乙肝相关性肝癌中甲胎蛋白异质体和异常凝血酶原的水平差异

林晓渊

361000福建中医药大学附属厦门市中医院检验科

乙肝相关性肝癌中甲胎蛋白异质体和异常凝血酶原的水平差异

林晓渊

361000福建中医药大学附属厦门市中医院检验科

目的：探讨乙肝相关性肝癌不同HBV-DNA载量组别中血清甲胎蛋白异质体(AFP-L3)和异常凝血酶原(PIVKA-Ⅱ)的水平差异。方法：根据HBV-DNA病毒载量将患者分为低载量组和高载量组，测定PIVKA-Ⅱ及AFP-L3含量，比较组间差异。结果：高载量组中AFP-L3和PIVKA-Ⅱ明显高于低载量组(P＜0.05)。结论：针对不同患者采取适当抗病毒治疗，降低病毒拷贝数，可能有助于改善患者生存期。

乙肝相关性肝癌；乙肝病毒载量；甲胎蛋白异质体；异常凝血酶原

肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，在我国发病率排在第3位，其中乙型肝炎病毒(HBV)感染与肝细胞癌(HCC)的发生发展密切相关。肝癌的发生发展是由多种因素引起的，常见的诱发因素有乙肝病毒慢性感染、丙肝、黄曲霉素及遗传因素等[1]。血清学中甲胎蛋白异质体(AFP-L3)和异常凝血酶原(PIVKA-Ⅱ)是近年来用于肝癌早期诊断及判断预后的重要指标[2，3]。为此本文拟探讨乙肝相关性肝癌患者不同HBV-DNA载量组别中AFP-L3和PIVKA-Ⅱ的差异，现报告如下。

资料与方法

2012年1月-2016年6月收治乙型肝炎相关肝癌患者115例，其中男75例，女40例，平均年龄(51.7±12.9)岁。病例纳入参照2011年卫生部《原发性肝癌诊疗规范》的标准[4]。根据HBV-DNA病毒载量将病例分为低载量组(＜104 IU/mL) 65例和高载量组(≥104 IU/mL)60例。两组一般资料比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)，有可比性。

检测指标及方法：空腹采集患者2 mL外周静脉血，置于真空抗凝管中并分离血清，用于检测血清AFP-L3和PIVKA-Ⅱ的水平，并按照RNA提取试剂盒提取DNA用于HBV-DNA病毒载量测定。PIVKA-Ⅱ采用日本富士G1200化学发光免疫分析仪及配套试剂，严格按照仪器和试剂说明书进行检测；亲和吸附法：从血清中分离AFP-L3，用雅培i2000化学发光免疫分析仪及其原装配套试剂检测AFP-L3含量。HBV-DNA病毒载量采用荧光定量聚合酶链反应，使用厦门安普利生物工程有限公司生产的乙肝肝炎病毒核酸定量检测试剂盒(荧光PCR法)。

统计学方法：采用SPSS 17.0对数据进行统计分析，计量资料用(±s)表示，采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

结果

HBV-DNA病毒高载量组中AFP-L3 和PIVKA-Ⅱ分别为(189.7±56.9)ng/mL 和(1 996.1±359.6)mAU/mL，明显高于低载量组，差异具有统计学意义(均P＜0.05)，见表1。

讨论

我国是个乙肝感染的大国。乙肝患者由于血清中HBV病毒的复制，体内HBV-DNA可被激活并以肝细胞内cccDNA为模板进行大量病毒复制，导致肝细胞损伤及肝功能异常，HBV-DNA病毒载量高低与乙肝相关性肝癌患者肝脏损伤程度具有一定的相关性[5，6]。

随着现在临床诊疗技术的不断发展，目前用于肝癌诊断的标志物主要有甲胎蛋白、AFP-L3、PIVK A-Ⅱ、HCC易感基因等。AFP对原发性肝癌的诊断具有较高的敏感性和特异性，但有35%～40%原发性肝癌患者血清AFP浓度升高变化不明显，有时甚至正常，对于肝癌的早期临床诊断效能比较低，已经无法满足临床的需要。近年来的研究发现，AFP-L3是AFP的一种亚型，根据与植物凝集素(LCA)的结合能力不同分为AFP-L1、 AFP-L2和 AFP-L3， 其 中AFP-L1、AFP-L2为LCA非结合型，而AFP-L3为LCA结合型。不同的甲胎蛋白异质体，其组织来源不同，其中AFP-L1主要来源于慢性肝炎和肝硬化，AFP-L2以孕妇分泌为主，而AFP-L3为肝癌细胞分泌的主要因子。AFP-L3是肝癌组织细胞所特有的，是独立于甲胎蛋白的肝癌诊断因子[7-10]，尤其对于小肝癌及AFP阴性的肝癌患者具有重要的诊断意义。近年来异常PIVKA-Ⅱ也是一种常用于肝癌诊断的标志物，PIVKA-Ⅱ具有较高的特异性、敏感性，且能较好地反映肿瘤生长情况及病理生物学特征，同时也可用于临床预后评估指标，目前也广泛应用于肝癌临床诊疗[11-13]。由于PIVKA-Ⅱ和AFP产生的途径及机制的不同，因此两者在血清中含量是相对独立的，无相关性，联合检测有助于提高肝癌检出的效能。

流行病学调查研究发现，慢性HBV感染者中HCC的危险性比非HBV感染者高约200倍，HBV-DNA病毒载量可反映肝细胞的损伤程度，这可能由于HBV持续的复制导致HBV-DNA与肝细胞DNA整合可导致肝癌的发生发展，HBV-DNA病毒载量可用于评估围手术期肝癌患者的肝功能。本研究中根据HBV-DNA病毒载量不同分组，数据结果显示高载量组(≥104 IU/mL)中AFP-L3和PIVKA-Ⅱ分别为(189.7±56.9)ng/mL和(1 996.1± 359.6)mAU/mL，均高于低载量组(＜104 IU/mL)中 AFP-L3(75.3±23.6)ng/mL和PIVKA-Ⅱ(856.3±239.5)mAU/mL的水平，差异具有统计学意义(t=14.46，20.46，均 P＜0.05)。由于 AFP-L3和PIVKA-Ⅱ是肝癌诊疗预后的重要实验室检测指标，二者的产生途径，在血清中是相对独立的，实验数据显示不同HBV-DNA病毒载量水平中AFP-L3和PIVKA-Ⅱ有差异，因此联合HBV-DNA病毒载量有助于反映乙肝相关性肝癌患者肝功能、诊疗预后，可用于评估围手术期患者的诊疗方案[14]。

HBV-DNA病毒载量水平对乙肝相关性肝癌的肝功能具有一定的影响。围手术期可以针对患者的HBV-DNA病毒载量水平情况选择适当的抗病毒治疗方案，以降低病毒拷贝数，同时联合AFP-L3和PIVKA-Ⅱ的检测对患者病情综合评估，以期改善患者的生活质量及生存预期。

表1 不同HBV-DNA病毒载量中AFP-L3和PIVKA-II的比较(±s)

表1 不同HBV-DNA病毒载量中AFP-L3和PIVKA-II的比较(±s)

HBV-DNA病毒载量 例数 AFP-L3(ng/mL) PIVKA-II(mAU/mL) ＜104 IU/mL 65 75.3±23.6 856.3±239.5 ≥104 IU/mL 60 189.7±56.9 1 996.1±359.6 t 14.46 20.26 P ＜0.05 ＜0.05

[1]王宏利,沙小莹,郭雅玲,等.乙肝相关性肝癌组织中HBx和CEACM1的表达水平及意义[J].中国实验诊断学,2016,20(3): 384-385.

[2]赵惠柳,朱波,欧超.肝癌肿瘤标志物的应用研究现状[J].实验与检验医学,2015,33(5): 523-524.

[3]郭玮.3种血清肿瘤标志物检测在原发性肝癌诊断中价值探讨[J].实验与检验医学, 2014,32(3):315-316.

[4]中华人民共和国卫生部.原发性肝癌诊疗规范[J].临床肝胆病杂志,2011,16(10): 1141-1159.

[5]Nan XP,Zhang Y,Yu HT,et al.Inhibition of viral replication downregulates CD4(+)CD25 (high)regulatory T cells and programmed death-ligand 1 in chronic hepatitis B[J]. Viral Immunol,2012,25(1):21-28.

[6]Dinney CM,Zhao LD,Conrad CD,et al. Regulation of HBV specific CD8(+)T cell-mediated inflammation is diversified in differentclinicalpresentations ofHBV infection[J].J Microbiol,2015,53(10): 718-724.

[7]何兰香,毛智趣,黄海深,等.AFP-L3对肝癌鉴别诊断的临床价值[J].实验与检验学, 2013,31(3):258-259.

[8]章健,叶迎宾,黄秀香,等.高尔基体糖蛋白73与甲胎蛋白异质体百分比及总胆汁酸在原发性肝癌的表达及其临床应用[J].标记免疫分析与临床,2015,22(2):116-118.

[9]陈俊,王利健,骆剑明,等.甲胎蛋白异质体在良、恶性肝病中的鉴别和在早期肝癌中的诊断价值[J].中国卫生检验杂志,2015, 25(3):368-370.

[10]曹立,孙华宝,敖琴芳,等.ROC曲线评价甲胎蛋白异质体对原发性肝癌的诊断价值[J].实验与检验医学,2010,28(5):465-467.

[11]Inagaki Y,Tang W, Makuuchi M, et al. Clinical and molecular insights into the hepatocellularcarcinoma tumourmarker des-γ-carboxyprothrombin[J]. Liver Int, 2011,31(1):22-35.

[12]朱宇,王海,王宏洁,等.血清PIVKA-II在肝癌诊断中的应用[J].临床和实验医学杂志, 2014,13(7):513-516.

[13]Kang K,Kim JH,Kang SH,et al.The influence of alcoholic liver disease on serum PIVKA-Ⅱ levels in patients without hepatocellular carcinoma[J].Gut Liver,2015,9(2):224-230.

[14]Abd E,Gawad IA,Mossallam GI,et al.Comparing prothrombin induced by vitamin K absence-Ⅱ(PIVKA-Ⅱ)with the oncofetal proteins glypican-3,Alpha feto protein and carcinoembryonic antigen in diagnosing hepatocellular carcinoma among Egyptian patients[J].J Egypt Natl Canc Inst,2014,26(2): 79-85.

Differential levels of alpha fetal protein variant and abnormal prothrombin in HBV related hepatocellular carcinoma

Lin Xiaoyuan
Department of Laboratory,the Traditional Chinese Medicine Hospital of Xiamen City Affiliated to Fujian University of Traditional Chinese Medicine 361000

Objective:To explore the differential levels of alpha fetal protein variant(AFP-L3)and abnormal prothrombin(PIVKA-Ⅱ)in HBV related hepatocellular carcinoma with different HBV-DNA load.Methods:According to HBV-DNA viral load,patients were divided into the low load group and the high load group.We measured the content of PIVKA-Ⅱand AFP-L3,and compared the differences between groups.Results:In the high load group,AFP-L3 and PIVKA-Ⅱwere significantly higher than those in the low load group(P＜0.05).Conclusion:For different patients,appropriate antiviral treatment to reduce the number of copies of the virus may help improve patient survival.

HBV related hepatocellular carcinoma;Hepatitis B virus load;Alpha fetal protein variant;Abnormal prothrombin

10.3969/j.issn.100614x.2017.2.80