丹参素在加温加速条件下的含量测定的教学体会

谢晓燕

长春中医药大学附属医院药学部，吉林长春 130021

丹参为唇形科植物丹参的干燥根及根茎，主要化学成分为水溶性酚酸和酯溶性二萜醌，药理作用为活血通经、祛瘀止痛、清心除烦。丹参素是丹参中含量较多的水溶性酚酸类化合物，具有改善冠脉循、抗血小板凝集、抗感染、拮抗钙等功效，广泛应用于心、脑、肝等疾病的活血化瘀治疗[1-3]。丹参注射液是临床常用丹参药物，主要成分为为邻苯二羟基类化合物丹参素，丹酚酸A、B、C，迷迭香酸，原儿茶醛、原儿茶酸、四甲基丹酚酸等。其中丹参素常作为预测、评价丹参注射液稳定性的参考指标。有研究发现丹酚酸A、B、C和迷迭香酸在加温条件下可发生酯键水解生成丹参素进而对丹参素含量测定造成干扰。临床实习教学工作是培养优秀的医务人才的重要步骤，该文选择2016年8月—2017年8月来该院实习的实习生14名作为研究对象，参与加温加速条件下丹参注射液中含量测定对照教学，效果良好，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

随机选取来该医院实习的实习生14名作为研究对象，将其随机分为试验组和对照组，每组7名。试验组：女性 4 名，男性 3 名，年龄 20～22 岁，平均（21.0±1.1）岁；对照组：女性3名，男性4名，年龄19～22岁，平均年龄（21.5±1.4）岁。两组实习生在年龄、性别、专业基础等基础资料方面差异无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 仪器与试剂

高效液相色谱仪（山东金普分析仪器有限公司）、超级恒温水浴箱(重庆)、电子天平、TGL216G高速台式离心机(上海安亭科仪器厂)、DVW210紫外检测器、Hypersil2ODS2色谱柱(4.6 mm×150 mm ，5 μm)；丹参注射液(自制，规格2 mL/支)；丹参素钠对照品(含测用)；其余试剂均为分析纯。

1.3 方法

对照组学生采用传统的教学模式进行教学，由带教老师按照临床实习教学大纲进行丹参素含量测定相关理论知识的讲授，并定期对学生进行考核，并听取学生和领导的教学反馈。试验组实习生参与带教老师的药品含量测定对照研究教学。①供试品的制备知识：丹参素对照品溶液的制备，称取150 mg丹参素钠对照品，溶于100 mL容量瓶，加水定容至刻度，摇匀灌封于2 mL安瓿中；丹参注射液，该实验室拟定工艺制备的1 g/mL丹参药材(规格2 mL/支)的注射液。②丹参素含量测定：采用HPLC进行丹参素含量测定，以甲醇0.2 mol/L醋酸铵(12∶88，H2SO4调节 pH=2.2)为流动相于280 nm下检测③恒温加速试验：取供试样品分别置于80、85、90、95℃的恒温水浴(温差±1℃)内加热。不同时间间隔定时取样，每次2支，迅速冰水浴冷却，混匀，依法测定含量。实习结束后，对两组实习生进行考核，考核内容包括理论知识治疗方法及对教学满意度等情况。

1.4 观察指标及判定标准

①丹参素含量变化。②实习生的考核成绩比较[4-7]。

1.5 统计方法

比较两组数据用SPSS 19.0统计学软件分析，计数资料采用百分比（%）表示，采用χ2检验，计量资料用均数±标准差表示，采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

表1 丹参素对照品、丹参注射液加温加速实验含量测定结果

2 结果

2.1 两组测定丹参素含量变化

该研究中丹参素含量在加温加速条件下含量变化见表1。在试验各温度下，试验组丹参素含量随加速时间的延长而增加，且温度愈高，加速时间愈长，含量增加愈多。

2.2 两组实习生考核成绩比较

试验组考核成绩明显好于对照组，试验组最高分为96分，最低分80分；对照组最高分83分，最低分76分，差异有统计学意义（t=1.67，P=0.002），见表 2。

表2 两组实习生考核平均成绩比较[（±s），分]

表2 两组实习生考核平均成绩比较[（±s），分]

组别平均分对照组（n=7）试验组（n=7）t值 P值75.06±5.45 88.21±5.13 1.67 0.002

3 讨论

丹参为唇形科植物丹参的干燥根及根茎，主要化学成分为水溶性酚酸和酯溶性二萜醌，具有活血通经、祛瘀止痛、清心除烦的药理作用。丹参制剂是临床常用的于心、脑、肝等疾病的活血化瘀治疗，其内含有的丹参素，是一种水溶性酚酸类化合物，具有明显的改善冠脉循、抗血小板凝集、抗感染、拮抗钙等功效。但是，丹参制剂容易受外界条件影响发生降解或者制剂中其他成分在加温加速条件下其他物质发生反应生成丹参素，进而影响药物制剂中丹参素的含量。测定丹参素的含量是临床评价预测丹参制剂质量及稳定性的重要参考指标。

在该研究中，试验组丹参素含量随加速时间的延长而增加，且温度愈高，加速时间愈长，含量增加愈多。分析其原因可能为加温加速条件下丹参注射液中含有的丹酚酸A，B，C及迷迭香酸等酚酸类化合物易发生酯键水解生成丹参素，从而使注射液中丹参素测定含量增加，此外，也要注意到加温加速条件下丹参素为酚酸类化合物，含邻苯二羟基，在水溶液中易解离形成氧负离子自动氧化而生成有色醌类物质，丹参素也会发生降解，故实际生成的丹参素含量会比测定值更高。故而在临床评估预测丹参制剂稳定性中，要综合考虑温度、时间的影响。丹参制剂教学方面，相较于对照组传统教学模式，试验组的教学方法更加深入、具体、全面，实习生对于丹参素含量测定相关理论知识掌握更充分、全面，对测试方法、注意事项、原理机制的理解也更具象，自主学习能力也有很大提升。该研究中试验组平均成绩为（88.21±5.13）分，对照组平均成绩为（75.06±5.45）分，实验组成绩明显优于对照组，经统计学分析，差异有统计学意义(P＜0.05)。

综上所述，加温加速条件，丹参制剂中丹参素含量增加，且温度愈高，时间愈长，含量愈多，在预测、评价丹参制剂的稳定性时要综合考虑温度时间的影响。在临床教学中，指导实习生积极参与药物含量测定的对照研究中，实习生对于药物基本知识、药理作用机制、药物间相互影响等相关理论的掌握更系统全面，临床操作技能明显提升，值得广泛推广应用。

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