三七总皂苷脂质体凝胶的制备及性质研究

谭福能，贾文丽，王兴能

（文山学院 化学与工程学院，云南 文山 663099）

三七总皂苷（PNS）是从五加科人参属植物三七中提取的有效药用成分，其包括20多种皂苷活性物质，具有十分重要的药理作用[1-3]，PNS具有显著降低血小板表面活性、抑制血小板粘附和聚集、抗血栓形成、改善微循环等作用，其作用优于阿斯匹林。此外，PNS还具有清除自由基、降血压、抗炎等药效[4-5]。可用于治疗中风偏瘫、脑梗塞、脑血管病、视网膜中央静脉阻塞、冠心病、颅脑外伤、慢性肾功能衰竭、烧伤后瘢痕增生、牙周炎等疾病[6]。现代药学研究表明，PNS在胃肠黏膜中的透过性差，即使大量给入吸收率也不高，因此导致了传统的PNS口服剂的生物利用率很低，三七总皂苷存在吸收差、生物利用率低等缺点[7]，其中，Rg1的生物利用率为4.35%，Rb1为18.40%，而且在血液中消除很快[8]。

为PNS建立一个新的给药体系成了近年来三七药用研究的热点之一[9]，通过新的给药系统能提高药物在人体内的代谢动力学性能，使血液中药物浓度维持在一定范围，不仅能延长药物的作用时间，还能减少给药的次数，从而达到降低药物的毒副作用，提高患者顺应性的目的[10-11]。

目前在PNS的给药体系方面主要是缓释颗粒剂、片剂、薄膜剂等。而脂质体凝胶是近年来研究较热的新型给药系统，相对于传统的给药系统，能更好地与皮肤表面接触，可透过表皮层深入到皮肤深层，从而提高药物在局部皮肤的浓度，发挥缓释作用。因此，PNS脂质体凝胶具有良好的应用前景。

本文采用薄膜分散法制备三七总皂苷脂质体凝胶，并对其配方进行了优化，对所制得的脂质体凝胶成品进行稳定性评价。

1 实验部分

1.1 试剂与仪器

三七总皂苷（西安欣禄生物科技有限公司）；101-2EBS型烘箱（北京市永光明医疗器械厂）；IRPrestige-21型傅立叶变换红外光谱仪（日本岛津公司）；UV-2550型紫外分光光度计（日本岛津）。卵磷脂（分析纯，中国新兴化工试剂研究所）；胆固醇（分析纯，中国医药集团上海化学试剂公司）；卡波姆940（山东优素化工科技有限公司），甲醇（分析纯，国药集团上海试剂公司）。

1.2 脂质体的制备

分别称取2 g大豆卵磷脂和0.5 g胆固醇于烧杯中，加10 mL三氯甲烷使其溶解完全，然后转至旋转蒸发仪中，25℃下旋转蒸发除去三氯甲烷，同时控制旋转蒸发仪旋转的速度，使类脂在圆底烧瓶壁上形成一层均匀的薄膜。将圆底烧瓶取下，干燥24 h后加入溶有PNS的磷酸盐缓冲溶液（pH6.8）5 mL，在25℃下旋转洗膜150 min，得粘稠的混悬液体，取出后保存于4℃的冰箱中[12]。

1.3 三七总皂苷脂质体凝胶的制备

称取0.5 g卡波姆940，加入蒸馏水且不断搅拌后放置过夜，使其能够溶胀充分，再入磷酸盐缓冲溶液调节pH至6.5，得空白凝胶基质。将上述步骤制备的含PNS的脂质体加入到该空白凝胶基质中，并不断搅拌，最后加入5 mL甘油，继续搅拌均匀后得到PNS脂质体凝胶。

1.4 三七总皂苷凝胶的傅立叶变换红外指纹图谱分析

取适量干燥的三七总皂苷脂质体凝胶，充分研磨后与KBr混合压片后制得样品，样品用IRPrestige-21型傅立叶变换红外光谱仪进行红外扫描，扫描范围为4000 cm-1～400cm-1。

1.5 三七总皂苷的紫外—可见分析方法的建立

用电子天平分别称取三七总皂苷4 mg、8 mg、12 mg、16 mg、20 mg溶于甲醇中，在50 mL规格的容量瓶中配制溶液，其浓度分别为0.068 mg/mL、0.1360 mg/mL、0.2040 mg/mL、0.2720 mg/mL、0.3400 mg/mL。在紫外—可见吸收光谱仪中测得其最大吸收波长为221 nm，在此波长下绘制其标准曲线。

1.6 载药率的计算

取含三七总皂苷的脂质体凝胶溶液5 mL，放入离心机中，于室温下高速离心40 min（1200 r/min），取上清液，用甲醇定容至5 mL，置于紫外—可见吸收光谱仪上，在波长为221 nm时测定其吸光度，通过上述步骤得到的标准曲线计算三七总皂苷含量，并按以下公式计算其载药率：

载药率=（W总-W游离）/ W总

其中W总为脂质体凝胶中三七总皂苷的总量，W游离表示上清液中三七总皂苷的量。

1.7 三七总皂苷脂质体凝胶的稳定性研究

1.7.1 时间的影响

分别取1 g不同配方制备的三七总皂苷脂质体凝胶放置于表面皿上，放入冰箱中，并且将冰箱的温度恒温在-4℃，每隔10分钟、30分钟、1小时、2小时、1天、2天观察三七总皂苷脂质体凝胶的质量变化情况，以变化质量M变化来表示（M变化= M开始-M终止）。

1.7.2 温度的影响

分别将制备好的三七总皂苷脂质体凝胶放入玻璃表面皿上， 其中三七总皂苷：脂质体为1∶1、2∶1、4∶1、9∶1， 依次放入恒温水浴锅中，并将恒温水浴锅的温度恒温在 10℃ 、20℃ 、30℃、40℃ 、50℃、60℃ 、70℃ 、80℃、90℃、 95℃下，每隔10分钟观察一次三七总皂苷脂质的质量变化情况，变化质量等于开始质量减去终止质量（M变化=M开始-M终止）。

2 结果与讨论

2.1 红外指纹图谱分析

图1是不同三七总皂苷脂质体凝胶的红外光谱图，其中三七总皂苷∶脂质体分别为4∶1（a）、1∶1（b）、2∶1（c）、9∶1（d）。

图 1 不同三七总皂苷脂质体凝胶的红外光谱图

根据三七总皂苷脂质体凝胶的红外光谱图对比分析可知，三七总皂苷脂质体凝胶在3400～3300 cm-1处为-OH伸缩振动。3030 cm-1附近的数个弱峰是苯环及-CH3的C—H伸缩振动，1850-1600 cm-1出现的峰为C=O伸缩振动，2300～2400 cm-1出现的峰为-C≡C-伸缩振动，1360 cm-1和1450 cm-1的吸收峰为甲基的C—H伸缩振动，2310～2135/cm-1的吸收峰为-N≡N-伸缩振动，而三七总皂苷在3000～2800 cm-1出现的峰为C—H伸缩振动，2300～2100 cm-1的吸收峰为-N≡N-伸缩振动，1650～1560 cm-1出现的峰为—NH2弯曲振动，1300～1200 cm-1的吸收峰为—NO2弯曲振动，910～890 cm-1出现的峰为=CH2面外摇振动摆，从图1中可见，改变三七总皂苷和脂质体的比例对其各官能团的红外吸收峰位置影响不大。

2.1 三七总皂苷标准曲线的建立

在紫外—可见吸收光谱仪中测得三七总皂苷的最大吸收波长为221 nm，因此在此波长下进行测定并将测定结果绘制标准曲线（见图2）。通过对其标准曲线线性拟合后得到线性方程y=8.441x+2.5，相关系数为0.998。结果表明三七总皂苷浓度在0.068 mg/mL～0.340 mg/mL范围与吸光度线性关系良好。

图 2 三七总皂苷的标准曲线图

2.3 制备PNS脂质体凝胶的工艺优化

通过实验发现，对脂质体凝胶的载药率影响较大的两个因素为磷脂与胆固醇的质量比（磷胆比），脂类与药物三七总皂苷的质量比（脂药比），因此以载药率为考查指标，对其制备工艺进行了优化，结果见表1。当磷胆比为4∶1，脂药比为6∶1时，载药率最高，因此选用此配方制备三七总皂苷脂质体凝胶。

表1 PNS脂质体凝胶研究

2.4 时间的影响

取不同的配比的凝胶成品放在表面皿中，于-4℃条件下，不同时间后观察其表观并记录其质量变化情况。

表2 -4℃条件下凝胶成品质量变化情况

由表2可知各配比的凝胶成品在低温条件下质量没有发生很大的波动即在低温条件下凝胶成品的稳定性都很好。其中磷胆比（9∶1）的凝胶成品质量变化比其他三个要相对稳定。

2.5 温度的影响

将不同配比的凝胶成品置于洗净干燥烧杯中，将其置于恒温水浴中加热，并于不同的温度条件下恒温30 min后，称其质量并记录其质量变化M变化。

表3 同一温度下不同配比的凝胶成品质量变化情况

由表3可知各配比的脂质体凝胶成品在不同条件下质量没有发生很大的波动，这也说明凝胶具有良好的温度稳定性，其中磷胆比（9∶1）的凝胶成品质量变化最小。

3 结论与展望

本文以胆固醇、卵磷脂和三七总皂苷为主要原料制备三七总皂苷脂质体凝胶。通过紫外可见光吸收光谱法建立了三七总皂苷的测定方法，并以该方法测定脂质体凝胶的载药率，经过反复实验发现磷脂与胆固醇的质量比、脂类与药物的质量比直接影响脂质体凝胶的载药率。稳定性实验表明该脂质体凝胶具备良好的稳定性，在不同温度和放置时间下其质量无明显变化。

脂质体凝胶可通过延缓三七总皂苷的释放，以促进药物的透皮吸收，有望制成外用凝胶用于临床治疗，对开发三七皂苷新剂型研究工作具有重要意义。

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