青蛤苗种繁育技术及不同盐度对青蛤发育各阶段的影响

梁健+李永仁+郭永军+高山+董洪宝+邢克智+闫喜武

摘 要：于2015年7月在天津大港地区开展青蛤的工厂化人工育苗生产性试验，以探索青蛤最适的孵化密度和培育密度；并通过设置10个盐度阶梯（5‰～50‰），研究了不同盐度对青蛤发育各阶段的影响。试验结果表明：青蛤受精卵孵化密度为8～12个/mL，其孵化率能达较高水平，幼虫培育密度为8～12个/mL时幼虫生长速度和存活率可达较高水平；浮游期幼虫、变态期幼虫及稚贝的最适盐度范围均是20‰～25‰，最利于青蛤浮游幼虫的生长，其变态率高，畸形率低，D形幼虫游动迅速，摄食积极。此盐度也最利于稚贝的生长。

关键词：青蛤；盐度；孵化；成活率

青蛤（Cyclina sinensis）属帘蛤科，栖息在沿海滩涂泥滩地带，为广温、广盐性贝类。其营养丰富，味道鲜美，深受人们喜爱，曾广泛分布于沿海大部分海水池塘，但由于缺乏保护意识，长期过度采捕，导致自然资源大幅减少，天津地区现仅存于塘沽与大港的个别海水池塘[1-3]。因此对青蛤的人工养殖正逐步开展起来，并取得良好的收益。养殖青蛤投资少、见效快，但是由于苗种缺乏，限制了青蛤养殖业的发展[4-6]。

目前来说天津地区养殖贝类的苗种主要来自南方的一些沿海地区，但这样的苗种并不能完全适应本地的养殖环境，造成越冬养殖时大量死亡，限制天津地区的青蛤产业发展。利用本地贝类种群，进行工厂化人工繁育土著苗种，是在天津发展贝类养殖产业的重要前提[7-8]。而发展青蛤的人工育苗技术，为青蛤的养殖提供本地苗种，可以更快地实现农民增收、企业增效、产业发展。

关于青蛤方面的研究起步时间较晚，我国学者对青蛤的生态结构、繁殖生物学、生活习性等都进行了研究，在工厂化和土池育苗试验成功后，又对青蛤幼虫的饵料，孵化和培育时的温度、盐度，附着基的选择和其他方面都做了深入的研究，大规模青蛤育苗技术和水平都比之前更进一步。但这些研究的对象主要为南方当地品种，而我国海岸线很长，地理环境存在着巨大差异。闫喜武[9]等报道过菲律宾蛤仔大连群体和莆田群体在卵径、D形幼虫大小、浮游期长短及平均日增长量上均存在差异。盐度是影响双壳类存活、生长发育的重要因素之一，当盐度不适宜时会降低海洋贝类幼虫对食物的消化吸收效率和不良环境的抵抗能力，严重影响贝类幼虫的存活和生长能力[10]。关于海水盐度对于贝类生长发育的影响国内外已有不少报导，但因种类和发育阶段的不同，适应范围的差异也比较大[11-12]。在繁殖过程中，贝类幼虫对盐度的变化较为敏感，在最适盐度范围内进行青蛤苗种繁育工作可以保证幼虫有较快的生长速度，同时提高苗种的存活率[13-15]。因此，本文研究了盐度变化对天津土著青蛤浮游期及稚贝期的影响，对青蛤不同时期的存活生长进行了比较，分析了不同时期的青蛤对盐度的适应策略，对在天津开展青蛤本地苗种繁育具有重要意义。

1 试验材料

本次人工育苗试验于2015年4月中旬开始进行，分两批次在天津市滨海新区海升水产养殖有限公司的沉淀池中采捕二龄的青蛤，选择壳面无损坏，活力良好，壳长大于30 mm的个体作为种贝，种贝为本地土著品种。

2 试验设计

2.1 孵化密度、幼虫培育密度对青蛤幼虫变态率、生长和存活影响

挑选好的种贝装入扇贝笼中吊挂在室内水泥池中，经25天左右的升温催熟达到性成熟，通过阴干流水等方法刺激种贝产卵排精，卵受精4 h后进行洗卵，以免造成受精卵产生畸形。洗卵后将受精卵分布到孵化池中，调整密度为4、8、12、16个/mL，大概20 h后发育到D形幼虫，测量不同孵化密度下的孵化率。每天半量换水一次，水温25～28 ℃，青蛤培育期间盐度18‰～22‰，pH值8.4～8.6。

2.2 盐度对青蛤各时期生长发育和存活的影响

青蛤幼虫及稚贝的培育容器为2L的烧杯，在5‰～50‰之间设计10个梯度，分别为5‰、10‰、15‰、20‰、25‰、30‰、35‰、40‰、45‰、50‰，并设一个平行试验组。试验所用的海水都是经过沙滤的海水，用海水晶或淡水调节至所需的盐度，使用日本ATAGO手持光学盐度计测定盐度，水温在25～28 ℃。受精卵孵化密度为15个/mL，浮游期幼虫培育密度为8个/mL，每天半量换水一次，测定不同盐度下青蛤受精卵孵化率、浮游期幼虫和稚贝的生长、存活及变态率。

孵化期试验：凡出现壳面扭曲，左右壳不对称，直链绞合部弯曲，壳缘有缺刻，面盘异常的D形幼虫计为畸形幼虫。

浮游期试验：在不同盐度的10个烧杯中布置相同密度（8个/mL）的青蛤D形幼虫，平均壳长在111±6.41 μm，共培育5 d（青蛤浮游期相对较短）。

稚贝期试验：在育苗生产的水泥池中取大小规格基本一致的匍匐幼虫用于稚贝变态试验，平均壳长在180±9.18 μm，培养20 d左右（双水管稚贝出现为止）。

3 结果

3.1 孵化率

如表1所示，青蛤受精卵孵化密度为8～12个/mL时，其孵化率能达到80%以上，而过低或过高的培育密度均会影响受精卵的孵化率。

由表2和表3可知，4个/mL的培育密度下生长速度最快，但存活率较低，16个/mL的培育密度生长速度最慢，且存活率也最低。在8～12个/mL的条件下生长速度和存活率均处于较高水平。

3.2 盐度对青蛤孵化情况的影响

由图1可知，在25～28 ℃的水温下，青蛤受精卵可在10‰～40‰的盐度范围内发育到D形幼虫，但在10‰和40‰的盐度中变态非常低，分别为11.5%和22.6%，绝大多数受精卵在发育到担轮幼虫前后就不再发育，不久沉底死亡；在盐度5‰、45‰和50‰的孵化条件下，受精卵不能正常分裂发育；适合受精卵孵化盐度范围是15‰～30‰，而最适孵化的盐度范围为20‰～25‰，其变态率在82.3%～84.6%，且畸形率低，D形幼虫游动迅速，摄食积极。

3.3 盐度对浮游幼虫生长、存活及变态的影响

D形幼虫刚放入5‰的盐度环境中后，全部紧闭双壳，沉入杯底，显微镜下观察壳内的面盘和胃内纤毛仍在运动，48 h后全部死亡；在10‰盐度环境下，D形幼虫在24 h内游动正常，未表现出不适状态，但随时间的延长死亡量逐渐增多，3 d后达到45%以上，且存活下来的幼虫生长速度偏慢，试验结束时的平均生长率仅为4.76 μm/d；D形幼虫对高盐度反应明显，在盐度40‰下5d后的存活率为36.2%，而存活下来的幼虫大多处于壳顶中期，并无法变态成匍匐幼虫。盐度45‰组中，5 d后的幼虫存活仅为12.5%，几乎没有生长，平均生长率2.64 μm/d，试验结束时仍处于D形幼虫阶段。而在盐度50‰环境下的幼虫游动异常，在24 h内便全部死亡，无法存活；青蛤浮游幼虫在15‰～30‰的盐度范围下适合生长，20‰～25‰是最适宜青蛤浮游幼虫的盐度范围（表4）。

3.4 盐度对稚贝生长、存活及变态的影响

表5所示，匍匐幼虫在盐度5‰的低盐环境和45‰的高盐环境中，在24 h时死亡率即超过50%，经过一段时间的培养仅有极少量个体发育至单水管稚贝，但无法发育至双水管稚贝；在50‰的超高盐度环境中72 h内匍匐幼虫便全部死亡；在盐度40‰组中经过22 d的发育有12.5%的个体发育至双水管稚贝，但次盐度下的稚贝生长速度较慢，平均日生长率仅为4.82 μm/d，且大小参差不齐，活力较差，壳表面粘有大量污物；盐度在10‰～35‰的各试验组中，双水管稚贝的存活率均超多50%，即超50%的个体发育变态成双水管稚贝，且在匍匐幼虫时期运动能力强，足强劲有力，摄食良好，生长速度较快。其中盐度20‰～25‰中，单水管期稚贝的存活率均超过85%，日生长率也超过了10 μm/d，发育到双水管稚贝时的存活率仍然在80%以上，且日生长率达到12 μm/d左右，稚贝不仅大小整齐、活力良好，而且所需的变态时间也为最短，仅需14 d左右。10‰～35‰为稚贝生长的适宜盐度范围，在20‰～25‰之间最为合适。

4 讨论

4.1 孵化密度、培育密度对生长、存活的影响

本研究结果显示青蛤受精卵孵化密度为8～12个/mL时，其孵化率能达到80%以上；生长速度最快是在4个/mL的培育密度下，但存活率较低，生长速度最慢是在16个/mL的培育密度，且存活率也最低。在8～12个/mL的条件下生长速度和存活率均处于较高水平，综合考虑，青蛤的最适培育密度为8～12个/mL。

4.2 青蛤发育情况

滩涂贝类是我市主要的水产产业之一，但贝类苗种来自外地，在本地适应性差。建立本地土著青蛤群体的育苗技术，有助于降低养殖风险。天津青蛤群体主要生活于海水池塘中，盐度差异显著，青蛤的幼虫发育与常见的文蛤、菲律宾蛤仔等滩涂双壳类相比较有许多不同，其卵径和D形幼虫均要大于其他种类，但浮游期最短、附着变态时幼虫规格最小，20 d后变态成双水管稚贝仅320～340 μm，比其他种类相同天数的稚贝壳长要小，说明青蛤稚贝的生长速度并不快。本研究中青蛤的最快生长速度为12.48 μm/d（盐度20‰时），较其他种类要慢一些，符合上述结论。青蛤浮游期短，说明从外界获取食物的时间短，外源性能量积累相对较少，这可能是导致其变态规格相对较小的原因。

4.3 适宜青蛤生长的盐度

生活在海洋中的贝类，必然受到盐度的影响。由于不同种类对海水环境的要求不同，造成了对不同盐度的适应性[16]。海水盐度与贝类渗透压的调节紧密相关，一旦海水盐度的变化范围超过了海洋生物的调节能力，就可能造成生物体的死亡[17]。本试验得出孵化期和浮游期幼虫的适宜盐度范围为15‰～30‰，变态期的适宜盐度范围10‰～35‰，最适盐度范围均为20‰～25‰。结果表明，幼虫对低盐环境的适应能力要强于高盐环境，并且在低盐环境中生长速度快于高盐。随着幼虫的发育和相应器官的形成，对盐度的耐受能力逐渐增加，适宜盐度范围也逐渐变广。这种现象广泛出现在广盐性贝类中，如泥蚶、文蛤等。而对于狭盐性贝类正好相反，如菲律宾蛤仔等[18-20]。这种适应性可能是由于青蛤自然分布于河口附近滩涂的中高潮带处，经常性的淡水汇入加之长期的自然进化造成青蛤对盐度的广泛适应性，并表现出对低盐环境的适应能力高于高盐环境。

5 结论

以上试验结果对青蛤人工育苗生产有重要的指导作用：

土池育苗或工厂化育苗前期海水盐度变化幅度应控制在20%～25%为宜；室内人工育苗生产中，青蛤受精卵孵化密度为8～12个/mL时，能够保证有较高的孵化率；青蛤的最适培育密度为8～12个/mL。

进入变态期后，幼虫要经历足、鳃、次生壳、进出水管的形成及面盘的退化等一系列的生理机能和生活习性的重大改变，才能变态发育成稚贝，育苗生产往往在这段时期出现较高死亡率，所以幼虫下潜附着后的半个月时间里技术管理工作显得尤为重要，应保证饵料的充足、营养的全面及水质的良好。

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（收稿日期：2016-11-18）