快速分离检测婴幼儿配方奶粉中水溶性B族维生素

刘然 王东兴 张克禄 吕明明

1（国家轻工业食品质量监督检测天津站，天津300462）2（天津量信检验认证技术有限公司，天津30046）

快速分离检测婴幼儿配方奶粉中水溶性B族维生素

刘然1,2*王东兴1,2张克禄1,2吕明明1,2

1（国家轻工业食品质量监督检测天津站，天津300462）2（天津量信检验认证技术有限公司，天津30046）

B族维生素是维持人体正常机能与代谢活动不可或缺的水溶性维生素，人体无法自行制造合成，必须额外补充。由于婴儿摄入食品有限，必须通过奶粉来获取相应的营养，因此对婴儿配方奶粉的监管需要高速准确的方法来进行检测。婴儿配方奶粉中B族维生素含量相对偏低，尤其是B12，一般在30 μg/kg以下，而且只能利用微生物方法进行测定。该方法相对复杂，线性范围偏小，对稀释倍数要求严格，检验周期长，失败率相对较高。因此，建立婴幼儿儿配方奶粉中水溶性B族维生素的快速分离检测方法有重要意义。

1 材料与方法

1.1 仪器及试剂

H-class TQD液相串联质谱，WATERS公司；KQ3200DV超声波清洗器，昆山舒美公司；漩涡振荡器，大龙公司；高速离心机，sigma公司；CP224S赛多利斯万分之一天平。

VB1、烟酸、烟酰胺、VB6、VB5、VB9、VB12，VB2标准品，德国Dr.Ehrenstorfer；实验室用水，Milli-Q Academic制备；甲醇，Oceanpak色谱纯；甲酸，DIKMA色谱纯。

标准溶液配制：分别精确称取一定量VB1、烟酸、烟酰胺、VB6、VB5、VB9、VB12、VB2，充分溶解后移入棕色容量瓶中，纯水定容至100 mL，冷冻保存，工作液为纯水稀释，现用现配。

1.2 色谱条件

流动相：A：0.1%甲酸水B：0.1%甲酸甲醇；色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C182.1 mm×100 mm，1.7 μm；柱温：40℃；自动进样器温度：10℃；运行时间：6.5 min。

表1 梯度洗脱

1.3 质谱条件

毛细管电压：3.0 kV；锥孔电压：30 V；脱溶剂气温度：350℃；脱溶剂气流速：700 L/Hr；反吹气流速：50 L/Hr。

表2 质谱参数

1.4 样品前处理

准确称取5 g奶粉加入60 mL0.1 mol/L盐酸中，充分混匀后用棉花塞和牛皮纸封口，放入高压灭菌锅内，在121℃下灭菌30 min，待冷却至40℃以下后取出，轻摇数次；用2.0 mol/L乙酸钠溶液调pH值至4.0，加入2.0 mL木瓜蛋白酶及淀粉酶酶液，摇匀后，置于37℃培养箱中过夜；将酶解液转移至100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，滤纸过滤，取滤液13 000 r/min离心3 min，过孔径0.22 μm滤膜。

2 结果与讨论

2.1 色谱的选择

水溶性B族维生素VB1、烟酸、烟酰胺、VB6保留效果差，以95%甲酸水为起始流动相，出峰过快，不能进行有效的分离，信号差，峰型拖尾，通过前期摸索试验，选取99%甲酸水为起始流动相。

出峰顺序：VB1、烟酸、烟酰胺、VB6、VB5、VB9、 VB12、VB2。8种水溶性维生素总离子流图见图1。

图1 8种水溶性维生素总离子流图

2.2 方法线性范围及检出限

在1.5 μg/L～2 300 μg/L之间，8种维生素具有良好的线性关系，结果见表3。以信噪比S/N=3确定方法检出限，范围在0.014 μg/L～0.23 μg/L。

表3 线性方程、范围及检出限

2.3 样品前处理及结果

对于样品前处理，分别采用酸提取法、水浸提法、流动相溶解以及酶解法来进行，分别与国标方法进行比对，发现酶解法与国标方法结果十分接近。采用酶解法进行样品空白加标，进行三水平加标六平行试验测算回收率，结果见下页表4。

3 结论

利用LC-MS/MS检测婴幼儿配方奶粉中B族维生素的方法与国标方法比较相对简便，操作性更强，具有较低的检出限，同时具有相对较大的线性范围，回收率范围为80.8%～102.3%，具有良好的稳定性，相对标准偏差＜10%，该方法可以快速检测婴儿配方奶粉中B族维生素。

［1］夏静，俞婧，孙磊，等.功能性饮料中9种水溶性维生素的HPLC－MS－MS同步检测技术［J］.食品科学，2014，35（12）:196-199.

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［4］鲁杰，扬大进，王竹天.维生素B12化学分析法研究概况［J］.中国食品卫生杂志，2003，15（3）:248-252.

［5］鲁盛静，田野.婴幼儿食品和乳制品中维生素B12测定的探讨［J］.中国乳品工业，2013，41（2）:50-52.

Quick separation and detection ofwater soluble B vitam ins in infant formula m ilk powder

LIURan1,2*WANGDongxing1,2ZHANGKelu1,2LVMingming1,2

1（Tianjin unit ofnational light industrial food quality supervision and inspection，Tianjin 300462，China）

2（Tianjin Liang-Xin testing&fertification technology Co.,Ltd，Tianjin 300462，China）

采用WATERS XEVO TQD三重四级杆质谱仪，建立婴幼儿配方奶粉中VB1、VB2、VB3、VB5、VB6、VB9、VB12、烟酰胺的检测方法。经过梯度洗脱，所有化合物在6.5 min内洗脱出来，且具有良好的线性范围及回收率。

液相色谱串联质谱；B族维生素；婴幼儿配方奶粉

Amethod was established for determination of VB1、VB2、VB3、VB5、VB6、VB9、VB12and nicotinamide in infant formula by WATERS XEVO TQD LC-MS/MS.All of the compound were separated in 6.5 minutes,and had a good linear range and recovery.

liquid chromatography-tandem mass spectrometry（LC-MS/MS）；B vitamins；infant formula

TS252.7

A

1673-6044（2016）04-0053-02

10.3969/j.issn.1673-6044.2016.04.014

*刘然，女，1975年出生，2010年毕业于天津科技大学食品工程专业，硕士研究生，高级工程师。

2016-09-30