高效液相色谱仪在食品检验中的应用

2017-02-02烟台市福山区检验检测中心

食品安全导刊 2017年15期

□ 王丽烟台市福山区检验检测中心

高效液相色谱仪在食品检验中的应用

□ 王丽烟台市福山区检验检测中心

社会的进步和经济的发展使人们的生活水平得到了极大的提高，人们对食品质量的要求也越来越高。高效液相色谱在食品检验方面具有敏感、流动相选择范围广、高速、高压和高效等优点，这些优点使高效液相色谱在食品安全检测中得到广泛应用，在保障食品安全方面起着重要作用。高效液相色谱技术灵敏度高、检测限制低使得它逐渐成为最为重要的食品检测技术。

食品检测；高效液相色谱技术；应用

高效液相色谱技术是一项已发展成熟的技术，在经典液相色谱法的基础上，将气相色谱实验方法与理论相结合，通过在线检测、高压泵输送流动相和高效固定相等方法形成的。高效液相色谱的主要组成是进样器、控制器、高压输液泵、处理系统、贮液器、数据获取、色谱柱和检测器等[1]。

1 实验部分

1.1 仪器与试药

仪器：液相色谱仪；电子天平；超声仪；离心机；紫外光度计。

试药：番茄汁；杏汁；黑加仑汁；红枣汁；萝卜汁；石榴汁；香梨汁；稀氨水、甲醇：HPLC级；0.02 mol／L乙酸铵溶液；安赛蜜(乙酰磺胺酸钾)标准储备液1.00 mg／mL；山梨酸标准储备液1.00 mg／mL；糖精钠标准储备液1.00 mg／mL；苯甲酸标准储备液1.00 mg／mL；脱氢乙酸标准储备液[2]。

1.2 便携式高效液相色谱仪的评价

泵耐压检测方面，连接好仪器的各个部分，其中流动相环节使用100%的甲醇，流量设置为2 mL/min。仪器开始运行之后，维持压力稳定，使用滤纸检查不同管路的连接位置，确保这些位置未发生漏液问题。把色谱柱取下来之后堵住泵的出口位置，逐渐加大压力直到最大值的80%，在持续10 min后，再次检查泵出口端有没有泄漏。

高效液相色谱法优点显著，它的流动相种类多，检测灵敏度高，操作自动化，应用范围广，速度快，重复性高，分离效率高，选择性好，色谱柱可以反复使用，自动化操作，不受试样的挥发性和热稳定性限制，应用范围广，对于温度需求不高，室温下便可分析，分辨率以及精确度都比较理想。液相色谱法有着非常广泛的用途，在合成化学领域、环境监测领域、临床化学领域、药物研究领域、食品检验领域、石油化学领域以及生命科学领域等都有应用。比如在检测食品当中污染物的时候，可以分析多环芳烃、微量元素、大肠杆菌毒素以及黄杆菌毒素等。

2 溶液制备

2.1 对照品制备

分别取对照品降糖药5 mg、甲苯磺丁脲10 mg，0.45 μm的微孔滤膜，将甲苯磺丁脲过滤，对照品贮备液便是过滤剩下的滤液，细粉置于50 mL的量瓶中，再加入适量的甲醇，经超声溶解，冷却至室温后再定容、摇匀。

2.2 供试品溶液

取服用量作为供试品，研细之后放入100 mL容量瓶当中，然后添加40 mL甲醇，通过30 min的超声处理使其溶解，冷却至室温，定容、摇匀，使用0.3μm微孔滤膜进行过滤，得到的溶液就是续滤液。

3 结果

3.1 输液系统评价

液相色谱仪最为关键的组成部分之一就是输液系统，输液系统是把贮液器中的流动相送入液路系统。然后液相色谱分析直径的大小以及色谱柱的直径，这就加大了填充剂的阻力，而检测泵耐压有高柱前压和高速液流；分辨率的稳定性、峰面积的重现性、定量精度、保留时间、流动相都直接影响到流速是否平稳，这就需要检测泵的流量稳定性误差（SR）比较小以及汞流量误差（SS）小。根据“输液系统的评价”的方法检测泵耐压，仪器平稳后高效液相色谱法优点显著，它的流动相种类多，检测灵敏度高，操作自动化，应用范围广，速度快，重复性高，分离效率高，选择性好，不受热稳定性限制，应用范围广，对于温度需求不高，室温下便可分析，分辨率高、精确度高等。仪器运行之后，需要维持压力平衡，并且使用滤纸检查各个管路连接的位置，确保没有渗漏问题。这就证明了泵耐压符合要求。泵流量设定值误差（SS）和流量稳定性误差（SR）均符合要求。

3.2 整机性能的评价

液相色谱仪主要部件包括色谱柱、进样器、输液系统和检测器等，其性能在峰面积、保留时间方面都会受到一定程度的影响，为了判断仪器整机运行性能，应用用相关方法来对液相色谱仪加以检测，如果峰面积的相对标准偏差不大于3.0%，色谱峰持续的时间同标准偏差对比不大于2.0%，就符合行业相关标准的规定。

3.3 系统适用性

为了分析液相色谱法能否用来检查实际样品，需要对系统进行适用性的试验，将制备得到的对照品液以及根据比例制作得到的混合液检测，将结果与安捷伦HP1100液相色谱相比，样品在安捷伦HP1100液相色谱仪、便携式高效液相色谱仪上的峰形、出峰顺序大体相同，相邻峰的分离度、各色谱峰超过了1.5，格列本脲、格列喹酮、罗格列酮、格列吡嗪和格列美脲的理论板数均超过了2 000，系统适用性试验符合要求。

3.4 线性关系

线性关系可以说是液相色谱在定量分析过程当中的关键，为了分析便携式高效液相色谱仪的色谱，对降糖药加以测定，在此过程当中持续记录色谱图。结果显示对照品的浓度（μg/ mL）与峰面积存在明显的线性关系。