近几年检测新技术在猪病诊断上的应用

卫秀余，魏 星

（1.上海市奉贤区动物疫病预防控制中心，上海 201400；2.上海星侃生物技术公司，上海 201404）

检测新技术

近几年检测新技术在猪病诊断上的应用

卫秀余1，魏 星2

（1.上海市奉贤区动物疫病预防控制中心，上海 201400；2.上海星侃生物技术公司，上海 201404）

随着养猪规模的不断扩大，对猪场疫病防控的要求也在不断提高；因为在大型猪场一旦发生某种疫病，从确诊采取正确的防控措施到恢复正常生产，往往需要3～6个月的周期甚至更长。由此将影响猪场至少6个月以上的生产水平，经济损失巨大。

因此规模猪场迫切需要一些疫情早期预警、免疫效果精准评估的检测技术；现将我们实验室近几年引进和创建的检测新技术在猪场的应用经验介绍如下，供大家参考。

1 口腔液样品检测抗原和抗体技术

基于口腔液中除了腺体分泌物外，还包含着黏膜细胞脱落物；所以其中不但含有机体免疫或感染产生的抗体，还存在着感染时随细胞脱落的各种病原体。

由于公猪的凶猛，采集血液样品比较困难，因此猪场公猪的免疫抗体检测普遍会遗漏；一些猪场猪蓝耳病、伪狂犬病的流行就是由于对公猪的监测不到位，使公猪成了非常重要的传染源。

目前通过口腔液可以检测到的抗原有：猪蓝耳病毒、伪狂犬病毒、圆环病毒等；可以检测的抗体有：猪瘟、猪蓝耳病、伪狂犬、圆环病毒和口蹄疫等。

口腔液的采集非常简便：在猪群喂料前1～2 h，在猪栏上悬挂白色棉纱绳、高度以猪站立时可以咬到为宜，让猪自由咀嚼棉纱绳20～30 min后把棉纱绳中的口腔液挤入保鲜袋中、再转入离心管中备用。

2 血清样品中检测霉菌毒素技术

由于猪场的饲料一般5～7 d更换一批原料，而每批原料都存在一定的质量差异，因此通过饲料样品中检测霉菌毒素来诊断猪群的霉菌毒素中毒时往往会出现误差。

而直接从疑似中毒猪群的血清样品中检测相关的霉菌毒素含量，就可以作为诊断依据；并且通过这一检测技术还可以用于霉菌毒素吸附剂吸附能力的评估。我们在添加某种霉菌毒素吸附剂前和添加吸附剂后14 d分别采集猪群血清样品，根据添加霉菌毒素吸附剂前后猪群血清中特定霉菌毒素含量的变化，可以判断出饲料中该霉菌毒素是否被吸附剂吸附（如果吸附了，血清中该霉菌毒素的含量就会显著下降）。

目前从血清样品中可以检测的霉菌毒素有：黄曲霉毒素、呕吐毒素、烟曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素等。

3 脐带血样品中检测抗原技术

要诊断某种病原是否会发生垂直传播，以前主要通过对流产胎儿或新生未哺乳仔猪内脏的检测来证实；不易采样且成本较高，所以在临床上应用较少。而根据一些实验研究，猪蓝耳病、圆环病毒、伪狂犬和猪瘟等病原体都可能通过怀孕母猪传染给胎儿；继而造成这些病原体在猪群中持续不断的流行和造成受感染仔猪的免疫抑制。

我们现在可以通过对脐带血中某种病原体的检出率来评估该猪群是否发生了该疫病的垂直传染，从而为制定该疫病的综合防控方案提供科学依据；但是，脐带血检测只能证实某种疫病在该猪场是否存在垂直传播，所以不能把它夸大为防控传染病的主要诊断手段。

4 免疫抗体精准评估技术

仔猪从母体获得某种疫病的免疫或野毒感染抗体，其持续时间都是有一定规律的。我们根据这些母源抗体的消长规律，就可以找到检测某种疫病免疫抗体的最佳日龄节点。

大量的检测数据证实猪蓝耳病的母源抗体（母猪免疫或野毒感染）一般维持到25～30日龄左右，而猪蓝耳病弱毒疫苗接种后其ELISA抗体在7～10 d左右即可检测到；根据大部分猪场仔猪蓝耳病的免疫日龄在2～3周左右，我们选择5～6周龄这个日龄节点、随机采血检测猪蓝耳病ELISA抗体，就可以避开母源抗体对检测结果的影响、早期评估该猪群的猪蓝耳病免疫是否成功。

虽然大量的实验数据证实猪蓝耳病ELISA抗体与真实的免疫保护力之间几乎没有相关性，但是疫苗或野毒感染后7～10 d即可检测到ELISA抗体同样得到了大家公认；因此我们认为通过检测猪蓝耳病的ELISA抗体至少可以证实疫苗毒是否感染成功，间接地反映了免疫效果。

同样的原理，我们选择8～9周龄仔猪检测圆环病毒2型ELISA抗体，可以进行圆环病毒疫苗免疫是否成功的早期评估；并且可以作为选择圆环病毒2型疫苗的重要依据。

5 猪蓝耳病的诊断标准

经常遇到猪场把保育仔猪出现的呼吸困难、毛色粗乱等症状简单地归类于猪蓝耳病，造成频繁更换猪蓝耳病疫苗和免疫程序，结果猪病依旧。

由于猪蓝耳病病毒在康复猪体内可以长期存在，最长可达175 d；部分猪蓝耳病弱毒苗免疫后同样可以维持较长时间的病毒血症。因此单纯把病猪样品中检测到猪蓝耳病抗原作为诊断依据，往往就会出现误诊！

根据实验室攻毒试验结果显示，猪蓝耳病发病猪都会出现肺弥漫性实变的病理变化；所以我们认为要确诊猪群是否正在发生猪蓝耳病，不能简单地根据抗原检测结果就作出诊断、必须要结合典型的临床症状和病理变化（肺出现弥漫性实变），三者同时具备才能确诊。目前有关猪蓝耳病防控上出现的困惑和争议都是由于诊断上存在的误区造成的！

2017-04-29）