±0.04），而E-cad mRNA表达（0.46±0.12）则低于对照组（1.09±0.16），差异有统计学意义（P＜0.05）。在细胞实验结果比较上，观察组细胞克隆率、细胞迁移率、细胞侵袭率高于对照组，细胞黏附率低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。由此可见，低氧状态下骨肉瘤细胞的HIF-1αmRNA表达被激活，使得其表达水平显著提高。而随着HIF-1αmRNA表达水平的提高，细胞克隆率、细胞迁移率、细胞侵袭率亦随之提高，二者之间呈现出明显的正相关性。现有医学研究指出，上皮钙黏素（E-cadherin，Ecad）表达则是全程参与恶性肿瘤侵袭和转移的钙黏附素（Cadherin）家族成员之一，为维持上皮细胞极性与细胞-细胞间紧密相连的关键性细胞黏附因子，当其表达水平下调时，恶性肿瘤细胞的侵袭以及转移能力随之增强，呈现出明显的负相关性[8]。本次研究中观察组E-cad mRNA表达明显更低，细胞黏附率同样处于较低水平，与上述论断相吻合。

综上所述，低氧环境下骨肉瘤HIF-1αmRNA表达被诱导激活，而E-cad mRNA表达受抑制，使得其侵袭转移能力大幅提升。

[1] 王一凡,许永涛.构建瘤细胞模型:NS-398对低氧状态下MG-63细胞侵袭能力的影响[J].中国组织工程研究,2015,35(40):6408-6412.

[2] 孙 微,师永红.去泛素化酶影响低氧诱导因子-1α泛素化过程的研究进展[J].临床与病理杂志,2015,10(11):2018-2022.