在医学检验中应用实时荧光定量PCR的研究进展

李 鑫

（天津医科大学医学检验学院，天津 300221）

实时荧光定位PCR由于测定速度快、测定结果精准，实时荧光定位PCR的敏感性强，因此适用于医学检测。实时荧光定位PCR是指在原有的PCR反应体系当中加入荧光基团，通过荧光基团实时的检测和控制整个检测过程。由于加入荧光集团的操作步骤简单，能很大程度上的减少污染实验的几率，同时荧光标记更为精准，因此检测速度更快、检测效率更高，实时荧光定位PCR有点众多，除了在医学检验上应用外，还被应用于各个领域，实时荧光定位PCR技术还处于完善阶段，具有非常好的发展前景。

1 实时荧光定位PCR的基本概念

实时荧光定位PCR技术与传统的PCR技术相比，很多方面都有显著的提升。实时荧光定位PCR技术是在传统的PCR检测的基础上加入荧光基团，荧光基团的加入能够有效的解决假阳性与不能定位的问题，解决这一问题能够大大的提高检测的准确率。荧光定位PCR以特定探针和引物作为重要组成部分，PCR反应完成后，通过荧光曲线对实验数据进行分析，传统的PCR技术相比较荧光定位PCR技术敏感度较差，准确度较差，结果准确率低，因此荧光定位PCR技术被广泛应用于医学检测当中，能够提供更加精准的检测结果。

2 实时荧光定位PCR的检验原理

实时荧光定位PCR技术的检验原理包括两个方面，一个是数学原理，一个是化工原理。数学原理是通过函数图像和函数公式来计算，我们下面来简单介绍一下化工原理，实时荧光定位PCR技术，是在PCR技术上，又运用了探针和荧光染料，来达到理想的定位追踪。首先，是对引物的设计和对探针的设计，这是十分重要的，这个步骤直接影响到实验结果的准确程度。其次就是把引物和探针进行组合，对此进行荧光标记，先利用探针来把靶序列特异杂交的探针来对产物的量进行控制，再利用荧光染料对产物进行指示或标记，PCR在扩增的过程中应加入引物和一个荧光性探针，在检测物两端分别标记报告荧光基团和淬灭荧光基团。报告荧光基团对淬灭荧光基团发出信号，外切酶对探针进行降解，能够达到对检测物质进行实时的监测，实时荧光标记能够与DNA链达到实时的同步，并且能够有效的避免交叉感染，有良好的实验效果。

3 实时荧光定位PCR技术在医学检测方面的应用

荧光定位PCR技术是目前为止对DNA和RNA检验较为高效、精准率较高的方法，包括绝对定量分析和相对定量分析，这两种分析方法，可以有效的检测基因的拷贝数和浓度，同时对基因表达水平进行比较。在PCR检测的过程中，DNA拷贝数量与反应时间成正相关，直到RNA反应不以质数方式生成，检测结束。

4 荧光定位PCR技术当前的研究情况

我国在医学检验中使用了实时荧光定量PCR技术，实时定位PCR技术在检测癌基因方面表现突出，通过荧光定位技术能够通过荧光标记精准的检测出癌基因，在肿瘤早期早期进行诊断，对病情进行分析。除此之外，实时荧光定位PCR技术在药物研究方面表现也是非常突出的，在新药物的研究过程中，和药物后期的观测中，实时荧光定位能够快速的、高效的完成任务，使研发和实验都能够顺利完成，并且准确率较高，同时避免交叉污染。实时荧光定位PCR技术为我国的医学方面做出了极大地贡献，也是医学检验中对实时荧光定位PCR技术大量使用的原因。实时荧光定位PCR技术是近年来较为热门的技术之一，实时荧光定位技术是当前我们所能够掌握的技术当中，检测度最精准、最快速、最高效的方法之一。

5 总 结

当前实时定位PCR技术是非常热门的检验技术，荧光定位PCR技术比传统的PCR技术有较强的优势，是临床医学和新药物的研究的实用性极高的工具，与此同时，实时荧光定位PCR技术精确度高、准确性高的一个较为热门的DNA、RNA检测技术，通过引物探针能够得到准确的实验数据，通过荧光曲线达到理想的实验效果，能够精准的得出实验数据，已经被广泛的应用到现代的医疗检测当中。

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