房颤射频消融术前后血浆miR-328表达变化及临床意义

李 冰, 卢 慧

(1. 大连医科大学附属第一医院 检验科，辽宁 大连 116011; 2. 大连医科大学附属第一医院 心血管检查科，辽宁 大连 116011)

论 著

房颤射频消融术前后血浆miR-328表达变化及临床意义

李 冰1, 卢 慧2

(1. 大连医科大学附属第一医院 检验科，辽宁 大连 116011; 2. 大连医科大学附属第一医院 心血管检查科，辽宁 大连 116011)

目的 探讨血浆miR-328在不同类型房颤患者的射频消融术前后的表达变化,为进一步探讨房颤发病机制提供新方向。方法 选取从2015年3月至2016年1月期间在大连医科大学附属第一医院行射频消融术的心房颤动患者60例作为房颤组，选择同期大连医科大学附属第一医院体检中心的健康体检者20例作为正常对照组。使用实时荧光定量PCR技术检测正常对照组及不同类型房颤组手术前后血浆miR-328表达水平的变化。结果 房颤组血浆miR-328同对照组比较表达上升。血浆miR-328在房颤组射频消融术前后相对表达量分别为2.04±0.31和1.12±0.06，术后同术前比较表达下降，差异均有显著性意义，P<0.05;血浆miR-328在阵发性房颤、持续性房颤和永久性房颤中相对表达量分别为1.85±0.23、2.13±0.36和2.72±0.93，表达逐渐升高，组间比较差异均有统计学意义，P<0.05。结论 miR-328同房颤病情发展密切相关，可能参与调控房颤的发病机制。

miR-328；心房颤动；导管消融术

心房颤动，简称房颤(atrial fibrillation, AF)，是临床心内科最为常见的心律失常疾病之一，随着人均期许寿命的延长，房颤的发病率不断增加[1]。房颤的危害严重，最大程度降低病死率、致残率，延长房颤患者生命，提高患者生活质量成为房颤治疗的最终目标。目前房颤发病机制尚未明确，因此在房颤治疗和预后方面难以取得突破。近年来，房颤发病机制逐渐成为房颤乃至心律失常领域的热点。随着医学技术的发展，房颤治疗已经取得了一定的进展，但是在房颤术后复发、疗效评估和预后判断方面仍面临诸多问题，其根本原因是发病机制尚未明确。现已发现多种miRNAs调节心脏离子通道、钙离子结合蛋白、转运蛋白以及其他相关基因。当这些相关蛋白的基因突变、功能紊乱或表达失调都可以诱发和导致心脏电生理紊乱从而导致心律失常甚至房颤的发生[2]。近年来，miR-328在肿瘤、心血管疾病方面相关研究报道逐渐增多，动物模型和心肌细胞中miR-328的表达变化同心血管疾病存在一定的关联，miR-328在心律失常尤其是房颤方面的研究已成为热点。本文通过检测血浆miR-328在不同类型房颤患者射频消融术前后的表达变化，拟为进一步探讨房颤发病机制提供新方向。

1 资料与方法

1.1 临床标本收集

选取从2015年3月到2016年1月期间在大连医科大学附属第一医院入院并行射频消融术的心房颤动患者60例作为房颤组，平均年龄为(64.55±6.34)岁，男性34例，女性26例。其中阵发性、持续性和永久性房颤患者分别为26例、19例和15例。选择同期在大连医科大学附属第一医院体检中心的健康体检者20例作为正常对照组，平均年龄(63.78±5.35)岁，男性11例，女性9例。

房颤组排除标准：年龄>80岁,甲状腺功能亢进,糖尿病,血压控制不良者,左心室功能减低(LVEF<40%),严重冠状动脉疾病,肝、肾功能障碍，急慢性感染性疾病，心肌结构性病变，伴有恶性肿瘤。本研究里，服用β受体阻滞剂、血管紧张素转换酶抑制剂、血管紧张素受体抑制剂或是他汀类的患者不影响入选。健康对照组年龄、性别与房颤组无明显差异，无明显循环系统、呼吸系统、消化系统、生殖泌尿系统疾病。本研究涉及的被测试者都已告知了研究目的，并签署了知情同意书。房颤术后1个月患者均无明显心悸、气短及胸部不适等症状并经24 h动态心电图检查均未发现房颤现象。

1.2 实验方法

房颤患者行射频消融术前和术后1个月,正常对照组体检时，分别抽取外周静脉血3 mL，分别置于EDTA抗凝管中，4 h内分离血浆，1500 r/min，离心15 min，吸取上清液放于经高压过的EP管中，并储存在-80 ℃冰箱备用。

利用德国凯杰公司RNA提取试剂盒提取总RNA,反转录后进行荧光实时定量PCR,反应条件：95 ℃ 6 min;95 ℃ 12 s,62 ℃ 40 s,组内重复3次取平均值，以Ct值表示，miR-328的相对表达量用2-ΔΔCt表示。引物序列如下： HmiR-328-FO，TGGTACTGCTGGCCCTCTCT； HmiR-328-RE，TATGGTTGTTCACGACTCCTTCAC；H-U6-FO，ATTGGAACGATACAGAGAAGATT；H-U6-RE，GGAAC-GCTTCACGAATTTG。

将实验结果中对照组表达量测定设定为1.00±0.00，其他各组数据与对照组数据比较，得到相对表达量。

1.3 统计学方法

2 结 果

房颤组血浆miR-328在射频消融术前后相对表达量分别为2.04±0.31和1.12±0.06，术前表达上升，同对照组比较差异显著，有统计学意义，P<0.05。而术后则表达明显下降。同术前比较差异有统计学意义。

血浆miR-328在阵发性房颤、持续性房颤和永久性房颤中相对表达量分别为1.85±0.23、2.13±0.36和2.72±0.93 ，同对照组相比均表达上升；而且表达量逐渐增加，组间比较差异均有统计学意义，P<0.05。术后血浆miR-328相对表达量同对照组比较以及不同类型房颤组相比较差异均无统计学意义，P>0.05。见表1。

表1 血浆miR-328在不同类型房颤患者射频消融术前后表达量比较

Tab 1 Comparison of plasma miR-328 expression in patients with different types of atrial fibrillation before and after radiofrequency catheter ablation

对照组(n=20)阵发性房颤组(n=26)持续性房颤组(n=19)永久性房颤组(n=15)术前1.00±0.001.85±0.231)2.13±0.361)2)2.72±0.931)2)3)术后1.00±0.001.07±0.091.22±0.071.09±0.03

1)与对照组比较，P<0.05；2)与阵发性房颤组比较，P<0.05；3)与阵发性房颤和持续性房颤组比较，P<0.05

3 讨 论

近年来，研究发现许多miRNA与心房颤动的发生发展关系十分密切，还有一些根据其作用的靶基因可以推测其可能具有调节房颤的潜在作用和功能。现有研究已经证实，miRNA表达变化是深入研究房颤发生机制的一个潜在领域[3]。近几年有文献报道miRNA能够稳定存在于人体各种体液中，有可能参与房颤发生发展，此外，在指导用药和选择治疗方式以及判断疾病的疗效和复发方面也发挥重要作用[4]。

miRNA是对一类长度为18～25个核苷酸的小RNA的总称，这种RNA不能进行编码，但可与靶基因上的mRNA 3' UTR区的互补位置进行结合，使靶基因降解或失活，从而对靶基因的表达进行调控,是目前所知的重要的基因表达负调控机制之一。miRNA对肿瘤疾病、心血管疾病、神经系统疾病、血液系统疾病、各种传染病、细胞的增殖与分化，以及个体的生长发育等都会起到调控作用[5]。在心血管系统疾病的研究中发现，miRNA可参与心血管细胞的发育和增殖以及病理生理状态等各种情况的调控，可能会为基因治疗相关疾病提供依据[6]。

本研究中，房颤患者miR-328表达同地照组比较明显升高，房颤组射频消融术后同术前比较miR-328相对表达量下降。miR-328在心房颤动时普遍表达上调，首先由Lu[7]等验证，他们通过microRNAs表达谱芯片的方法筛查，发现在因快速起搏而导致犬房颤的实验中检测到miR-328水平升高了3.7倍；在风心病合并房颤的患者中表达升高了 3.5倍(而miR-1变化不明显)；而携带miR-328的腺病毒转染鼠房颤易感性增高，相反，miR-328的缺失可以降低鼠房颤的易感性[8]。目前发现，miR-328对L型钙通道表达的抑制是房颤发生的一个机制，且这个机制独立存在就可以导致房颤的发生。通过蛋白印迹等实验手段可以证实：CACNA1(编码 L 型钙通道蛋白α1c 亚基)和 CACNB1(编码 L 型钙通道蛋白β1亚基)是 miR-328 的靶基因[9]。由此可以推断miR-328的表达水平上升可使L型钙通道在细胞中数量减少，使心房肌动作电位平台期和有效不应期缩短，容易发生折返，从而引发房颤。Caveolin-3是一种肌组织特异性成分，可以参与调节心肌组织多种离子通道的功能。有研究发现，miR-328可能通过抑制Caveolin-3的表达，改变离子通道，参与电重构，引起房颤发生[10]。本研究中，随着房颤患者病情的发展，血浆miR-328表达逐渐升高，说明miR-328与房颤患者病情发展密切相关。由此可见，miR-328可能参与调控房颤的发病机制，为进一步研究房颤发病机制以及早期诊断和预后判断提供了新的发展方向。

[1] 郭继鸿. 心房颤动的新理念[J]. 临床心电学杂志,2010,19(5):381-392.

[2] 岳语喃. 房颤患者小分子RNA组学研究结果与分析[J].中国心血管病研究,2014,12(11):997-999.

[3] January CT, Wann LS, Alpert JS, et al. 2014 AHA/ACC/HRS guideline for the management of patients with atrial fibrillation: a report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Practice Guidelines and the Heart Rhythm Society[J]. Am Coll Cardiol,2014, 64 (21):1-76.

[4] Liu Z, Zhou C, Liu Y, et al. The expression levels of plasma micoRNAs in atrial fibrillation patients[J]. PLoS One, 2012, 7(9): e44906.

[5] Wang GK,Zhu JQ,Zhang JT,et al.Circulating microRNA: a novelpotential biomarker for early diagnosis of acute myocardial infarction in humans[J]. Eur Heart,2010,31(6):659-666.

[6] Condorelli G,Latronico MV,Dorn GW. micro RNAs in heartdisease:putative novel therapeutic targets[J]. Eur Heart J,2010,31(6): 649-658.

[7] Lu Y, Zhang Y, Yang B, et al. Micro RNA-328 contributes to adverselectrical remodeling in atrial fibrillation[J]. Circulation, 2010, 122(23): 2378-2387.

[8] 王玺,邱春光,黄振文,等.血浆 miR-328 在心房颤动中的表达水平及其临床意义[J].中华心血管病杂志，2013, 41(2): 126-129.

[9] Zhang L,Hou D,Chen X,et al. Exogenous plant MIR168a specificallytargets mammalian LDLRAP1:evidence of cross-kingdom regulation by microRNA[J].Cell Res,2012,22(1): 107-126.

[10] Luo XJ, Liu B, Dai Z, et al. Expression of apoptosis-associated microRNAs in ethanol-induced acute gastric mucosal injury via JNK pathway[J]. Alcohol, 2013, 47(6): 481-493.

Plasma miR-328 expression changes and clinical significance in patients with atrial fibrillation before and after radiofrequency ablation

LI Bing1, LU Hui2

(1.ClinicalLaboratory,theFirstAffiliatedHospitalofDalianMedicalUniversity,Dalian116011,China; 2.CardiovascularInspectionSection,theFirstAffiliatedHospitalofDalianMedicalUniversity,Dalian116011,China)

Objective To investigate the changes of plasma miR-328 expression levels before and after radiofrequency ablation(RFA) and its correlation with different clinical atrial fibrillation(AF) types and explore the pathogenesis of atrial fibrillation. Methods The plasma miR-328 expression levels were detected in 60 AF patients before and after RFA and 20 healthy PE subjects using real-time fluorescence quantification PCR technique. Results The plasma miR-328 level in atrial fibrillation group was higher than that in control group. The relative expression levels of plasma miR-328 in the AF group before RFA (2.04±0.31) was higher than that after RFA (1.12±0.06),P<0.05. The relative expression levels of plasma miR-328 were 1.85±0.23, 2.13±0.36 and 2.72±0.93 in paroxysmal AF, persistent AF and permanent AF, respectively (P<0.05). Conclusion The plasma miR-328 expression level are associated with AF progression, which would be a prognosis marker of AF treatment.

miR-328; atrial fibrillation (AF); catheter ablation

李 冰(1982-)，男，主管技师。E-mail：libingwork@163.com

卢 慧，主治医师。E-mail:luhuiwork@163.com

10.11724/jdmu.2017.01.05

R446.6

A

1671-7295(2017)01-0023-03

李冰，卢慧.房颤射频消融术前后血浆miR-328表达变化及临床意义[J].大连医科大学学报，2017,39(1)：23-25.

2016-12-02;

2016-12-29)