高效液相色谱法测定川产玛咖中N-苄基-十六烷酰胺的含量

夏 陈，邓俊琳，张盈娇，陈 建

(四川省农业科学院农产品加工研究所，四川 成都 610066)

高效液相色谱法测定川产玛咖中N-苄基-十六烷酰胺的含量

夏 陈，邓俊琳，张盈娇，陈 建*

(四川省农业科学院农产品加工研究所，四川 成都 610066)

采用HPLC法测定了川产(四川省阿坝县、峨边县、美姑县)玛咖中N-苄基-十六烷酰胺的含量，并与其在秘鲁玛咖中的含量进行了比较。色谱条件为：Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5.0 μm)；流动相A为0.005%的三氟乙酸水溶液，流动相B为0.005%的三氟乙酸乙腈溶液，梯度洗脱；检测波长为210 nm。结果表明，阿坝县、峨边县和美姑县玛咖中N-苄基-十六烷酰胺含量分别为0.087%、0.085%、0.055%，均高于秘鲁玛咖中N-苄基-十六烷酰胺含量(0.030%)。该方法重复性好(RSD=0.47%)、精密度高(RSD=0.38%)、加标回收率准确可靠(RSD=3.5%)，可用于玛咖中N-苄基-十六烷酰胺含量的测定。

N-苄基-十六烷酰胺；高效液相色谱；川产玛咖；玛咖酰胺

玛咖(Lepidium meyeniiWalp.，Maca)是十字花科独行菜属草本植物，原产于秘鲁海拔3 500m以上的安第斯山区，主要分布于秘鲁胡宁(Junin)和帕斯科(CerrordePasco)地区的suni和puna生态区[1-2]。我国自2003年在云南丽江种植基地引种以来，现已成功在新疆、吉林、西藏、四川(甘孜、阿坝、松潘、峨边、美姑)等高海拔山地引种和收获[3]。玛咖富含氨基酸、矿物质、多糖等营养物质以及特殊次生代谢产物[4]，具有改善性功能、提高生育能力、延缓更年期、抗疲劳等多种功效[5-6]。研究表明，芥子油苷、多酚、玛咖酰胺、玛咖烯等次生代谢产物是玛咖的主要活性成分，玛咖酰胺和玛咖烯是仅在玛咖中发现的特征性物质[7-10]。国外已研究发现了20多种玛咖酰胺，其中亚麻酰苄胺、亚油酰苄胺和N-苄基-十六烷酰胺的含量较高[11-12]。国内的研究主要集中在营养成分[13-14]上，对玛咖酰胺的研究报道较少。虽然朱颖秋等[15]测定了不同产地玛咖中亚麻酰苄胺和亚油酰苄胺的含量，但对国产玛咖中N-苄基-十六烷酰胺的含量测定未见报道。鉴于此，作者采用HPLC法测定四川省阿坝县、峨边县、美姑县所产玛咖中的N-苄基-十六烷酰胺含量，并与其在秘鲁玛咖中的含量进行比较，拟为川产玛咖的优质栽培及其精深加工提供帮助。

1 实验

1.1 材料、试剂与仪器

川产玛咖：将采自四川省的阿坝州阿坝县、乐山市峨边县、西昌市美姑县的新鲜玛咖自然阴干，粉碎，过60目筛，备用；秘鲁玛咖粉：产于秘鲁胡宁(Junin)。

N-苄基-十六烷酰胺对照品(纯度≥95%)，自制；其余试剂及乙腈等溶剂均为色谱纯。

万能粉碎机，北京中兴伟业仪器有限公司；DHG-9075A型电热恒温鼓风干燥机，上海齐欣科学仪器有限公司；电子天平，奥豪斯仪器(上海)有限公司；KH2200DE型数控超声波清洗器，昆山禾创超声仪器有限公司；1260型高效液相色谱仪，美国Agilent公司。

1.2 方法

1.2.1 对照品溶液的配制

准确称取N-苄基-十六烷酰胺对照品49.2 mg置于100 mL容量瓶中，甲醇溶解并定容，得浓度为467.40 μg·mL-1的对照品母液；将该母液分别稀释2倍、4倍、8倍、16倍、32倍，配制不同浓度的对照品溶液。

1.2.2 样品溶液的配制

分别准确称取阿坝县、峨边县、美姑县及秘鲁玛咖粉2 g，置于具塞锥形瓶中，加入10 mL甲醇，加盖，称重，40 ℃超声提取1 h，冷却，以甲醇补齐重量，取上清液过0.45 μm微孔滤膜，得样品溶液。

1.2.3 色谱条件

色谱柱：Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5.0 μm)；DAD检测器，检测波长210 nm；柱温40 ℃；流速1.0 mL·min-1；进样量20 μL；流动相A为0.005%三氟乙酸水溶液，流动相B为0.005%三氟乙酸乙腈溶液；梯度洗脱：0～35 min，55%～95%B；35～40 min，95%～100%B。

2 结果与讨论

2.1 玛咖中N-苄基-十六烷酰胺的HPLC图谱

分别测定阿坝县、峨边县、美姑县及秘鲁玛咖样品中N-苄基-十六烷酰胺的HPLC图谱，结果如图1所示。

a.秘鲁 b.阿坝县 c.峨边县 d.美姑县 e.N-苄基-十六烷酰胺对照品

由图1可以看出，N-苄基-十六烷酰胺对照品在保留时间为37 min时出现色谱峰，而4个玛咖样品均在37 min处有色谱峰。表明，在此色谱条件下，玛咖样品中的N-苄基-十六烷酰胺得到较好分离。

2.2 方法学验证

2.2.1 标准曲线和线性关系

分别对浓度(μg·mL-1)为5.48、11.69、23.37、46.74、93.48、467.40的N-苄基-十六烷酰胺对照品溶液进行HPLC分析。以浓度(x，μg·mL-1)为横坐标、峰面积(y)为纵坐标绘制标准曲线，得N-苄基-十六烷酰胺的线性方程为y=34.101x(R2=0.9990)。表明，N-苄基-十六烷酰胺的峰面积和浓度之间呈良好的线性关系。

2.2.2 重复性实验

按1.2.2方法平行配制玛咖(美姑县产)样品溶液3份，进行HPLC分析，计算N-苄基-十六烷酰胺含量的相对标准偏差(RSD)为0.47%。表明该方法重复性良好。

2.2.3 精密度实验

按1.2.1方法配制对照品溶液，连续进样3次，计算N-苄基-十六烷酰胺峰面积的RSD为0.38%。表明该方法精密度良好。

2.2.4 加标回收率实验

称取玛咖粉末(美姑县产)适量于具塞锥形瓶中，加入N-苄基-十六烷酰胺对照品适量，按1.2.2方法配制样品溶液，进行HPLC分析，结果见表1。

表1加标回收率实验结果(n=3)

Tab.1Results of recovery experiment(n=3)

由表1可知，N-苄基-十六烷酰胺的平均加标回收率为92%，RSD为3.5%。表明该方法有较好的回收率，结果准确可靠。

2.3 玛咖中N-苄基-十六烷酰胺的含量测定

据McCollom等[11]报道，干玛咖中的玛咖酰胺总含量在0.0016%～0.0123%范围内。本实验测得阿坝县、峨边县、美姑县玛咖样品中N-苄基-十六烷酰胺的含量分别为0.087%、0.085%、0.055%，均高于此文献报道值，而秘鲁玛咖中N-苄基-十六烷酰胺含量(0.030%)与该文献报道值接近。这可能是因为：(1)玛咖原产于秘鲁海拔3 500 m以上的安第斯山区，其气候特点是海拔高、昼夜温差大、少肥、缺氧等。只要有适当温度和水分，同时保证合适的海拔高度、土质和施肥等条件，就能实现引种[16]。川产玛咖中N-苄基-十六烷酰胺含量均高于秘鲁玛咖，表明这些高海拔地区适宜玛咖生长。(2)玛咖中玛咖酰胺含量的高低与种子来源、海拔高度、收获时间、加工方式等[15，17]有关。此外，玛咖的品质在栽培过程中也会受到连作效应的影响，导致土壤营养元素缺失、田间病虫害更易发生、玛咖抗逆性减弱、品质下降[18]。阿坝县和美姑县均为首次种植玛咖，其生长未受到连作效应的影响，N-苄基-十六烷酰胺含量较高；而峨边县玛咖是第二年种植，受到连作效应的影响，这也可能是其N-苄基-十六烷酰胺含量稍低的一个原因。

3 结论

采用HPLC法测定玛咖中N-苄基-十六烷酰胺含量，结果表明，川产玛咖中N-苄基-十六烷酰胺含量均高于秘鲁玛咖。该方法重复性好(RSD=0.47%)、精密度高(RSD=0.38%)、加标回收率准确可靠(RSD=3.5%)，可用于玛咖中N-苄基-十六烷酰胺的含量测定。

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Determination of Contents ofN-Benzyl-hexadecanamide in Sichuan Maca by HPLC

XIA Chen,DENG Jun-lin,ZHANG Ying-jiao,CHEN Jian*

(InstituteofAgro-ProductsProcessingScienceandTechnology,SichuanAcademyofAgriculturalSciences,Chengdu610066,China)

ThecontentsofN-benzyl-hexadecanamideinMacafromAbaCounty,EbianCounty,andMeiguCountyofSichuanProvince,ChinaweredeterminatedbyHPLC,andtheresultswerecomparedwiththecontentofN-benzyl-hexadecanamideinMacafromPeru.Thechromatographicconditionswereasfollows:anEclipseXDB-C18column(4.6mm×250mm,5.0μm),amixtureofwater/trifluoroaceticacid(99.995∶0.005,volumefraction,solventA)andacetonitrile/trifluoroaceticacid(99.995∶0.005,volumefraction,solventB)asamobilephasewithgradientelution,and210nmwavelengthdetection.TheresultsshowedthatthecontentsofN-benzyl-hexadecanamideinAbaMaca,EbianMaca,andMeiguMacawere0.087%,0.085%,and0.055%,respectively.AllthreeMacasampleshadhigherN-benzyl-hexadecanamidecontentthanthatinPrueMaca(0.030%).ThismethodissuitablefordeterminingthecontentofN-benzyl-hexadecanamideinMacawithgoodrepeatability(RSD=0.47%),highprecision(RSD=0.38%),andreliablerecovery(RSD=3.5%).

N-benzyl-hexadecanamide;HPLC;SichuanMaca;macamide

四川省农业科学院条件建设专项基金资助项目

2016-08-11

夏陈(1983-)，男，四川邻水人，硕士，助理研究员，研究方向：功能食(药)品，E-mail:154541462@qq.com;通讯作者：陈建，博士，研究员，E-mail:jc_saas@yahoo.com。

10.3969/j.issn.1672-5425.2017.02.016

O 657.72

A

1672-5425(2017)02-0068-03

夏陈，邓俊琳，张盈娇，等.高效液相色谱法测定川产玛咖中N-苄基-十六烷酰胺的含量[J].化学与生物工程，2017，34(2)：68-70.