基因CKLFSF8转染对肿瘤细胞EGFR表达的影响

朱慧敏，王晋

（1.漯河医学高等专科学校第三附属医院，河南 漯河 462000；2.漯河医学高等专科学校，河南 漯河 462000）

基因CKLFSF8转染对肿瘤细胞EGFR表达的影响

朱慧敏1，王晋2

（1.漯河医学高等专科学校第三附属医院，河南 漯河 462000；2.漯河医学高等专科学校，河南 漯河 462000）

目的研究趋化因子CKLFSF8对BGC823肿瘤细胞表皮生长因子受体（EGFR）的影响。方法用带有绿色荧光蛋白的目的基因检测脂质体介导的转染率，然后将目的基因CKLFSF8转染BGC823肿瘤细胞中，实验分为对照组和空白对照组。倒置显微镜下观察细胞生长状态，免疫细胞化学法检测肿瘤细胞EGFR的表达。结果目的基因CKLFSF8转染BGC823肿瘤细胞，免疫细胞化学法检测肿瘤细胞EGFR，结果显示CKLFSF8基因转染BGC823肿瘤细胞EGFR表达的阳性率比较，转染前后阳性率分别为（95.0±3.58）%和（68.9±3.89）%，两者相比有显著性差异（P＜0.05）。结论基因CKLFSF8抑制BGC823肿瘤细胞EGFR的表达。

CKLFSF8；肿瘤细胞；EGFR

趋化因子是一组具有趋化活性的小分子蛋白质，在免疫防御过程中发挥重要作用，并可参与免疫病理损伤[1]。同时，研究[2]表明，趋化因子与肿瘤的生物学行为密切相关。趋化素样因子超家族成员8（chemokine-like factor super family,CKLFSF8）是新近发现的新型人类趋化因子[3]。有研究发现，大多数细胞体内基本都有该趋化因子的表达，在肺脏、肝脏和胰腺细胞内高度表达，但是CKLFSF8在某些肿瘤细胞和肿瘤组织中也有表达的，然而关CKLFSF8对胃癌细胞表皮生长因子影响的研究尚未见到报道。为了探讨趋化因子CKLFSF8在胃癌中的发生发展作用，我们实验室选择胃癌细胞株BGC823为实验研究对象，观察新型细胞因子CKLFSF8对胃癌细胞株BGC823表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）表达的影响。

1 材料和方法

1.1 材料 人胃腺癌细胞株BGC823由郑州大学干细胞研究中心提供。转染试剂脂质体TM2000购自Invitrogen公司，山羊抗人EGFR试剂盒购自森斯科公司，免疫细胞化学试剂盒购自森斯科公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞的培养 将肿瘤细胞BGC823接种于含15%的小牛血清RPMI-1640培养液中，置37oC，5%CO2培养箱中培养。当细胞增殖达到90%以上时，用0.25%的胰蛋白酶37oC消化细胞1 min，接种密度为1×106个/mL，细胞进行传代培养。按照脂质体转染试剂盒说明进行基因转染。以带绿色荧光蛋白的质粒Pegfp-CKLFSF8转染BGC823细胞系检测转染率。用倒置荧光显微镜观察转染后的荧光蛋白的表达。转染48 h，取出3组细胞爬片，用免疫细胞化学的方法检测EGFR的表达情况。依次在标本片上滴加1:500稀释的山羊抗人EGFR抗体，PBS冲洗后，滴加辣根过氧化物酶标记的小鼠抗山羊二抗，DAB显色，计算EGFR阳性表达率，阳性率=（阳性细胞数/细胞总数）×100%。

1.2.2 统计学方法 数据用SPSS 11.0 软件进行数据分析，计数资料采用率（%）表示，组间比较采用χ2检验；计量资料采用均数±标准差（Mean±SD）表示，组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胃癌肿瘤细胞结果 胃癌肿瘤细胞培养，传至三代的BGC823细胞样细胞形态，大小均匀，形态规则。

2.2 基因转染后对肿瘤细胞EGFR表达的影响 基因CKLFSF8转染前，EGFR具有较高表达率，大多数细胞的细胞膜是呈现棕黄色，阳性率为（95.0±3.58）%。而转染基因CKLFSF8后EGFR的表达率有所降低，只有少量细胞的细胞膜呈现棕黄色，阳性率为（68.9±3.89）%，两者相比具有统计学差异（P＜0.05）。

3 讨论

趋化因子是一小分子结构相似的家族蛋白质，它有四个位置保守的半胱氨酸残基以保证其三级结构。根据其氨基酸序列可分为CXC（α）、CC（β）、C（δ）和CX3C（γ）4个亚家族，C代表半胱氨酸，X代表任一氨基酸。基因CKLFSF8是由北京大学人类疾病基因研究中心最新发现的新型人类趋化因子。基因CKLFSF8位于第3号染色体（3p23）上，其cDNA全长1185 bp，其中第295 816位核苷酸编码173个氨基酸组成的CKLFSF8蛋白分子。在该实验研究中，将基因CKLFSF8转染入肿瘤细胞BGC823细胞中，观察对肿瘤细胞BGC823的影响，结果发现转染后细胞的增殖被明显抑制，与对照组相比有统计学差异。可见，基因CKLFSF8抑制BGC823肿瘤细胞EGFR的表达。

[1]Tanaka T,Bai Z,Srinoulprasert Y,et al.Chemokines in tumor progression and metastasis [J].Cancer Sci,2005,96(6):317-322.

[2]Koizumi K,Hojo S,Akashi T,et al.Chemokine receptors in cancer metastasis and cancer cell-derived chemokines in host immune response [J].Cancer Sci,2007,98(11): 1652-1658.

[3]Murooka TT,Ward SE,Fish EN.Chemokines and cancer [J].Int J Cancer,2004,119(45): 53.