EGFR、nm23、p53、Ki—67在乳腺浸润性导管癌中的表达及临床意义

曾祥美　张力斌

【摘要】 目的：探讨EGFR、nm23、p53、Ki-67在乳腺浸润性导管癌中的表达及临床意义。方法：纳入笔者所在医院收治的106例乳腺浸润性导管癌患者作为研究对象，按照乳腺浸润性导管癌的三级分级法，将106例患者分为A组（Ⅰ级）、B组（Ⅱ级）、C组（Ⅲ级），采用免疫组织化学检测法检测三组研究对象乳腺癌组织中EGFR、nm23、p53、Ki-67的表达情况。结果：EGFR、Ki-67、p53阳性表达率由高至低的顺序为C组、B组、A组，组间比较差异均有统计学意义（P<0.05）。nm23阳性表达率由高至低的顺序为A组、B组、C组，组间比较差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：nm23、EGFR、p53、Ki-67在不同分级的乳腺浸润性导管癌组织中均具有一定的表达特征，可作为临床评估乳腺癌患者疾病进展和预后的参考指标。

【关键词】 乳腺浸润性导管癌； EGFR； nm23； p53； Ki-67； 表达； 临床意义

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2016.32.031 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2016）32-0057-02

乳腺癌是一种以女性为主要发病群体的恶性肿瘤疾病，具有发病率高、治疗难度大等临床特点，严重威胁患者生命健康。总结乳腺癌的长期诊治经验发现，在发病早期明确患者的诊断结果，及时对患者实施有效治疗是改善患者预后的关键。近年来，不断有临床研究发现，检测多种肿瘤标志物在乳腺癌组织中的表达情况，可为临床诊断乳腺癌及评估乳腺癌患者病情进展提供较为客观的参考依据[2]。ER、PR、CerbB-2在乳腺癌中的研究已经非常成熟，为乳腺癌患者在内分泌治疗及分子靶向药物的选用上发挥了巨大的作用。除此之外，利用免疫组织化学检测另外一些肿瘤標记物也对乳腺癌的诊治发挥了积极的作用。浸润性导管癌是乳腺癌最常见的类型，笔者所在医院本次对EGFR（表皮生长因子）、nm23（肿瘤转移抑制基因）、p53（突变型人体抑癌基因）、Ki-67（增殖细胞核抗原）在乳腺浸润性导管癌组织中的表达情况及临床意义进行了研究，旨在明确上述四种肿瘤标志物在此类患者疾病诊断及评估中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本次研究选择笔者所在医院2012年3月-2015年9月收治的106例女性原发性乳腺癌患者为研究对象，所有病例术前均未经过放疗、化疗及其他治疗，术后经病理诊断为浸润性导管癌。年龄30～75岁，平均（47.9±1.8）岁。按照乳腺浸润性导管癌的三级分级法，将106例患者分为A组（Ⅰ级）、B组（Ⅱ级）、C组（Ⅲ级），A组18例，B组53例，C组35例。A组患者无发生淋巴结转移；B组患者有13个发生腋窝淋巴结转移，两年内有2例发现肺部转移（年龄分别为31岁及58岁）；C组患者有14例发生腋窝淋巴结转移，且有4例2年内复发或发生肺或骨转移。

1.2 三级分级法

腺管形成：大于75%计1分，10%～75%计2分，小于10%计3分；细胞核：相当于正常导管上皮，规则，一致计1分，中间大小、中度多形和异型计2分，大于正常导管上皮2.5倍，明显多形和异型计3分；每10个高倍视野（40倍镜）核分裂计数：0～5个计1分，6～10个计2分，大于11个计3分。Ⅰ级，分化好3～5分；Ⅱ级，中分化，6～7分；Ⅲ级，差分化，8～9分[1]。

1.3 研究方法

1.3.1 检验试剂 本次研究过程中使用的鼠抗人EGFR、p53、Ki-67单克隆抗体、兔抗人多克隆抗体nm23、DAB-酶底物显色剂、S-P法显色试剂盒等试剂均购自福州迈新生物技术有限公司。

1.3.2 检验方法 本次研究采用免疫组化S-P法检测三组患者乳腺癌组织中EGFR、nm23、p53、Ki-67的表达情况。所有标本离体30 min内均经过10%中性福尔马林固定，石蜡包埋制成蜡块。行4 μm连续切片，玻片经过多聚赖氨酸预处理以防止脱片。切片常规脱蜡后分别做HE染色及免疫组织化学染色，用已知阳性标本做阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照，具体操作步骤按照说明书进行。

1.3.3 结果判断 p53、Ki-67表达于乳腺癌细胞的细胞核中，EGFR定位于细胞浆，nm23定位于细胞质，目标着色部位着棕黄色判定为阳性，无着色判定为阴性。EGFR、nm23阳性判定标准，（+）：肿瘤细胞着色<25%；（++）：肿瘤细胞着色26%～50%，（+++）：肿瘤细胞着色51%～75%；（++++）：肿瘤细胞着色>75%。阳性率=（+）%+（++）%+（+++）%+（++++）%。p53、Ki-67阳性判定标准：计肿瘤细胞核阳性率，选取阳性率高的范围选取10个高倍视野，数100个肿瘤细胞，计数阳性细胞数，取其平均值即为其阳性值。

1.4 统计学处理

所得数据采用统计学软件SPSS 21.0处理，计量资料以（x±s）表示，采用t检验，计数资料以率（%）表示，采用字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

EGFR、Ki-67、p53阳性表达率由高至低的顺序均为C组、B组、A组，组间比较差异均有统计学意义（P<0.05）。nm23阳性表达率由高至低的顺序为A组、B组、C组，组间比较差异均有统计学意义（P<0.05）。

3 讨论

大量临床研究报道已经证实恶性肿瘤的发生、发展与机体内多种基因和分子的表达存在相关性，故将这些基因和分子统称为肿瘤标志物[2]。近年来，伴随着临床对基因和分子生物学性质的深入研究，多种基因和分子在恶性肿瘤疾病的诊断、治疗和预后评估中发挥着重要作用。在乳腺癌方面，ER、PR、CerbB-2在乳腺癌中的研究已经非常深入及成熟，为乳腺癌患者术后的辅助治疗，如内分泌治疗及分子靶向药物的应用提供了极大的帮助。除了ER、PR、CerbB-2外，有一部分临床研究发现EGFR、nm23、p53、Ki-67在乳腺癌患者病理组织中具有明显的表达特征。为明确乳腺癌患者病理组织中EGFR、nm23、p53、Ki-67表达变化的临床意义，笔者所在医院开展了临床研究。

EGFR属于表皮生长因子家族的一员，国内外大量临床研究均证实恶性肿瘤组织中有该因子存在，且该因子的表达水平越高，发生转移的风险越大。在本试验中，乳腺浸润性导管癌Ⅲ级EGFR的阳性表达率高于Ⅱ级和Ⅰ级，在一定程度上说明肿瘤分化越差，EGFR的阳性率越高，患者的预后越不好。另一些研究也显示，EGFR在乳腺癌中高表达可能提示患者的预后不良[3]。笔者所在医院采用的EGFR检测法为免疫组织化学法，因其易受外界因素干扰，且敏感性欠稳定，目前提倡用分子病理检测EGFR基因，將更有利于评估患者的预后，进而提供积极的治疗方案。

nm23为肿瘤转移抑制基因，存在于细胞膜和细胞质上，维持细胞的正常分裂，具有抑制肿瘤细胞入侵潜力及能动性的作用，抑制癌细胞的转移，是现阶段我国临床常用的评估恶性肿瘤疾病患者预后状况的指标。笔者所在医院本次研究nm23在乳腺浸润性导管癌Ⅲ级中的表达明显低于在浸润性导管癌Ⅰ级、Ⅱ级，故笔者认为nm23基因的表达与乳腺癌的分化程度呈负相关，分化越差的肿瘤表达率越低，越容易发生转移。马燕飞等[4]的研究也证实nm23在乳腺癌中具有抑制肿瘤细胞转移的作用。临床医生可以根据nm23的表达情况来筛查出高危患者，从而帮助制定治疗方案，改善预后。

p53为人体抑癌基因，分为野生型p53和突变型p53。野生型p53具有激活细胞内DNA修复功能，调节细胞分裂失常，稳定基因组的作用，可以抑制肿瘤细胞的增殖，因其半衰期短，很难测出。突变型p53却失去了野生型p53的作用，影响细胞的正常分裂，促进肿瘤细胞异常增殖，最终引发癌变。笔者所在医院本次研究的是突变型p53。有临床数据统计结果显示70%的乳腺癌患者，乳腺癌组织中的p53表达发生改变[5]。本次研究发现乳腺浸润性导管癌分级为Ⅲ级的患者，p53的表达水平明显高于分级为Ⅱ级和Ⅰ级的患者，因此推测乳腺癌患者该蛋白表达水平升高是癌细胞产生、发展、转移的体现，可作为评估乳腺患者预后的指标。李新军等[6]的研究结果与本次研究结果具有一致性。

Ki-67是一种与增殖细胞相关的核抗原，为现阶段我国临床检测肿瘤细胞增殖活性的常用指标。该指标阳性表达率越高，表示患者肿瘤更易发生侵袭和远处转移。本次研究发现乳腺浸润性导管癌分级为Ⅲ级的患者，Ki-67的阳性表达率明显高于分级为Ⅱ级和Ⅰ级的患者，这一检测结果可能说明肿瘤细胞分化越差，肿瘤的增殖活性越高，更容易复发或转移，同时提示这一指标也可用于判断乳腺癌患者预后状况[7]。

本次研究结果发现EGFR、nm23、p53、Ki-67在乳腺癌组织中的表达会随着患者疾病的进展出现一定的规律。综上所述，本研究认为EGFR、nm23、p53、Ki-67在不同分级的乳腺浸润性导管癌组织中均具有一定的表达特征，可作为临床评估乳腺癌患者疾病进展和预后的参考指标。

参考文献

[1]陈竺，黄洁夫.临床诊疗指南病理学分册[M].北京：人民卫生出版社，2009：836-837.

[2]徐旭东，吴亚群，张林，等.信号转导与转录激活子3、nm23、CXCR4在原发性乳腺癌组织中的表达及其意义[J].中华实验外科杂志，2011，28（5）：659-661.

[3]李珊珊.EGFR在乳腺癌中的表达及意义[J].山东医药，2012，52（20）：89-90.

[4]马燕飞，浦涧.nm23基因在原发性乳腺癌组织中的表达及意义[J].医学临床研究，2015，32（8）：1582-1583.

[5]杨丽丽，梁莉萍，赵峰，等.ER、PR、HER-2、Ki67、Nm23、P53在多中心性乳腺癌中的表达及临床意义[J].重庆医科大学学报，2012，37（11）：964-967.

[6]李新军，付丽梅，付明霞，等.联合检测乳腺癌组织中 PTEN、p53和 EGFR表达的临床病理意义[J].临床与实验病理学杂志，2015，11（9）：986-990.

[7]管小青，郑向欣，顾书成，等.三阴性乳腺癌组织中Ki67、p53的表达及临床意义[J].现代肿瘤医学，2015，23（6）：786-791.

（收稿日期：2016-07-26）