特定蛋白分析仪测定尿微量蛋白的性能分析

朱懿

摘要：目的 微量白蛋白尿是指在尿中出现微量白蛋白。白蛋白是一种血液中的正常蛋白质，但在生理条件下尿液中仅出现极少量白蛋白。微量白蛋白尿反映肾脏异常渗漏蛋白质。尿微量白蛋白排出量的增加是疾病早期的改变，对疾病的早期诊断，早期治疗有重要的参考价值和临床意义[1]。大量的临床研究表明，尿微量白蛋白是预测糖尿病、高血压、心血管疾病、血管损伤的敏感指标[2]。目前国际上十分重视尿微量白蛋白的测定，认为这项指标对早期治疗原发病、分析病程进展、评价相关危险因素具有重要意义。我院原先使用日立7060生化仪测定尿微量蛋白，现为了节约成本引进NEPHSTAR特定蛋白分析仪，对此在重复性、精密度、污染评估等方面的性能进行分析 ，研究其对临床的参考价值。方法 采用随机抽样的方法，取中、高水平两组，各获得20例数据，对其日间、批内的均值、标准差、变异系数进行计算，从而对得到的数据进行性能分析。1/4允许误差范围为批内不精密度判断限，1/3允许误差为天间不精密度判断限。小于或等于判断限的，检测系统的不精密度属可接受；大于判断限的表示不精密度不符合要求。并与日立7060生化仪进行对比，通过进行t检验，了解其可比性。设计干扰试验、线性试验，测定检出限。结果 通过对抽样的两组中水平和高水平的尿微量蛋白的20组数据进行计算，求得中、高水平批内、天间的均数、标准差、变异系数。允许误差EA为10%，通过统计学公式求得中水平：批内1.48%<2.5%；天间2.46%<3.3%；高水平：批内2.17%<2.5%；天间2.5%<3.3%。数据都小于判断限，即检测系统的不精密度属于可接受范围。而于日立7060生化仪的对比，通过计算t检验可知，两者间数值的差异无统计学意义（P>0.05）。在10～2000 mg/L范围内的线性良好。检出限1.48 mg/L。甲苯浓度在10 mg/L以下对该法测量无显著干扰。结论 通过对NEPHSTAR特定蛋白分析仪的性能评估。从重复性、精密度、线性评估、干扰实验等各方面及与日立7060生化仪的对比等方面进行了统计学的比较，得知其性能的稳定结果的可靠，因此对测得的尿微量蛋白数据质量有所保证。

关键词：尿微量白蛋白；特定蛋白分析仪；散射比浊

尿蛋白测定的方法众多，如化学法、染料结合法和比浊法等。双缩脲法灵敏度低；染料结合法对各种蛋白结合率不同，结果差异大；而比浊法操作简单[4]，应用散射比浊法在NEPHSTAR特定蛋白分析仪上测定尿微量白蛋白，并分析其性能。

1 资料与方法

1.1仪器 NEPHSTAR 特定蛋白分析仪。

1.2试剂及其他材料 mALB抗血清，mALB缓冲液，移液器，搅拌子等。

1.3标本 选择本院内、外科送检患者新鲜尿液标本。如见明显浑浊必须离心后才可测定。随机抽取40例标本分别用特定蛋白分析仪及日立7060在同一天测定所有结果总和的均数。并从中选择中、高水平的数据做精密度试验。另取一批做干扰试验及求检出限。

1.4方法 用散射比浊法，严格按照说明书，严谨规范操作。

2 结果

2.1线性试验 用尿蛋白含量为10 mg/L的患者低值尿液对尿蛋白含量为2000mg/L的高值尿液分别进行1，1.5，2，2.5，3倍比例稀释，然后用散射比浊法进行测定，重复测定4次取均值，结果线性方程为Y=0.957X+5.59，相关系数（r）=0.999，在此范围内线性良好。

2.2精密度评价 选取送检患者中、高水平的新鲜尿液，分别做批内、天间测定，测定所获得20组数据，见表1。

通过统计学公式分别计算其均值、标准差、变异系数，并通过10%的允许误差，判断其指标，见表2。

2.3极限评估 NEPHSTAR 特定蛋白分析仪 的生物检测限为4.9 mg/L，并对20份试剂空白进行测定，计算出其最低检出限1.48 mg/L。

2.4与日立7060生化仪的比较 本法同日立7060生化仪同时测定40份尿液标本，χ2分别为109.3和102.6，通过配对t检验，t=1.5，P>0.05，两者无显著差异。

2.5干扰试验 在一系列不同浓度的甲苯溶液中以1/10体积掺入蛋白含量为150 mg/L和750 mg/L的尿液标本中，用散射比浊法测定掺入前后的尿蛋白量，甲苯在10 ml/l以下对该试验无显著干扰。

浊度对该法的干扰，如呈明显浑浊状态，则数据无法获得，机器显示空白太高，必须离心后重新测定才能获得数据。

3 讨论

3.1尿微量蛋白与疾病，见表3。

3.2尿微量蛋白测定的注意事项 试剂盒在未开启前应存于2℃～8℃，在试剂盒标出的有效期前使用。不要冷冻。缓冲液在使用前应平衡至室温（18℃～26℃）。开启后，应拧紧瓶盖，抗血清和质控存于2℃～8℃，缓冲液存于室温。

使用新鲜尿液，尿液在2℃～8℃储存最长不超过72 h，冷冻在-20℃或更低温度则可储存更长时间。冻融尿液不超过1次。

微生物污染、浑浊的样品都不适合用散射比浊检测[5]，除非经过离心或其他方法处理过。

样品的浓度>1900 mg/L会出现抗原过剩的情况，此时测量值可能会意想不到的低，从而会给出误导的结果。如果怀疑有这种情况则要进一步稀释样品至1/11后重新测量（400 μl样品稀释液+40 μl样品）。

4 结论

通过对NEPHSTAR特定蛋白分析仪测定尿微量蛋白获得的数据，从其各方面对其性能进行分析。了解到中、高水平的批内、天间的不精密度均在允许范围，符合要求。线性实验、干扰实验、及与日立7060生化仪的对比实验均有价值。所以国塞特定蛋白分析仪在测定尿微量蛋白方面具有较好的重复性、精密度、稳定性，并且价格低廉。

参考文献：

[1]许文芳，柳红梅，等.应用磺基水杨酸-硫酸钠比浊法在自动分仪上测定尿蛋白[J].检验医学，2007，22：23-24.

[2]魏明，张德，李继广，等.尿微量白蛋白检测的临床意义及探讨[J].放射免疫学杂志，2008，21：437-438.

[3]谢科杰，王凯，张丽红，等.特种蛋白室内质控品制备及应用评价[J].临床医学，2009，24：381-383.

[4]陈增强，张雪青，陈筱菲，等.两种方法检测脑脊液蛋白质的比较[J].临床检验杂志，2006，24：209-210

[5]李學旺，叶文玲.尿液蛋白质的检测及临床评价[J].中国实用内科杂志，2002，22（1）：17-19.

编辑/肖慧