Megsin基因3个多态性位点与亚洲人群IgA肾病易感性关联的Meta分析*

葛雅婷,苏美玲,宋佳治，熊祖应△,侯 霜▲

(1.安徽医科大学北京大学深圳医院临床学院，广东深圳 518000; 2.北京大学深圳医院肾内科，广东深圳 518000)

Megsin基因3个多态性位点与亚洲人群IgA肾病易感性关联的Meta分析*

葛雅婷1，2,苏美玲2,宋佳治1，2，熊祖应1，2△,侯 霜2▲

(1.安徽医科大学北京大学深圳医院临床学院，广东深圳 518000; 2.北京大学深圳医院肾内科，广东深圳 518000)

目的 通过Meta分析评估亚洲人群Megsin基因3个多态性位点(rs1055901、rs1055902和rs2689399)与IgA肾病易感性的关联。方法 通过中国知网、维普、万方数据库、中国生物医学文献数据库、PubMed、Web of Science和Google学术数据库数据库，电子检索关于亚洲人群Megsin基因rs1055901、rs1055902和rs2689399多态性位点与IgA肾病相关性的研究，检索年限为1960年1月1日开始至2016年5月2日。采用Stata12.0软件计算合并比值比(OR)和95%置信区间(CI)，并进行敏感性及发表偏倚分析。结果 最终纳入6篇文献(含9项研究)，包含2 179例IgA肾病患者和1 769例健康对照。Meta分析结果显示，Megsin基因rs1055901、rs1055902多态性位点与亚洲人群IgA肾病易感性无明显关联。然而，Megsin基因rs2689399位点与亚洲人群IgA肾病易感性呈显著负相关(G和C：OR=0.754，95%CI0.592～0.961，P=0.022；GG和CC：OR=0.506，95%CI0.287～0.892，P=0.019；GG和GC+CC：OR=0.551，95%CI0.316～0.961，P=0.036)。结论 Megsin基因的rs2689399位点的G等位基因、GG基因型可能是亚洲人群IgA肾病的保护因子。

肾小球肾炎,IGA；疾病易感性；连锁不平衡；Megsin；多态性；Meta分析

IgA肾病是全世界范围内常见的原发性肾小球疾病之一，也是导致终末期肾病的主要病因[1]。成年人中每年IgA发病率约2.5/10万[2]。在初次肾活检后20年内，约30%～50%患者会进展为终末期肾病[3]。肾活检是诊断IgA肾病的金标准，其病理学特点主要是IgA为主沉积在系膜区伴系膜细胞和系膜基质增生[4]。近年来，大量研究关注遗传易感基因与IgA肾病的关联，提示遗传因素与环境的交互作用可能作用于该病的发生。

Megsin基因位于染色体18q21.3，主要是丝氨酸蛋白酶(Serpin)超家族成员，在诸多伴有系膜损伤的肾小球疾病的人类及动物模型中，证实Megsin在肾小球系膜细胞中表达上调，介导了系膜基质增多和系膜细胞数量增加，这很可能是IgA肾病的发病机制之一[5-6]。一些研究已经报道了Megsin基因3′段非编码区rs1055901和rs1055902多态性位点与IgA肾病相关性[6-9]；也有研究报道C25663G多态性位点与汉族人群IgA肾病易感性的关系[10-11]，然而这些研究主要是小样本资料的研究，且结果、结论尚未统一。

本研究利用系统性综述的方法，通过增大样本量，提高检验效能，进一步揭示Megsin基因rs1055901、rs1055902及rs2689399 3个多态性位点与亚洲人群IgA肾病的关联，为IgA肾病遗传学研究提供依据。

1 资料与方法

1.1 检索策略 用计算机检索中国知网、维普、万方数据库、中国生物医学文献数据库、PubMed、Web of Science和Google学术数据库，中文以IgA肾病、Megsin、多态性为检索词，英文以“IgA nephropathy OR Immunoglobulin A nephropathy” AND “megsin” AND “variant OR mutation OR polymorphism OR SNP”为检索词。手工检索国内外有关Megsin基因多态性位点与亚洲人群IgA肾病发病风险的文献。所有文献语种只限中、英文，检索时间1960年1月1日至2016年5月2号。

1.2 纳入和排除标准 纳入标准：(1)纳入研究均为病例-对照研究，研究人群为亚洲人；(2)符合IgA肾病诊断标准[12]；(3)关于Megsin基因rs1055901(核苷酸位点C2093T)、rs1055902(核苷酸位点C2180T)及rs2689399(核苷酸位点为C25663G)3个多态性位点与亚洲人群IgA肾病相关性研究；(4)排除基础数据不完整及数据错误的研究，排除非病例对照研究、多态性位点非rs1055901、rs1055902或rs2689399的文献；(5)对于重复发表或资料雷同的研究只保留其中质量最好者。

1.3 文献质量评价及资料提取 对每个纳入的研究参考纽卡斯尔-渥太华量表(Newcastle-Ottawa scale,NOS)[13]标准，从病例-对照对象选择、可比性、结局和暴露3个方面对文献质量评分(其中5～9分为相对高质量的研究)。本分析提取的数据包括纳入研究的作者、发表年限、种族、基因分型方法、对照组来源、Megsin基因病例和对照的例数及其3个位点基因频率。由两位评价者独立提取数据后交叉核对及文献质量评价，不同意见与第三者讨论解决。

1.4 统计学处理 采用STATA12.0软件进行统计学分析。利用5种遗传学模型检测Megsin基因多态性位点和IgA肾病的相关性，包括等位基因模型B和A，显性模型BA+BB和AA，隐性模型BB和BA+A，纯合子模型BB和AA，杂合子模型BA和AA(其中A为野生型位点，B为突变型位点)。使用Q或I2检验分析各研究间的异质性，若P>0.1和I2<50%，则采用固定效应模型；否则采用随机效应模型。采用比值比(OR)值及95%置信区间(CI)作为效应量。各研究的对照组均检测哈迪温伯格平衡(Hardy Weinberg Equilibrium，HWE)。使用敏感性分析评估结果的稳定性及判断每个独立研究对总体OR值有无影响，通过Begg′s及Egger′s检验评估发表偏倚。通过Hapmap数据库，利用Haploview4.0软件，分析Megsin基因rs1055901、rs1055902和rs2689399多态性位点在亚洲人群包括北京汉族人(CHB)及东京日本人(JPT)、非洲人群(伊巴丹约鲁巴人，YRI)及欧洲人群(祖先来自西北欧的犹他州白人，CEU)中的连锁不平衡关系。

2 结 果

2.1 文献检索结果及纳入研究的基本特征 文献筛选流程及结果见图1。最终纳入6篇文献(含9个研究)[6-11]，包含2 179例IgA肾病患者(病例组)和1 769例健康对照(对照组)。研究对象均属于亚洲人群，且对照组与病例组均具有可比性。对于rs1055901多态性位点，共纳入4项研究，包含病例组856例，对照组786例。对于rs1055902多态性位点，共纳入3项研究，包含病例组808例，对照组686例。对于rs2689399多态性位点，共纳入2项研究，包含病例组515例，对照组297例。基因型检测方法包括polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism、sequencing、TaqMan、MassARRAY。纳入研究的基本特征见表1。对纳入研究对照组的基因型频率进行HWE检测，发现有1项研究[11]不符合HWE检验(P<0.05)。

图1 纳入文献流程及结果

SNP作者发表年限基因分型方法TT(CC)基因型例数(病例组/对照组)TC(CG)基因型例数(病例组/对照组)CC(GG)基因型例数(病例组/对照组)HWENOS评分(分)rs1055901Maixnerova等[6]2008sequencing56/1695/3546/100.2159Lim等[7]2008TaqMan33/35106/143121/1370.8008李露等[8]2013PCR-RFLP5/1017/5426/360.1138Wei等[9]2016MassARRAY27/19138/114186/1770.9107rs1055902Maixnerova等[6]2008sequencing53/1192/3352/170.4709Lim等[7]2008TaqMan123/135107/14730/330.4498Wei等[9]2016MassARRAY201/187131/11319/100.1507rs2689399夏运风等[10]2006sequencing277/108169/7225/170.3217李露等[11]2011PCR-RFLP28/4612/364/180.0298

PCR-RFLP：聚合酶链反应-限制性片段长度多态性；HWE：哈迪-温伯格平衡；NOS：纽卡斯尔-渥太华量表。

2.2 文章质量评价 所纳入的研究均为病例-对照研究，病例均来自医院，纳入方法合适，具有统一的诊断标准；对照组的选取标准合适，为体检健康人群。基因型的测量方法准确可靠，研究结果合理可信，且经NOS评分后所纳入的研究也波动在7～9分。因此，所有纳入研究的方法学质量均较高。

2.3 Meta分析结果

2.3.1 rs1055901多态性位点与IgA肾病易感性关系 对于rs1055901多态性位点，共纳入4项研究。Meta分析结果显示rs1055901多态性位点与IgA肾病易感性之间无明显关联(C和T：OR=1.004，95%CI：0.862～1.170，P=0.955；CC和TT：OR=0.953，95%CI：0.672～1.352，P=0.788；CT和TT：OR=0.788，95%CI0.562～1.105，P=0.168；CT+CC和TT：OR=0.853，95%CI0.620～1.175，P=0.331；CC和CT+TT：OR=1.187，95%CI0.836～1.686，P=0.338)，见表2。

2.3.2 rs1055902多态性位点与IgA肾病易感性关系 对于rs1055902多态性位点，共纳入3项研究。结果显示，rs1055902多态性位点与IgA肾病易感性无明显关联(C和T：OR=0.993，95%CI0.843～1.169，P=0.933；CC和TT：OR=1.049，95%CI0.708～1.555，P=0.810；CT和TT：OR=0.898，95%CI0.718～1.125，P=0.350；CT+CC和TT：OR=0.937，95%CI0.756～1.161，P=0.552；CC和CT+TT：OR=1.159，95%CI0.809～1.661，P=0.420)，见表2。

2.3.3 rs2689399多态性位点与IgA肾病易感性关系 对于rs2689399多态性位点，共纳入2个研究。结果显示，rs2689399等位基因模型、纯合子模型及隐性模型与IgA肾病易感性呈显著负相关(G和C：OR=0.754，95%CI0.592～0.961，P=0.022；GG和CC：OR=0.506，95%CI0.287～0.892，P=0.019；GG和GC+CC：OR=0.551，95%CI0.316～0.961，P=0.036)。而杂合子模型及显性模型与IgA肾病易感性无明显关联(GC和CC：OR=0.839，95%CI0.608～1.159，P=0.287；GC+GG和CC：OR=0.769，95%CI0.568～1.042，P=0.090)。

表2 Megsin基因rs1055901、rs1055902和rs2689399多态性与IgA易感性Meta分析结果

OR：比值比；CI：置信区间；PH：异质性P值；PZ：显著性P值。

2.4 敏感性分析和发表偏倚 采用逐一排除的方法进行敏感性分析，排除任一项研究后，Meta分析的总效应量在剔除前后未发生明显变化，提示结果较稳定。此外，利用Begg′s和Egger′s检验评估发表偏倚，漏斗图提示所有研究在图中基本对称，且Egger′s检验提示无明显发表偏倚(rs1055902：P>|t|=0.424)。

图2 通过Haploview软件分析Megsin基因rs1055901、rs1055902和 rs2689399在CEU人群和YRI人群中分别构成的单体型

2.5 Megsin rs1055901、rs1055902和rs2689399多态性位点的连锁不平衡关系 通过Hapmap数据库，利用Haploview4.0软件分析，发现在CHB及JPT人群中未发现rs1055901、rs1055902和rs2689399存在连锁关系；在CEU人群中发现Megsin rs1055901、rs1055902和rs2689399多态性位点之间标准化的连锁不平衡系数D′=1，相关系数r2=1(图2)，表明两者呈完全连锁；在YRI人群中，rs2689399和rs1055901两位点之间呈完全连锁(D′=1，r2=1)，而rs1055901和rs1055902两个位点、rs2689399和rs1055901两位点之间分别也存在一定程度连锁，且连锁程度一致(D′=1，r2=0.667，图2)。

3 讨 论

随着分子生物学研究手段日益成熟与发展，国内外学者发现IgA肾病的发生与发展与遗传因素密切相关。近年诸多研究报道了一些候选基因如编码人类HLA抗原、Megsin基因、RAS系统基因、MCP基因等的多态性位点与IgA肾病易感性相关[14]。在此仅探索Megsin基因与IgA肾病的相关性。

Megsin属于Serpin超家族成员之一，有研究发现在IgA肾病患者中，其RNA及蛋白质水平显著上调，且发现Megsin表达与系膜细胞数量增多及系膜基质增多有关。国内外学者对Megsin rs1055901、rs1055902和rs2689399多态性位点与IgA肾病易感性进行大量研究，部分学者对此进行Meta分析，但是现有的关于Megsin rs1055901、rs1055902及rs2689399与IgA肾病易感性的Meta分析存在一定的缺陷。如Zhou等[15]在2015年完成的纳入7篇文献的Meta分析中，其中所纳入的1篇与Megsin基因无关[16]，1篇数据不全[17]，还有1篇数据提取错误[6]，且上述Meta分析针对的是总体人群。

因此，本研究针对Megsin基因的3个位点的多态性位点与亚洲人群的IgA肾病易感性进行更新Meta分析。结果发现，rs1055901和rs1055902多态性位点的5种模型(C和T，CC和TT，CT和TT，CT+CC和TT、CC和CT+TT)均与在亚洲人种IgA肾病易感性无关。但因研究及样本量有限，未来仍需大量样本去证实rs1055901和rs1055902多态性位点与IgA肾病易感性的关系。同时，本文也分析了rs2689399多态性位点与IgA肾病患病风险的关系，发现在等位基因模型、纯合子模型及隐性模型中，该基因多态性位点与IgA肾病易感性有统计学关联，Megsin基因rs2689399的G等位基因和GG基因型可能是IgA肾病的一个保护因子。为了进一步探讨Megsin基因rs1055901、rs1055902和rs2689399之间的关系，通过Hapmap数据库，利用Haploview4.0软件，对Megsin基因连锁不平衡分析，结果发现rs1055901、rs1055902和rs2689399在CEU人群中存在完全连锁不平衡，在YRI人群中三者存在一定程度连锁。但这个结果在亚洲人群中并未得到证实，这意味着更需要大量研究去证明这3个位点与亚洲人群IgA肾病易感性之间的关系。本篇Meta分析纳入的数据严格遵循纳入、剔除标准，病例和对照均较一致，且在年龄、性别、种族方面具有可比性。然而，本文也存在缺陷，如样本量较小，不确定对照组有无筛查具有相关的亚临床IgA肾病，且有一个研究的对照组不符合HWE检验，其多态性检测方法也不一致。

综上所述，本研究认为Megsin基因rs2689399位点与IgA肾病易感性相关，rs2689399的G等位基因和GG基因型可能是IgA肾病的一个保护因子，但仍需要未来更多合理设计的大样本研究进一步证实本研究的结论。

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Meta-analysis of the relevance between Megsin rs1055901,rs1055902 and rs2689399 polymorphism and susceptibility of IgA nephrology in Asian population*

GeYating1，2,SuMeiling2,SongJiazhi1，2,XiongZuying1,2△,HouShuang2▲

(1.ClinicalCollege,ShenzhenHospital,AnhuiMedicalUniversity&PekingUniversity,Shenzhen,Guangdong518000,China; 2.DepartmentofNephrology,ShenzhenHospital,PekingUniversity,Shenzhen,Guangdong518000,China)

Objective To assess the association of three polymorphisms in Megsin (rs1055901,rs1055902 and rs2689399)and susceptibility of IgA nephropathy in Asian population.Methods We conducted a comprehensive search of electronic CNKI,VIP,WangFang Data,CBM,Pubmed,Web of Science and Google Scholar database on the association between Megsin rs1055901,rs1055902 and rs2689399 polymorphism and susceptibility of IgA nephrology in Asian population (last search update on 2 May 2016).Stata 12.0 software was used to calculate the odds ratio(OR)and 95%CI(confidence interval),as well as sensitivity and publication bias analyses.Results Six publications encompassing nine case-control studies were finally included,including 2 179 cases and 1 769 controls.Finally,no significant association between Megsin rs1055901 and rs1055902 polymorphism and IgA nephrology in Asian population was identified,while a significantly decreased risk of IgA nephrology for rs2689399 polymorphism,was identified in Asian population (G and C:OR=0.754,95%CI0.592-0.961,P=0.022;GG and CC:OR=0.506,95%CI0.287-0.892,P=0.019;GG and GC+CC:OR=0.551,95%CI0.316-0.961,P=0.036).Conclusion Rs2689399 G allele and GG genotype of Megsin may be the protective factors for IgA nephropathy in Asian population.

glomeruloneohritis,IgA;disease susceptibility;linkage disequilibrium;Megsin;polymorphism;Meta-analysis

2016年度重庆市出版专项资金资助项目

�证医学·

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.05.022

深圳市科技研发资金(JCYJ20140415162543010)。 作者简介：葛雅婷(1989-)，在读硕士，主要从事原发性肾小球疾病的发病机制的研究。△

，E-mail:xiongzy2005@163.com。▲共同通信作者，E-mail:hssz2007@126.com。

R692.3

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1671-8348(2017)05-0648-03

2016-09-21

2016-11-22)