通窍鼻炎丸对复发性鼻息肉患者TLR-2和HO-1的影响*

赵江涛

(甘肃省中医院耳鼻喉科，甘肃 兰州 730050)

·临床研究·

通窍鼻炎丸对复发性鼻息肉患者TLR-2和HO-1的影响*

赵江涛

(甘肃省中医院耳鼻喉科，甘肃 兰州 730050)

目的：观察通窍鼻炎丸对复发性鼻息肉患者Toll样受体-2(TLR-2) 、血红素加氧酶-1(HO-1)的影响。方法：选择复发性鼻息肉40例患者作为治疗组，并随机选择健康志愿者30例作为对照组。治疗组口服通窍鼻炎丸，3粒/次，3次/d。连续治疗1个月后判定疗效。结果：治疗组治疗前、后TLR-2、HO-1蛋白含量均明显高于对照组(P<0.05)，且治疗组治疗后TLR-2、HO-1蛋白含量明显低于治疗前(P<0.01)。结论：通窍鼻炎丸能够有效降低复发性鼻息肉患者鼻息肉组织中TLR-2、HO-1含量，对复发性鼻息肉的治疗有重要的临床意义。

复发性鼻息肉/中医药疗法；通窍鼻炎丸/治疗应用；Toll样受体-2；血红素加氧酶-1；临床观察

鼻息肉是临床鼻科常见的慢性疾病，在中医学中归为“鼻渊”“鼻痔”范畴，主要表现为鼻塞，严重时会堵塞鼻腔。临床研究[1]指出：耳鼻喉科门诊中，鼻息肉患者占1%～3%，发病以中年人居多，其中男性略高于女性。近年来，该病有明显增高趋势。本病发病机制与多种因素有关，其中遗传因素、免疫缺陷、纤毛功能障碍、Young综合征等均可导致本病发生。研究[2-3]显示：先天性免疫具有重要的特异性分辨病原体和自身的能力，这可能是导致鼻息肉发病重要原因，其中具有代表性的是Toll样受体(toll-like receptors，TLRs)及血红素加氧酶(heme oxygenase, HO)。2015年12月—2016年8月，笔者采用蛋白质印迹法检测通窍鼻炎丸治疗复发性鼻息肉前后及正常鼻黏膜中TLR-2、HO-1蛋白的表达情况，总结报道如下。

1 临床资料

选择本院耳鼻喉科就诊的复发性鼻息肉患者40例作为治疗组，并随机选择健康志愿者30例作为对照组。治疗组40例，其中男24例，女16例；年龄平均(43.42±8.75)岁；病程平均(16.4±7.5)个月。对照组30例，其中男15例，女15例；年龄平均(40.26±9.53)岁。两组一般资料对比，差别无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

2 诊断标准

按照《慢性鼻窦炎鼻息肉临床分型分期及内窥镜鼻窦手术疗效评定标准(1997年,海口)》[4]中复发性鼻息肉的诊断标准。

3 试验病例标准

3.1 纳入病例标准

①符合复发性鼻息肉的诊断标准；②年龄20～65岁；③知情同意，并签署知情同意书等相关文件者。

3.2 排除病例标准

①不符合复发性鼻息肉的诊断标准者；②妊娠、哺乳(母乳喂养)期妇女；③已知或怀疑对本试验药物过敏，或对某些食物、药物过敏体质者；④入选前3个月内正在参加另一个临床试验者；⑤患有其他疾病不适合继续本研究者。

3.3 剔除病例标准

①试验因故中断改用其他方法者；②资料不完善，无法判断疗效者；③不按照设计方案治疗，或同时进行其他治疗者。

3.4 脱落病例标准

①治疗未完全结束而自停治疗者；②治疗结束，未按要求随访检查者。

4 治疗方法

治疗组口服通窍鼻炎丸(由甘肃省中医院药房制备，制剂批号150814，0.5 g/粒)，3粒/次，3次/d。连续治疗1个月后判定疗效。

5 检测方法

5.1 组织提取

提取治疗组治疗前、后和对照组的鼻黏膜、鼻息肉组织，用生理盐水清洗，去除血液和黏液，迅速将样本切成3～5 mm3小块，置入冻存管中，置于-80 ℃冰箱冷冻保存。

5.2 蛋白质印迹法

聚偏二氟乙烯(PVDF)膜购自乐清腾祥膜技术有限公司，批号GVWP025001；一抗购自Genscript公司，批号A01830-40；羊抗兔二抗IgG-HRP购自Invitrogen公司，批号A00131；ECL显色试剂盒购自YEASEN 公司，批号P0018。按照说明书指示操作，在膜成像系统下显色成像并拍照，用 Image J分析软件分析图片上特异条带的灰度值变化，记录吸光度值，除以相同来源的总蛋白质中β-actin条带的吸光度值，进行半定量测定。吸光度比值越大，说明蛋白表达量越高。

6 统计学方法

7 结 果

7.1 治疗组治疗前、后和对照组TLR-2 和 HO-1蛋白含量灰度值对比

见表1。

组 别例数时间TLR-2HO-1治疗组40治疗前1.56±0.25**1.78±0.32**治疗后0.84±0.47**##0.95±0.51**##对照组300.27±0.08 0.21±0.12

注：与对照组对比，** P<0.05；与同组治疗前对比，## P<0.01。

7.2 治疗组治疗前、后和对照组TLR-2蛋白含量表达情况

见图1。

a.对照组；b.治疗组治疗前；c.治疗组治疗后图1 治疗组治疗前、后和对照组TLR-2蛋白含量表达情况

7.3 治疗组治疗前、后和对照组HO-1蛋白含量表达情况

见图2。

a.对照组；b.治疗组治疗前；c.治疗组治疗后图2 治疗组治疗前、后和对照组HO-1蛋白含量表达情况

8 讨 论

鼻渊首次见于《素问·气厥论》，曰：“胆移热于脑，则辛頞鼻渊。鼻渊者，浊涕下不止也。”《医学正传》曰：“触冒风寒，始则伤于皮毛，而成鼻塞不通之候，或为浊涕，或流清汁……鼻渊此为外寒束内热之证也。”《本草纲目》曰：“鼻渊，流浊涕，是脑受风热。”《寿世保元》曰：“夫鼻者肺之候。时常和则吸饮香臭矣。”《医醇义》曰：“脑漏者，鼻如渊泉，涓涓流涕，致病有三，曰风也，火也，寒也。”以上既阐述了鼻渊的发病原因，又说明了鼻渊的发病机制。

TLR-2是TLRs家族中表达范围最广的革兰阳性菌的天然识别受体[5]。TLR-2在活化后可以通过TLRs-MyD88-IRAK-NF-κB信号转导通路介导黏膜，激活NF-κB产生疫反应。NF-κB是炎症反应的核心调节因子之一，在机体内能够参与多种炎症反应、免疫应答及细胞生长的表达调控[6]。研究[7]显示：在鼻息肉发病过程中，NF-κB起关键作用。机体的NF-κB过表达是鼻息肉发病的重要标志[8-9]。本研究发现：复发性鼻息肉组织中TLR-2蛋白的表达显著高于正常鼻黏膜组织，但经通窍鼻炎丸治疗TLR-2蛋白的表达量明显降低(P<0.05)。此表明：通窍鼻炎丸能够有效降低鼻息肉患者TLR-2含量，促进疾病的治疗。

HO是调节血红素代谢的一种限速酶。HO-1是其中的诱导型酶，是人体最容易被诱导的抗氧化内源性的保护蛋白质即热休克蛋白32，在机体内主要承担组织的抗氧化、抗细胞增殖与凋亡、维持循环及调节免疫等。正常情况下，HO-l在网状内皮细胞系统和骨髓中产生，在肝、脾、心血管等部位发生高表达现象，其他部位表达水平较低[10]。HO-1能够与多种物质或因素结合表达，对机体的应激反应有重要作用[11]。研究[12-13]指出：HO-l适量表达能够减轻细胞损伤；而过表达时，会激发乳酸脱氢酶的大量释放，抑制谷胱苷肽转移酶的产生，破坏细胞膜完整性。结合本次研究结果发现：HO-1在复发性鼻息肉患者的组织中出现过表达，进而导致鼻息肉发生。本研究结果显示：复发性鼻息肉患者组织中的HO-1蛋白的表达量显著高于正常鼻黏膜组织(P<0.05)；口服通窍鼻炎丸治疗后，患者鼻息肉组织中TLR-2的表达量较治疗前显著降低(P<0.05)。此表明：通窍鼻炎丸能够有效降低复发性鼻息肉患者组织中TLR-2含量。

通窍鼻炎方是甘肃省中医院院内制剂，主要由黄芩、栀子、辛夷、白芷、苍耳子、薄荷、甘草等组成，具有清郁除热、补肺脾之气、宣通鼻窍的作用。方中重用黄芩，因黄芩苦寒,清热燥湿、泻火解毒，善清胆、肺之热，故为君药。栀子苦寒，清热利湿，泻火解毒，善清肺、三焦之热，为臣药。黄芩与栀子合用，以黄芩清肺、胆之热，借栀子轻清上行之效，泻肺火，祛胆热，泻热利湿。辛夷散风寒，通鼻窍；白芷除湿通窍，消肿排脓；苍耳子散风除湿，通鼻窍；薄荷清目透疹，宣散风热。以上药物共为佐药。甘草调和诸药，为使药。诸药相伍，寒热并用，苦辛并进，补泻兼施，使补而不滞、泻不伤正。综观全方，用药配伍有三重特点：一是上、下焦热同除，升降并行；二是邪正兼顾，清热补气兼施；三是气血并调，标本兼顾。

本研究表明：通窍鼻炎丸能够明显改善复发性鼻息肉患者TLR-2 和HO-1蛋白含量。此体现了中医药治疗慢性疾病的积极意义，但其具体机制仍是今后实验及临床需要探究的问题。

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(编辑 颜 冬)

1001-6910(2017)01-0016-03

R765.25

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2017.01.07

甘肃省中医药管理局科研课题项目(GZK-2016-38)

2016-09-13；

2016-12-19