正交试验优化益骨颗粒的提取工艺Δ

彭红英，江 涛，杨滨宾，陈雪华，陈晓坚，刘敏珊(广州白云山敬修堂药业股份有限公司研究所，广州510130)

正交试验优化益骨颗粒的提取工艺Δ

彭红英＊，江 涛#，杨滨宾，陈雪华，陈晓坚，刘敏珊(广州白云山敬修堂药业股份有限公司研究所，广州510130)

目的:优化益骨颗粒的提取工艺。方法:采用L9(34)正交试验，以淫羊藿苷、龙胆苦苷、马钱苷酸转移率和出膏率的综合评分为评价指标，以乙醇体积分数、溶剂用量、提取次数、提取时间为考察因素，优化益骨颗粒的提取工艺并进行工艺验证。结果:优化的提取工艺为药材加10倍量60%乙醇回流提取2次，每次1 h。验证试验结果表明，淫羊藿苷、龙胆苦苷、马钱苷酸的平均转移率分别为81.28%、48.71%、59.82%(RSD分别为1.54%、2.37%、2.52%，n=3)，平均出膏率为31.48%(RSD=1.97%，n=3)。结论:优化的益骨颗粒提取工艺稳定可行、重复性好，可为后续的生产工艺研究提供依据。

益骨颗粒;正交试验;提取工艺;淫羊藿苷;龙胆苦苷;马钱苷酸

益骨颗粒处方源于暨南大学附属第一医院治疗骨质疏松症的院内制剂益骨胶囊，全方由淫羊藿、秦艽、杜仲等药材组成，具有补骨生髓、活血止痛的功效，临床上用于肝肾不足、瘀血阻络所致骨质疏松症，症见腰膝酸软、疼痛。益骨胶囊作为医院制剂在临床用于防治骨质疏松症已近20年，对210例绝经后骨质疏松症患者进行的为期6个月的前瞻性、随机双盲、安慰剂对照和阳性药对照的临床研究显示，益骨胶囊治疗组总有效率为95.5%，未见可能相关的毒副反应发生[1-2]。由于原制剂益骨胶囊采用传统的药材水提工艺，导致临床服用量大、制剂易吸潮、产品质量稳定性差，制约了该产品进一步的临床推广和应用。鉴于此，需对原制剂的提取工艺和剂型进行改进，将胶囊改为颗粒。因此，本文以相关活性成分淫羊藿苷、龙胆苦苷及马钱苷酸的转移率及出膏率为综合考察指标，采用正交试验法优化益骨颗粒的提取工艺，为今后该药的生产工艺研究提供试验依据。

1 材料

1.1 仪器

1260型高效液相色谱仪，包括G1311C型四元泵、G1322A型在线真空脱气机、G1329B型自动进样器、G1316A型柱温箱、G1315D型二极管阵列检测器(DAD)、ChemStation型色谱工作站(美国Agilent公司); KQ-600DE型数控超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司);XA105型电子分析天平(瑞士Mettler Toledo公司)。

你说的没错，学校是归联合校管理，可咱们学校在沙河村的一亩三分地上，他是坐家虎啊。他说了，要是学校不听他的，他就要停水断电，门前挖沟，还要收回学校的房子。杨校长眼里满是伤感和无奈。你也知道，以他的脾气，是说得出做得到的。

1.2 药材、药品与试剂

2.1.5 专属性试验 分别精密吸取上述混合对照品溶液、供试品溶液(60%乙醇提取样品)和阴性对照溶液各10μL，按“2.1.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。结果显示，在供试品溶液与混合对照品溶液色谱相应的位置上有相同的吸收峰，且阴性对照溶液无干扰，提示该测定条件具有较好的专属性，结果详见图1。

2 方法与结果

2.1 淫羊藿苷、龙胆苦苷和马钱苷酸的含量测定

2.1.3 供试品溶液的制备 取各提取工艺制备的益骨颗粒干膏粉约0.5 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入60%甲醇20m L，密塞，称定质量，超声处理(功率360W，频率40 kHz)30min，放冷，再称定质量，用60%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.1.1 色谱条件色谱柱:Agilent Eclipse Plus C18(250 mm×4.6mm，5μm);流动相:乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)，梯度洗脱(0～5 m in，9%～11%A;5～20 m in，11%～25%A;20～25m in，25%～30%A;25～35m in，30%A);流速:1.0 m L/m in;检测波长:254 nm;柱温: 25℃;进样量:10μL。

2.1.2 混合对照品溶液的制备 以60%甲醇为溶剂制备淫羊藿苷质量浓度为102.4μg/m L、龙胆苦苷质量浓度为502.4μg/m L、马钱苷酸质量浓度为101.5μg/m L的混合对照品溶液。

会上，吉林省土壤肥料总站研究员黄健作“吉林黑土地保护与利用”的报告。报告全面分析了当前吉林省内黑土地面临的形势和主要问题，阐述了吉林省黑土地保护的重要意义及采取的主要措施，对促进吉林省绿色农业发展有着积极作用。吉林省第十三届人民代表大会常务委员会第二次会议通过了《吉林省黑土地保护条例》，并于2018年7月1日起正式施行。《条例》明确了黑土地保护范围，包括耕地、林地、草地、园地和湿地等所有黑土地资源，对所有从事任何相关黑土地的各种行为及各部门职责均作出了明确规定，确保黑土地数量不减少，质量不降低，填补了我