HPLC法测定保心宁片中人参皂苷Rg1的含量

2017-02-07王先友

河南大学学报（医学版） 2017年4期

王先友，郭石

1. 河南大学药学院分析化学教研室，河南开封 475004； 2.开封市儿童医院药学部，河南开封 475002

保心宁片由丹参、当归、枳壳、三七等多味药材组成。具有活血化瘀，行气止痛的功效，临床上用于心绞痛，心律失常，改善冠心病症状[1]等。处方中三七为名贵药材，质量标准中没有其成分的含量测定[2]。人参皂苷Rg1是三七的主要成分之一，李海泉[3]曾采用HPLC方法测定了其中三个皂苷含量，但通过验证我们所用的方法简单、分离度等指标稍好，为保心宁片的质量控制提供一更合适途径。

1 仪器与试药

LC-10AT型高效液相色谱仪(日本岛津)；N-2000双通道色谱工作站(浙江大学智达信息有限公司)；人参皂苷Rg1对照品 (中国药品生物制品检定所，批号：0703- 200221，供含量测定用)；保心宁片(市售)；甲醇(色谱纯)；水为重蒸馏水;其他所用试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Hypersil-ODS柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：甲醇∶水(45∶55)；流速：1.0 mL/min；柱温：室温；检测波长：203 nm。在此色谱条件下，得到保心宁片对照品溶液及供试品溶液的HPLC图谱(见图1)，理论塔板数不低于4 000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备精密称取减压干燥至恒重的人参皂苷Rg1对照品69.70 mg，加流动相溶解，定容至25 mL，混匀，即得2.788 g/L的人参皂苷Rg1对照品溶液。

图1 HPLC图谱(A 对照品，B 样品)

2.2.2 供试品溶液的制备取保心宁片，除去糖衣，研碎，精密称取约0.5 g置10 mL容量瓶中，加流动相适量，浸渍2 h，超声30分钟使之充分溶解，冷却至室温，加流动相至刻度，摇匀，静置，吸取上清液，转移到另一干燥洁净容量瓶中；加石油醚适量，振摇，除去石油醚，重复3次，即得供试品溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系精密吸取人参皂苷Rg1对照品溶液(2.788 g/L)0.5、1.0、1.5、2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0、17.5 μL，按上述色谱条件分别进样，记录色谱图。每种浓度进样3次，取峰面积的平均值。以峰面积A对进样量a进行线性回归，得回归方程为：A=231 896 a+44 038(r=0.999 4)。结果表明，人参皂苷Rg1在1.39 ～ 48.79μg范围内具有良好的线性关系。

2.3.2 精密度实验精密吸取线性关系项下的对照品溶液10μL，重复进样5次，记录峰面积，计算RSD为0.86%(n=5)，结果表明该法精密度较好。

2.3.3 稳定性实验供试品溶液配置后分别于1、2、4、8、12、24、48h进样15μL，记录峰面积，计算RSD为0.74%(n=7)，结果表明供试品在48h内稳定。

2.3.4 重复性实验取同一批供试品,按上述方法配制供试品溶液5份，进样，记录峰面积，测得RSD为1.09%，结果表明该法重复性较好。

2.3.5 加样回收率实验精称同一批号已知含量的供试品约0.5g，5份，分别加入2.788g/L的对照品溶液1mL，按2.2项操作制备5份溶液，进样量15μL，记录峰面积，测得平均回收率为100.9%，RSD为0.87%(n=5)，结果显示加样回收率良好。

2.3.6 含量测定按拟定的含量测定方法,测定三批供试品中人参皂苷Rg1的含量,结果见表1。