山羊接种小反刍兽疫疫苗后不同检测试剂的检测效果田间试验

李芳++苏益琼++罗生++覃周岚++覃万福++吴双燕++余波++经孝红++施佳露++梁丽娟

摘要 为了切实掌握山羊小反刍兽疫疫苗免疫状况，评估免疫效果。通过用不同厂家的试剂盒来评估小反刍兽疫疫苗的大田效果，其中一种是由青岛立见诊断技术发展中心生产的小反刍兽疫阻断ELISA抗体检测抗体试剂盒，另一种为法国ID-VET生产的ID Screen？誖PPR Competition小反刍兽疫抗体检测试剂盒。结果表明，其检测结果一致，只是法国ID-VET生产的试剂盒检测的OD值较青岛立见的高0.07。说明国产试剂盒与进口试剂盒效果一致，但青岛立见的试剂盒经济实惠许多。

关键词 山羊；小反刍兽疫；疫苗；检测试剂；效果；田间试验

中图分类号 F858.27 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）01-0233-01

小反刍兽疫（Peste des Petits Ruminants，PPR）也称羊瘟，是由副粘病毒科麻疹病毒属的小反刍兽疫病毒（PPRV）引起的，以发热、口炎、腹泻、肺炎为特征的一种急性接触性传染病。山羊和绵羊易感，山羊发病率和死亡率均较高。该病是我国的一类动物疫病，OIE规定疫情必须上报[1]。2014年在我国大范围暴发，一直呈扩大趋势，成为了严重危害畜牧业生产安全的重大跨国动物疫病之一[2]。2014年我国农业部共发布小反刍兽疫疫情260起，涉及21个省份，给我国的养羊业造成了巨大损失[3]。2015年我国将其列为强制免疫病种，为了准确掌握山羊小反刍兽疫疫苗临床免疫状况和评估免疫效果，研究了小反刍兽疫疫苗不同剂量免疫接种山羊的田间试验，现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 疫苗。试验所使用疫苗为政府采购，由新疆天康畜牧生物技术股份有限公司生产（批号：2015005-1，规格100头份/瓶；批号：2016020，规格50头份/瓶），冻干苗。试验用疫苗均取自广西鹿寨县疫苗储备库。

1.1.2 试验羊场。临床免疫试验羊场为鹿寨县中渡镇、平山镇、黄冕镇的8家羊场，中渡镇、平山镇的羊场位于山脚，天然防疫屏障良好，饲养的是本地山羊，方式为放养，黄冕镇的羊场为圈养；场主经验丰富，注重防疫，管理意识较强。

1.1.3 检测试剂。小反刍兽疫阻断ELISA抗体检测抗体试剂盒（批号：201513）由青岛立见诊断技术发展中心生产；小反刍兽疫抗体检测抗体试剂盒（ID Screen？誖PPR Competition，批号：923）由法国ID-VET生产。

1.2 试验方法

1.2.1 免疫试验。严格按照说明书操作，每只羊皮下注射疫苗1头份，免疫接种后对羊只进行临床观察。2015年采集注射批号为2015005-1的小反刍兽疫疫苗的羊场5个，免疫4周后每个场采集15份血样，分离血清，冷冻待检。2016年采集注射批号2016020的小反刍兽疫疫苗的羊场3个，免疫4周后每个场采集22份血样、分离血清，冷冻待检。

1.2.2 检测方法。阻断ELISA抗体检测抗体试剂盒，用青岛立见诊断技术发展中心生产的试剂盒检测血清中的PPRV抗体（阻断ELISA法，PB>50为阳性），严格按试剂盒的操作说明及判定标准进行；竞争酶联免疫吸附试验（GB/T 27982—2011）[4]，用法国ID-VET生产的ID Screen？誖PPR Competition小反刍兽疫抗体检测试剂盒检测血清中的PPRV抗体（竞争ELISA法，S/N≤50%为阳性），严格按试剂盒的操作说明及判定标准进行。

2 结果与分析

临床应用安全性好，免疫后的羊只采食正常，精神状况良好，没有免疫反应死亡，生长发育正常。免疫4周后抗体检测结果见表1。

2015年随机抽取5个场，其中4个场的抗体转阳率都超过农业部规定的70%，而C场的抗体转阳率只有13.33%，可能是操作失误致使疫苗失效所致。2016年随机抽取3个场，其中2个场的抗体转阳率都超过农业部规定的70%，而F场的抗体转阳率为54.17%，原因是当年出生的小羊还未进行免疫。随机抽取的2016年的抗体转阳率比2015年高5.82个百分点，说明养殖户的防疫水平有了进一步的提升。

通过比较，试剂盒竞争ELISA法与阻断ELISA法的检测的结果一致，只是OD值相差0.070，基本可以忽略，另外，在操作方法上，阻断ELISA试剂盒比竞争ELISA试剂盒的洗涤次数多1次，时间较长，但从经济效益考虑，青岛立见生产的阻断ELISA试剂盒（平均约12元/份）比法国ID-VET生产的竞争ELISA试剂盒（平均约30元/份）经济实惠许多[5-6]。

3 结论

通过试验，所有免疫动物接种后没有出现明显的免疫副反应，说明该疫苗具有良好的免疫安全性，可以大规模使用。同时，试剂盒竞争ELISA法与阻断ELISA法的检测结果一致，仅OD值相差0.070，且阻断ELISA试剂盒比竞争ELISA试剂盒更经济实惠。

4 参考文献

[1] 薛青红，印春生，李 宁，等.小反刍兽疫活疫苗效力评[J].中国兽医学报，2011，31（9）：1276-1278.

[2] 龙云凤，刘晓慧，周晓黎，等.小反刍兽疫流行病学及防控研究进展[J].动物医学进展，2012，33（5）：94-98.

[3] 王昌建，林源，何世成，等.湖南省小反刍兽疫防控措施及评估[J].畜牧兽医科技信息，2015（7）：19-20.

[4] 刁新育，杨林.基层动物疫病监测指导手册[M].北京：中国农业出版社，2013：75-76.

[5] 张东东，宁宜宝，刘灿，等.两种猪瘟病毒ELISA抗体检測试剂盒对疫苗免疫猪血清抗体检测的比较试验[J].中国兽医杂志，2016（7）：28-29.

[6] 李娟，陈震，霍子威，等.残余牛血清白蛋白含量检测试剂盒抗干扰性研究[J].微生物学免疫学进展，2010（4）：39-41.