内质网应激相关蛋白GADD153/CHOP在系膜增生性肾炎肾组织中的表达及中药干预研究*

深圳大学第一附属医院 深圳市第二人民医院

贾秀琴 曹美群△ 杨 敏 李利民 倪新强(深圳 518035)

实 验 研 究

内质网应激相关蛋白GADD153/CHOP在系膜增生性肾炎肾组织中的表达及中药干预研究*

深圳大学第一附属医院 深圳市第二人民医院

贾秀琴 曹美群△杨 敏 李利民 倪新强(深圳 518035)

目的：研究系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)大鼠肾脏组织内质网应激相关蛋白生长停滞及DNA损伤基因153(GADD153)/C-EBP 同源蛋白(CHOP)的表达、中药保肾颗粒对GADD153/CHOP表达的干预效果，探讨保肾颗粒治疗系膜增生性肾小球肾炎的作用机制。方法：大鼠随机分为中药组、对照组、模型组、空白组，中药组给予保肾颗粒、对照组给予雷公藤多甙片灌胃、空白组和模型组以等量生理盐水灌胃，连续14周。于造模后给药前1 d及实验结束后，检测各组大鼠血清肌酐(SCr)，TUNEL检测大鼠肾脏细胞凋亡情况，实时荧光定量聚合酶链反应(Q-PCR)及Western blot法检测肾组织GADD153/CHOP的表达。结果：与模型组比较，对照组和中药组SCr均显著下降(P<0.05)。空白组肾组织细胞凋亡不明显，模型组有大量的肾组织细胞凋亡，中药组及对照组凋亡较轻。与模型组比较，中药组及对照组GADD153/CHOP及GADD153/CHOPmRNA表达水平下降(P<0.05)。 结论：MsPGN大鼠肾组织GADD153/CHOP表达增高，提示内质网应激可能参与了肾脏损害；而保肾颗粒对MsPGN大鼠肾组织GADD153/CHOP过度表达有较好的抑制作用，且作用与雷公藤多甙片相当，是减轻肾脏损害的重要机制之一。

系膜增生性肾小球肾炎；GADD153/CHOP；内质网应激；中药；保肾颗粒；雷公藤多甙片；正虚标实；肾虚；肾络

系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)是临床上最常见的肾小球病变，目前在我国是导致终末期肾脏病的主要原因之一，故越来越多针对MsPGN的研究，而MsPGN的发病机制目前尚不十分清楚，还没有安全有效的治疗药物。本研究着眼于中医学，观察中药保肾颗粒治疗实验性MsPGN的效果并探讨其可能的作用机制。

1 材料和方法

1.1 实验动物 2月龄清洁级SD雄性大鼠28只，体质量(200±10)g，由湖北省实验动物研究中心提供，实验动物生产许可证号：SCXK(鄂)2015-0018。实验期间自由饮水进食，室温20℃～24℃，相对湿度40%～50%，通风良好，空气清新，符合实验动物伦理学原则。

1.2 实验用药 中药：由黄芪、党参、生地黄、茯苓、山药、泽泻、白花蛇舌草、丹参、益母草等药物组成，药材一次性购自深圳北京同仁堂药店，常规水煎，每毫升药液中含原药材1.962g,过滤后4℃保存备用；雷公藤多甙片购至深圳市第二人民医院，由远大医药黄石飞云制药有限公司生产，国药准字Z42021212，产品批号:20151202，每片10mg，使用时用蒸馏水配制成每毫升含生药1.0mg混悬液。

1.3 试剂 磷酸酶抑制剂、PMSF、RIPA裂解液、BCA蛋白浓度测定试剂盒为碧云天生物技术研究所产品，PVDF膜为Millipore产品，小鼠抗β-actin多克隆抗体为武汉博士德生物工程有限公司产品，Trizol试剂盒(货号252250AX)为Aidlab产品，HiScript逆转录酶 (货号R101-01/02)为VAZVME产品，生长停滞及DNA损伤基因153(GADD153)/C-EBP同源蛋白(CHOP)抗体由武汉维诺赛生物技术有限公司提供。TUNEL试剂盒Roche公司产品。

1.4 主要实验仪器 日立全自动生化分析仪，美国Labnet微型高速离心机，日本ASONE电热恒温培养箱，Thermoscientific全自动酶标仪，德国LeicaRM2016轮转式切片机，奥林巴斯BX53型生物显微镜，杭州奥盛仪器有限公司微量分光光度计，北京君意东方电泳设备有限公司紫外分析仪及水平电泳仪，Illuminaeco实时荧光定量PCR仪(型号7900 /Viia7)，东胜创新PCR仪。

1.5 方法

1.5.1 抗大鼠胸腺细胞抗血清(ATS)的制备：取4～6周龄大鼠胸腺细胞，纯化为单胸腺细胞，调整细胞水平至5×107/L，成为单胸腺细胞悬液，与完全福氏佐剂做1︰2 体积混合，按每只5×107/L个细胞量将胸腺细胞多点皮下注射免疫新西兰兔，后每隔2周按每只家兔1×107/L细胞经耳静脉直接注射加强免疫，共加强免疫3次，末次免疫1周后，间接免疫荧光测ATS的效价结果为1︰2 000时，表明ATS制备成功。第7周采血，4℃过夜析出血清。抗血清经大鼠新鲜红细胞及肝细胞吸附，分装后于-20℃保存，使用时56℃水浴30min灭活补体。

1.5.2 造模方法 大鼠尾静脉注射AST抗血清(1mL/100g)，1周1次，共注射4次。于注射结束后1d查尿蛋白，如尿蛋白(+++)判定为模型成功。未达此标准者则剔除。

1.5.3 实验分组：动物购回后适应性喂养1周，并检测尿蛋白定性(-)后，随机分组造模进行实验。随机选取7只为正常组(空白组)，其余采用上述方法建立MsPGN模型，整个实验过程中没有大鼠死亡及未达成模标准。造模成功的大鼠随机分为模型组、中药组、对照组，每组样本量7只。

1.5.4 治疗方法:动物药物剂量以成人剂量按照等效剂量换算。中药组给予浓煎中药保肾颗粒2mL/次，每天1次灌胃；对照组给予雷公藤多甙片每次1mL/100g灌胃，每日1次；空白、模型组等量生理盐水灌胃。所有治疗由同一技术员进行操作，连续灌胃14周。

1.5.5 血清肌酐检测:给药前1d、给药14周后乙醚麻醉，股动脉取血1.5mL，分离血清，检测大鼠血清肌酐(日立全自动生化分析仪)。

1.5.6 制备组织芯片: 治疗14周末麻醉后处死大鼠，取新鲜肾组织标本，置于4%多聚甲醛溶液中固定，常规石蜡包埋、切片。用组织芯片制作仪，从蜡块上穿取直径 1.5mm的组织蜡块柱，插入7列×8 行点阵的受体蜡块中，融蜡、冷却，制备组织芯片，厚 4μm连续切片备用。肾组织液氮速冻后存放于-70℃冰箱以提取总RNA和蛋白用。

1.5.7 原位末端标记技术(TUNEL)对原位细胞凋亡进行检测：按试剂盒说明书操作，切片常规脱蜡，蛋白酶K37℃消化，TDT酶反应液37℃孵育0.5h，0.3%H2O2 25℃封闭，Streptavidin-HRP室温反应5min，DAB显色，苏木精复染，脱水、透明、干燥。以无酶标记液代替TDT酶反应液作空白对照。400倍光学显微镜下观察计数同时拍照，以细胞核呈棕褐色者为阳性细胞。

1.5.8 实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测GADD153/CHOP蛋白的表达：按照Trizol试剂说明书进行，提取大鼠肾组织总RNA，用微量分光光度计测定样本的浓度和纯度反转录体系，逆转录成cDNA后，进行PCR反应。引物序列设计如下：CHOP：F-5‘-CCCCAGGAAACGAAGAGGAA-3’，R-5‘-CGCACTGACCACTCTGTTTC-3’,产物长度210bp;β-actin:F-5‘-CACGATGGAGGGGCCGGACTCATC-3’,R-5‘-TAAAGACCTCTATGCCAACACAGT-3’，产物长度240bp。反应条件：50℃ 2min，95℃ 10min，95℃ 30s，60℃ 30s，40个循环。根据扩增曲线数据，记录各样本Ct值，以β-actin作为内参，最终数据以2-△△Ct公式进行计算。

1.5.9Westernblot法检测GADD153/CHOP蛋白的表达:取等量肾皮质组织剪碎放入冰冷的研磨器，加入冰冷的蛋白裂解 400μL提取蛋白，用考马斯亮蓝法测定蛋白浓度，-70℃保存，每个样品取40μg总蛋白，10%SDS-PAGE凝胶电泳后电转移到PVDF膜，5%脱脂奶粉37℃封闭2h，加入一抗 ( 稀释比例 1∶2 000 ) ，4℃孵育过夜。TBST洗膜，5min×6，加入二抗(1︰5 000)，TBST洗膜，5min×6，ECL化学发光法显色。晾干并扫描胶片，用BandScan分析胶片灰度值，以β-actin条带和目的条带积分光密度值(IOD)比值作为最后结果。

2 结果

2.1 各组治疗前、后血清肌酐检测结果 治疗前，模型组、中药组、对照组与空白组比较，血清肌酐明显升高，P<0.05；治疗14周后，中药组、对照组与模型组比较，血清肌酐明显降低，P<0.05。结果见表1。

表 1各组大鼠治疗前后血清肌酐比较

组别例数治疗前治疗后空白组729.714±3.50228.567±11.174模型组785.786±6.394#81.043±6.111 对照组788.529±5.202#45.557±5.841*中药组787.386±6.177#38.386±6.700*

注：与空白组比较，#P<0.05； 与模型组比较，*P<0.05

2.2 鼠肾组织细胞凋亡情况 空白组肾组织细胞凋亡不明显，模型组有大量的肾组织细胞凋亡，中药组及对照组凋亡较轻。见图1。

图1 TUNEL法检测各组大鼠肾组织细胞凋亡情况 (DAB显色×400 A空白组 B模型组 C中药组 D对照组)

2.3 各组大鼠肾组织GADD153/CHOP蛋白表达及GADD153/CHOPmRNA的表达 模型组与空白组相比，肾脏GADD153/CHOP蛋白及GADD153/CHOPmRNA表达明显增多，差异有显著性(P<0.05)；中药组及对照组与模型组比较，GADD153/CHOP及GADD153/CHOPmRNA表达明显降低(P<0.05)。见图2、表2。

图2 各组大鼠肾组织GADD153/CHOP的表达(A空白组 B模型组 C中药组 D对照组)

表 2各组大鼠肾组织GADD153/CHOP及GADD153/CHOPmRNA的表达

组别例数GADD153/CHOP GADD153/ CHOPmRNA空白组71.087±0.161 0.407±0.089 模型组72.143±0.215#0.994±0.132#对照组71.637±0.191*0.784±0.134*中药组71.369±0.149*0.651±0.148*

注：与空白组比较，#P<0.05； 与模型组比较，*P<0.05

3 讨论

据统计慢性肾脏病在我国的患病率高达10.8%，治疗花费非常大,[1]还容易产生诸多并发症，致残率高，现代医学又缺乏理想的治疗方法。慢性肾炎作为一种由免疫介导的炎症性疾病，起病隐蔽、病程迁延、呈缓慢不可逆性进展，是导致慢性肾脏病最常见的原因之一，其病因未明，目前普遍认为是涉及多因素的结果。

一些病理生理反应如低氧、营养缺乏、氧化还原反应平衡被打破、钙离子内环境改变、翻译后修饰失败和蛋白合成过多等可以导致大量错误或未折叠蛋白在内质网堆积及Ca2+平衡状态的紊乱，激活共同的应激反应，此现象称为内质网应激(ERS)。研究证实，ERS是一种信号反应通路系统，属细胞自我保护机制的一部分。[2]

慢性肾炎状态下可能的刺激因素大大增加，包括氧化应激，蛋白尿以及细胞内外电解质紊乱等。有研究显示，ERS是促进肾脏疾病发生发展的主要因素，内质网应激预处理能保护肾脏细胞对抗氧化损伤。[3-5]为了缓解ERS而激活的保护机制有：(1)减少内质网蛋白质的合成，减轻错误折叠蛋白和未折叠蛋白的进一步聚集；(2)诱导内质网多种分子伴侣的表达，从而增强内质网蛋白质折叠的功能；(3)诱导内质网相关降解基因的表达，增强错误折叠蛋白和未折叠蛋白的降解；(4)诱导功能受损细胞凋亡。[6-7]

GADD153/CHOP，是内质网应激凋亡途径中比较有特异性的途径。属C/EBP转录因子家族成员，是分布于内质网的重要促凋亡转录因子，GADD153/CHOP是肌体促进细胞内蛋白质成熟、维持细胞功能的关键性调节物质，[8]与肌体各种细胞功能活动，如能量代谢、分化、增殖、凋亡有关。正常情况下，GADD153/CHOP主要位于细胞质中，表达量较低；而当胞内Ca2+稳态失衡、错误折叠蛋白增多，细胞处于应激状态时，GADD153/CHOP可被活化而转位至胞核内，呈现高表达。[9]GADD153/CHOP作为内质网应激标志性蛋白，目前普遍认为，激活和转录GADD153/CHOP基因是内质网应激通路介导细胞凋亡的通路之一。抑制GADD153/CHOP的表达能显著增强应激细胞的存活能力。

慢性肾炎作为中医药治疗的优势病种，加强对慢性肾炎的研究具有重要的临床意义。中医学认为，慢性肾炎病程长，病情复杂。病机特点为本虚标实，虚实夹杂。本虚常以肾虚为主，涉及肺、脾、膀胱等脏腑；主要表现为肾藏精、主水、主骨生髓、主一身之气化功能失常及肺失通调、脾失健运、膀胱气化失常等。标实主要表现为风寒湿热等外感病邪，水湿、湿热、瘀血、浊毒郁滞等，痰瘀毒互结是慢性肾小球肾炎的主要病理因素,[10]正虚标实相互影响，互为因果，共同致病，循环往复，不断进展，导致本病长期复发，缠绵难愈。

络脉作为中医理论重要的组成部分，是全身气血运行灌注的通道，也是感应传导信息和调节生理功能的通路，其具有支横别出、逐层细分、网状分布的空间结构特点，及气血流缓、面性弥散、双向流动、末端连通、功能调节的气血运行特点。[11]慢性肾炎的现代病理基础是肾小球毛细血管逐渐破坏，系膜基质和纤维组织增生，导致整个肾小球纤维化、玻璃样变。同时，由于肾小球血流受阻，相应肾小球萎缩，间质炎症细胞浸润，纤维组织增生，导致肾组织严重破坏，形成终末期固缩肾，此病理发展过程符合中医以肾为主的肺、脾、肾三脏虚损及气血功能失调，“久病及肾” “久病多瘀” “久病入络”，肾络空虚瘀血浊毒阻滞之慢性肾炎病机。[12]肾络功能发挥和功能受损的现代生物学基础是什么? 是亟待研究的关键命题，也是揭示肾络功能科学内涵的关键环节。由于络脉是沟通表里内外的桥梁，又是气血运行汇聚之处，在病理上成为外邪入侵的道路和传变途径。故经络网状结构、生理功能与现代医学的内质网系统极其相似。将络脉与现代医学生物学中的内质网相联系，成为运用络病理论研究肾脏病变的切入点，作为肾络空虚瘀浊阻滞病机假说的科学依据，从更微观的角度给予更好的阐述。

本研究选用中医补益肝肾的代表方——始出于钱乙《小儿药证直诀》的六味地黄丸基础上加味而成的保肾颗粒(系笔者多年临床实践中总结的治疗慢性肾炎的有效方剂)，由生地黄、山药、茯苓、山茱萸、泽泻、党参、黄芪、丹参、白花蛇舌草、黄柏、益母草等组成。“大凡络虚，通补最宜”，方中党参配伍黄芪健脾益气、培元固本，使中州健运、气血冲和，升降之枢得复，气机通畅；“肾者主蛰，封藏之本，精之处也” “精化气” “精气夺则虚”， 黄芪配山药补肾固涩，可减少水谷精微外泄，进一步恢复损伤的正气；生地黄滋补肝肾，肝疏泄正常则所藏之血与肾所藏之精互生，同时有利于药物的正常代谢、湿热的清除；山茱萸配山药平补肾气。本病病程较长，瘀血与体虚并存，稍有不慎则添伤正之忧，故活血化瘀应遵循和缓行瘀，通中有养的原则，忌峻猛破瘀；丹参既能活血又兼补益，是祛瘀而不伤正的首选，益母草活血化瘀、利水消肿，活血药联合参芪地黄汤可益气化瘀、养血活血化瘀，补肾活血、利水以消瘀。使用甘淡平和之茯苓淡渗清利而不伤阴，避免了过分苦寒峻猛伤及脾胃，而不利于水湿之邪的消散；同时茯苓助山药之健运；茯苓与泽泻共泄肾浊，助真阴得复其位。 牡丹皮清泄虚热，兼制山茱萸之温涩。白花蛇舌草、黄柏、土茯苓清热利湿，解毒泻浊。笔者以往的研究表明保肾颗粒可以改善MsPGN模型兔T淋巴细胞免疫功能，提高RBC黏附免疫复合物水平，[13]调节脂代谢、增加肾组织及血清NO水平，[14]调节紊乱了的血浆内皮素、降钙素基因相关肽水平；[15]此方含药血清能拮抗经LPS诱导活化的人肾系膜细胞分泌炎症因子IL-1β、IL-6，即该药可能通过抑制IL-1β、IL-6而减少基质的合成，[16]从而保护肾功能。

本实验研究结果显示，中药组、对照组与模型组比较，Scr降低，说明大鼠肾功能有所恢复，且中药组与对照组作用相当。采用TUNEL检测发现空白组肾组织细胞凋亡不明显，模型组有大量的肾组织细胞凋亡，中药组及对照组凋亡较轻。应用Q-PCR和Westernblot技术检测分析GADD153/CHOP在慢性肾炎肾组织中的表达,结果显示，模型组、中药组及对照组肾组织中GADD153/CHOP及GADD153/CHOPmRNA的表达明显高于空白组，说明模型组、中药组及对照组大鼠肾组织中均发生了ERS。这可能与慢性肾炎肾纤维化后的血供减少，局部组织缺氧等，进而激活GADD153/CHOP基因的启动因子，引起GADD153/CHOP的过度表达。持续长时间的ERS必将启动凋亡程序，引发肾脏细胞凋亡，使病情恶化。中药组、对照组与模型组比较GADD153/CHOP及GADD153/CHOPmRNA水平均下调，说明保肾颗粒及雷公藤多甙片具有减轻ERS的作用，而中药组的效果与对照组相当。

正如笔者推测的慢性肾炎“虚损肾络—内质网应激”具有一定的相关性，[17]肾络空虚瘀浊阻滞的物质基础之一是内质网相关蛋白GADD153/CHOP的高表达；保肾颗粒能降低大鼠血清肌酐，减轻肾脏病理损害，其机制可能与下调MsPGN大鼠肾组织GADD153/CHOP表达有关。作为双刃剑的ERS，笔者已经发现慢性肾炎虚损肾络时发生了ERS，在MsPGN中发挥其他作用与否仍需要进一步探索，保肾颗粒在减轻ERS的同时是否还可以通过其他作用途径保护肾组织，延缓肾功能进一步恶化，还需要不断证实。

[1]PingH,ZhangX,XingN.PrevalenceofchronickidneydiseaseinChina:across-sectionalsurvey[J].Lancet, 2012, 380(9 838):214-216

[2]TardifKD,WarisG,SiddiquiA,etal.virus,ERstress,andoxidativestress[J].TrendsMicrobiol，2005,13(4)：159-163

[3] 邢同岳，江振洲，苏钰文，等.内质网应激介导的肾脏损伤及干预和保护策略[J].药学进展，2012,36(10)：445-451

[4]王芳，张小楠，杨成君，等.内质网应激在蛋白尿致肾脏损伤中的作用研究进展[J].中国老年学杂志，2013，33(23)：6 061-6 063

[5]InagiR.Preconditioningwithendoplasmicreticulumstressamelioratesmesangioproliferativeglomerulonphritis[J].JAmSocNephrol,2008,19(5)：915-922

[6]EeftingF,RensingB,WigmanJ,etal.Roleofapoptosisinreperfusioninjury[J].CardioVascRes,2004,61(3):414-426

[7]KimI，XuW，ReedJC.Celldeathandendoplasmicreticulumsterss：diseaserelevanceandtherapeuticopportunities[J].NatReuDrugDiscou,2008,7(12):1 013-1 030

[8]SilvaRM,RiesV,OoTF,etal.CHOP/GADD153isamediatorofapoptoticdeathinsubstantianigradopamineneuronsinaninvivoneurotoxinmodelofparkinsonism[J].JNeurochem, 2005, 95(4):974-986

[9]MihailidouC,PapazianI,PapavassiliouAG,etal.CHOPdependentregulationofp21/waf1duringERstress[J].CellPhysiolBiochem, 2010, 25(6):761-766

[10]徐进秀，焦安钦.肾小球肾炎与痰瘀毒关系的探讨[J].河北中医药学报，2005，20(1):15-16

[11]吴以岭.络病病机特点与病机变化[J].疑难病杂志，2004，3(5)：282-284

[12]贾秀琴，张晓丽，杨继红，等.基于现代文献的慢性肾脏病肾络研究[J].中国中西医结合肾病杂志， 2016，17(8)：751-752

[13]王园，贾秀琴，李明，等.保肾冲剂对系膜增生性肾小球肾炎模型红细胞免疫功能和膜分子CD35、CD58的影响[J].中国药师，2006，9(7)：595-597

[14]贾秀琴，龚学忠，刘立昌，等.保肾冲剂对系膜增生性肾炎兔脂代谢、一氧化氮的影响[J].中国中医药科技，2002，9(3)：139-140

[15] 贾秀琴，龚学忠，张永锋，等.保肾冲剂对系膜增生性肾炎模型内皮素、降钙素相关基因肽的影响[J].中国中西医结合急救杂志，2003，10(2)：81-83

[16]龚学忠，贾秀琴，李雪梅，等.加味参芪地黄汤含药血清对人系膜细胞分泌细胞因子的影响[J].中国中医药信息杂志，2002，9(7)：20-21

[17]贾秀琴，张晓丽，张李兴，等.慢性肾小球肾炎肾络—内质网应激相关性探讨[J].现代中西医结合杂志，2013 ，22(24)：2 706-2 707

(2017-01-10 收稿)

Expression of Endoplasmic Reticulum Stress Associated Protein GADD153/CHOP in Nephridial Tissue with Mesangial Proliferative Nephritis and Intervention with Chinese Medicine First Affiliated Hospital of Shenzhen University No. 2 People's Hospital of Shenzhen

JIAXiu-qinCAOMei-qunYANGMinLILi-minNIXin-qiang

(Shenzhen 518035)

Objective: to study the expression of GADD153/CHOP (growth arrest and DNA damage inducible gene 153/E-EBP homologous Protein) in MsPGN (mesangial proliferative glomerulonephritis), and the intervention of Chinese medicineBaoshenKeli(Kidney-preservationGranules),andtoexplorethefunctionalmechanismintreatingMsPGN.Methods:theratswererandomlydividedintoChinesemedicinegroupwithBaoshenKeli,controlgroupwithGlucosidorumTripterygllTotorum,modelgroupandblankgroupwithintragastricadministrationofthesamevolumeofphysiologicalsaline,for14weekssuccessively.Onedaybeforetheadministrationandaftertheexperiment,detectSCrofeachgroup,detectthroughTUNELthenephridialapoptosisandFQ-PCR(fluorescentquantitationpolymerasechainreaction),anddetecttheGADD153/CHOPexpressionsthroughWesternblot.Results:comparedwithmodelgroup,SCrincontrolgroupandChinesemedicinegroupweredecreasedsignificantly(P<0.05).Noobviousapoptosisshowedinblankgroupwhileitwasgreatinmodelgroup,andtheapoptosisinChinesemedicinegroupandcontrolgroupwereless.Comparedwithmodelgroup,GADD153/CHOPandGADD153/CHOPmRNAexpressionsdecreased(P<0.05).Conclusion:TheincreaseofGADD153/CHOPexpressionofMsPGNratsindicatesthattheendoplasmicreticulumstressmaybeinvolvedinkidneydamage;BaoshenKelihasagooddepressanteffectonGADD153/CHOPexpressions,equivalenttoGlucosidorumTripterygllTotorum,whichmaybeoneofthemechanismsinlesseningthekidneydamages.

MsPGN; GADD153/CHOP; endoplasmic reticulum stress; Chinese medicine;BaoshenKeli;GlucosidorumTripterygllTotorum;Deficiencyandexcessinsuperficiality;kidneydeficiency;kidneycollaterals

*深圳市科技创新委基础研究项目：No.JCYJ20140414170821241

R

A

1007-5615(2017)01-0001-05

△ 深圳市老年医学研究所(深圳 518035)