耐碳青酶烯类铜绿假单胞菌相关耐药基因及Ⅰ型整合酶基因探讨

罗 涛，林建萍，吴晓鸥

（温州市人民医院检验科， 浙江 温州 325000）

耐碳青酶烯类铜绿假单胞菌相关耐药基因及Ⅰ型整合酶基因探讨

罗 涛，林建萍，吴晓鸥

（温州市人民医院检验科， 浙江 温州 325000）

目的针对耐碳青酶烯类铜绿假单胞菌相关耐药基因及Ⅰ型整合酶基因展开讨论，为日后的临床工作提供参考与指导。方法在本次研究中，共计选择了51株铜绿假单胞菌，其中包括了耐亚胺培南铜绿假单胞菌，包括了美罗培南铜绿假单胞菌。所有的研究样本，均选择2013年4月—2015年4月。在临床研究中，选择应用聚合酶链反应法，针对耐碳青酶烯类铜绿假单胞菌的耐药基因，以及Ⅰ型整合酶基因进行分析。结果针对选取的51株耐亚胺培南以及美罗培南铜绿假单胞菌的标本，发现SPM金属酶基因、GIM金属酶基因均表现出了阴性的特点；对于16株IMP，以及5株VIM型的金属酶基因检测，发现最终的结果表现为阳性；针对14株耐亚胺培南铜绿假单胞菌的oprD2基因实施检测，最终发现为阳性；剩余的37株铜绿假单胞菌的oprD2的基因检测结果，则表现为阴性。结论耐碳青酶烯类铜绿假单胞菌经过分析以后，发现抗菌耐药的主要原因，主要是集中在膜孔蛋白oprD2基因缺失方面，次要的原因在于金属酶的出现。在临床研究中，认为Ⅰ型整合酶基因，会在铜绿假单胞菌当中广泛的存在。为此，在今后的医疗工作当中，需要加强对耐药基因在病原菌种属之间的传播检测、扩散检测工作，减少耐药情况的发生，帮助患者取得更好的康复。

耐碳青霉烯；铜绿假单胞菌；耐药基因；Ⅰ型整合酶

在临床医疗工作中，铜绿假单胞菌，已经成为了医院感染的主要病原菌，该病菌能够引起的疾病是非常的多样的，同时对医院内部的医疗工作将造成很大的负面影响，包括呼吸病房的疾病传染、重症监护病房的疾病传染等等[1]。在研究过程中，发现铜绿假单胞菌表现出了很强的耐药性，其能够对患者本身造成的伤害较大，特别是产生的感染迁徙现象，将导致患者出现多种并发症，甚至是死亡。对于耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌而言，造成的负面影响更加严重。文章针对耐碳青酶烯类铜绿假单胞菌相关耐药基因及Ⅰ型整合酶基因展开讨论，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

在本次研究中，共计选择了51株铜绿假单胞菌，其中包括了耐亚胺培南铜绿假单胞菌，包括了美罗培南铜绿假单胞菌。所有的研究样本，均选择2013年4月—2015年4月。在该研究期间内，51株铜绿假单胞菌的采取，选择的是临床各类标本。其中，痰液标本占有45株，分泌物标本占据1柱，尿液标本占据2株，腹水标本占据1株，胆汁标本占据2株。上述的所有标本，均来自于ICU当中。

1.2 方法

在临床研究中，选择应用聚合酶链反应法，针对耐碳青酶烯类铜绿假单胞菌的耐药基因，以及Ⅰ型整合酶基因进行分析。本次研究当中，主要是选择应用法国生物梅里埃公司生产的ATB细菌鉴定仪，针对选定的菌种样本实施鉴定分析[2]。研究方法的选择中，主要是通过K-B纸片扩散法，将抗菌药物的敏感性，做出合理的测定、分析。与此同时，在M-H琼脂以及药敏纸片的选择上，均采购于英国Oxiod公司的产品[3]。在聚合酶链反应法的操作当中，选择应用蛋白酶K消化法，将病原菌当中的各种物质有效的提取分析，包括病原菌的DNA，IMP、VIM、SPM、GIM、oprD2、intÑ1基因PCR扩增引物序列。在PCR产物的测序工作当中，将PCR纯化产物，送往专业的公司进行测序分析，所得到的测序结果，应用BLAST针对所有的基因序列，进行有效的对比分析。同时，为保证最终的结果可以高度的符合，选择应用VEC TOR NTI9.0软件，将所有得到的序列，开展进化树分析。

2 结果

针对选取的51株耐亚胺培南以及美罗培南铜绿假单胞菌的标本，发现SPM金属酶基因、GIM金属酶基因均表现出了阴性的特点；对于16株IMP，以及5株VIM型的金属酶基因检测，发现最终的结果表现为阳性；针对14株耐亚胺培南铜绿假单胞菌的oprD2基因实施检测，最终发现为阳性；剩余的37株铜绿假单胞菌的oprD2的基因检测结果，则表现为阴性。

3 讨论

从时间上分析，在20世纪90年代的初期，碳青霉烯类抗菌药物，在临床上的应用范围开始不断的扩大，同时也成为了非常重要的光谱抗菌药物。一般而言，碳青霉烯类抗菌药物，其隶属于新型的β酰胺类抗菌药物，比较突出的药物代表，包括亚胺培南、美罗培南等。在现阶段的医疗工作当中，治疗多药耐药的铜绿假单胞菌，其能够引起的感染比较多，但是在可供选择的抗菌药物上，则表现出了较少的特点，临床医疗工作存在很大的局限性。为此，有必要针对耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌相关耐药基因实施检查，而对于Ⅰ型整合酶基因的分析，也需要更加深入的开展，否则很难保证抗菌药物使用的合理性。

综上所述，耐碳青酶烯类铜绿假单胞菌经过分析以后，发现抗菌耐药的主要原因，主要是集中在膜孔蛋白oprD2基因缺失方面，次要的原因在于金属酶的出现。在临床研究中，认为Ⅰ型整合酶基因，会在铜绿假单胞菌当中广泛的存在。为此，在今后的医疗工作当中，需要加强对耐药基因在病原菌种属之间的传播检测、扩散检测工作，减少耐药情况的发生，帮助患者取得更好的康复。

[1] 汤凤珍，陈惠玲，张伟红.耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌相关耐药基因及Ⅰ类整合子的研究[J].现代医院，2010，03(02)：26-28.

[2] 石庆新，叶黎红，许成新.重症监护室耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌相关耐药基因的研究[J].中国现代医生，2012，07(08)：29-30+32.

[3] 赵丽瑞，袁恒杰.碳青霉烯类抗菌药物耐药机制研究进展[J].中国药房，2012，40(10)：3828-3830.

本文编辑:贺 攀

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ISSN.2095-8242.2017.01.0636.01