清解益肺汤及胶囊对lewis肺癌小鼠血清IL-2、INF-含量的影响

刘炜 易鑫 李江 王江江

(1.贵阳中医学院第二附属医院，贵州 贵阳 550003；2.贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002)

清解益肺汤及胶囊对lewis肺癌小鼠血清IL-2、INF-含量的影响

刘炜1易鑫2李江2王江江2

(1.贵阳中医学院第二附属医院，贵州 贵阳 550003；2.贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002)

目的 研究清解益肺汤及胶囊剂对lewis肺癌小鼠脾脏指数以及血清白介素-2(IL-2)、γ-干扰素(INF-)水平的影响。方法 建立C57BL/6J雄性小鼠lewis肺癌模型，并随机分为空白对照组，模型对照组，中药高、中、低剂量组，顺铂组，顺铂+中剂量组，中药胶囊组，每组10只，连续给药14 d 。观察lewis肺癌小鼠脾脏指数：采用ELISA法检测小鼠血清中IL-2、INF-γ的含量。结果 顺铂组与模型组相比较脾脏指数降低(P<0.05)，联合组以及中药各组脾脏指数均增加(P<0.05)；联合组与顺铂组比较脾脏指数增加(P<0.05)；与模型组相比较各中药组IL-2、INF-含量均增加(P<0.05)。结论 清解益肺汤及胶囊能提高肺癌小鼠脾脏指数，并能一定程度解除化疗对机体的免疫抑制作用，通过上调血清IL-2、INF-水平来增强T细胞介导的细胞免疫功能，发挥抗肺癌作用。

清解益肺汤及胶囊剂； lewis肺癌； 白介素-2(IL-2)；γ-干扰素(INF-)

肺癌是当今世界上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，其中非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer, NSCLC)约占全部肺癌的80%～85%，并且大部分患者就诊时己属中晚期(Ⅲ-Ⅳ期)[1]。多项临床研究证实，对于肺癌患者其细胞免疫功能会受到不同程度抑制，从而造成肿瘤的转移、复发。肺癌患者体内常表现为免疫功能抑制状态[2]，临床上多表现为气阴两虚型，中药复方特别是益气养阴复方多具有改善免疫功能作用。清解益肺汤是基于苗族传统的用药经验，并结合中医方剂理论中清热解毒、益气养阴的治法而成，全方由白花蛇舌草、半枝莲、龙葵、黄芪、沙参、薏苡仁、莪术七味中药组成，主要适用于气阴两虚型中晚期肺癌，其汤剂已经过大量临床病例证实其安全性和有效性[3]。本课题采用C57BL/6J雄性小鼠lewis肺癌模型，观察清解益肺汤及胶囊对lewis肺癌小鼠血清IL-2、INF-γ水平的影响，初步阐明其抗肺癌的作用及免疫学机理。

1 材料与方法

1.1 材料

C57BL/6J雄性小鼠，SPF级，体质量18～20 g(第三军医大学实验动物中心)，动物合格证号：SCXK(军)2012-0011；实验动物饲养环境：贵阳中医学院实验动物中心。细胞株：小鼠lewis肺癌细胞珠(LLC)，来自ATCC细胞库(细胞编号：CRT-1642)。

1.2 药物及试剂

清解益肺汤(黄芪30 g、沙参30 g、白花蛇舌草15 g、半枝莲15 g、薏苡仁15 g、莪术10 g、龙葵15 g)，常规方法制成煎剂含生药1.3 g/mL，根据给药剂量和给药体积配成相应浓度。清解益肺胶囊(贵阳中医学院生药制剂室提供，规格：含生药1.3 g/mL)。顺铂(DDP，20 mg/支)(国药准字：H20030675，产品批号：20131013，南京制药厂有限公司)。主要试剂：小鼠IL-2 ELISA试剂盒、小鼠INF-ELISA试剂盒(美国RD公司产品)，Hyclone胎牛血清(批号：SV30087.01)。

1.3 仪器

超净工作台、酶标仪(北京新风ZS-3型)、8联排移液器(BRAND)离心机(湘仪贝克TGL-20 M台式高速冷冻离心机)、37℃恒温箱(天津泰斯特202-2AB电热恒温箱)、自动洗板机(北京拓普DEM-3)、精密电子天平。

1.4 方法

lewis肺癌小鼠造模与分组：采用小鼠lewis肺癌移植瘤模型。无菌条件下选取生长良好的C57BL/6J荷瘤小鼠瘤组织，按瘤重∶生理盐水1∶3比例制成瘤细胞悬液，用生理盐水调整细胞浓度为1×107/mL，每只0.2 mL接种于除空白对照组外的其余各组小鼠右前腋窝皮下。并随机分为：空白对照组，模型对照组，中药高、中、低剂量组，顺铂阳性组，顺铂+中剂量组，中药胶囊组。接种瘤细胞24 h后开始给药，空白对照组，模型对照组：均予灭菌生理盐水0.4 mL灌胃，1次/d，连续给生理盐水14 d；中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组：分别灌胃含生药2.6 g/mL、1.3 g/mL、0.65 g/mL的药液0.4 mL，1次/d，连续给药14 d；中药胶囊组：1.3 g/mL生药浓度灌胃，0.4 mL/只，1次/d，连续给药14 d；中剂量+顺铂组：1.3 g/mL浓度中药0.4 mL灌胃，1次/d，连续给药14 d，顺铂0.3 mL腹腔注射，1次/隔日；顺铂阳性组：按每只2 mg/kg·d-1剂量给药，用生理盐水稀释成0.2 mg/mL浓度，0.3 mL腹腔注射，1次/隔日。于末次给药24 h后处死小鼠，进行检测。

1.5 观察指标

(1)荷瘤小鼠脾脏指数测定：末次给药24 h后脱颈处死小鼠，无菌摘取小鼠脾脏，迅速于精密电子分析天平上称重，计算各组小鼠脾脏指数。计算公式：脾脏指数=脾脏重量(mg)/体质量(g)。(2)ELISA法检测各组lewis肺癌小鼠血清IL-2、INF-γ水平：摘取小鼠眼球留取血液，全部血液标本静置30 min后，放入离心机中，2 000 rpm离心15 min，收集上清液置于-80℃低温冰箱保存。取出小鼠IL-2、INF-ELISA试剂盒严格按照说明书进行操作，用OD450检测，绘制标准曲线，各组样本的IL-2、INF-含量根据OD值由标准曲线得出相应浓度。

1.6 统计学处理

2 结 果

2.1 清解益肺汤及胶囊对lewis肺癌小鼠脾脏指数的影响

顺铂组与模型组相比较脾脏指数降低(P<0.05)，联合组以及中药各组脾脏指数均增加(P<0.05),联合组与顺铂组比较脾脏指数增加(P<0.05)。见表1。

组别只数脾脏指数(mg/g)空白对照组105.90±0.32模型对照组101.94±0.22中药高剂量组105.30±0.31*中药中剂量组104.86±0.52*中药低剂量组103.16±0.37*顺铂阳性组81.38±0.26▽顺铂+中剂量组102.65±0.37*°中药胶囊组105.42±0.63*

注：与模型组相比，▽P<0.05；与顺铂组相比，°P<0.05；与模型组相比，*P<0.05。

2.2 清解益肺汤及胶囊对lewis肺癌小鼠血清IL-2、INF-水平的影响

模型组小鼠血清IL-2、INF-含量明显低于空白组；与模型组相比较各中药组IL-2、INF-含量均增加(P<0.05)。见表2。

组别只数IL-2(pg/mL)INF-ɤ(pg/mL)空白对照组10128.68±4.98*581.19±11.66*模型对照组1052.84±2.75▽211.13±14.41▽中药高剂量组1097.29±3.47*476.73±10.38*中药中剂量组1084.13±3.19*407.63±14.31*中药低剂量组1074.27±2.84*344.87±10.1*顺铂阳性组834.53±2.94184.81±13.94顺铂+中剂量组1058.38±2.48*300.88±10.76*中药胶囊组1096.44±3.61*469.41±12.22*

注：与空白组相比，▽P<0.05；与模型组相比，*P<0.05。

3 讨 论

CD4+T细胞活化后可产生多种细胞因子，主要分为Th1和Th2两个亚群，其中IL-2和INF-是Th1介导细胞免疫发挥机体免疫功能的两个重要因子。IL-2是机体最主要、最强有力的T细胞生长因子，它是保障机体正常免疫功能的关键因素。IL-2抗肿瘤作用不是直接杀伤肿瘤细胞，主要通过诱导和激活免疫细胞杀伤肿瘤细胞，解除肿瘤浸润淋巴细胞的免疫抑制状态并增强其免疫功能。IL-2的水平是反映肿瘤免疫功能的一项重要指标．Neuner等[4]研究证实IL-2在NSCLC患者体内处于受抑制状态，其表达可以作为非小细胞肺癌预后的重要因子。INF-可诱导Th1细胞分化，激活巨噬细胞，直接杀伤肿瘤细胞。IL-2能诱导杀伤细胞分泌INF-细胞因子，两者协调增强机体免疫，发挥抗肿瘤作用。

本组资料结果显示，清解益肺汤及胶囊能提高lewis肺癌小鼠免疫功能，并在一定程度上抑制化疗导致的脾脏指数的下降，保护机体免疫能力，增强化疗疗效。清解益肺汤及胶囊能上调血清IL-2、INF-含量来增加Th1细胞因子表达，从而改善lewis肺癌小鼠T细胞介导的细胞免疫功能，发挥抗肺癌作用。清解益肺汤作为苗药复方制剂，含有多种活性成分，其抗肿瘤作用机制，可能是多途径，多靶点，本文只从细胞免疫方面初步探讨了其抗肿瘤机制，后期我们还将进一步从其它途径来研究该复方制剂，以期从苗医药领域探索新型抗肿瘤药物。

[1] 中国抗癌协会肺癌专业委员会.2010中国肺癌临床指南[S].北京：人民卫生出版社，2010：1.

[2]SimanG，GinsbergRJ，RuckdeschlJC.Small-celllungcancer[J].ChestSurgClinNAm，2001，11(1)：165-188．

[3] 刘炜.清解益肺汤治疗老年晚期肺细胞肺癌56例疗效观察[J].医学理论与实践,2011，24(24)，2960-2961．

[4]NeunerA，SchindelM，WildenbergU，etal.Prognoslicsignificanceofcytokinemodulationinnon-small-celllungcancer[J]．IntJCancer，2002，101(3)：287-292．

The influence of Qingjieyifei decoction and capsule to the content of serum INF-γand IL-2 on lewis lung carcinoma in mice

LiuWei1,YiXin2,LIJiang2,WanJiangJiang2.

1.GuiyangCollegeofTraditionnalChineseMedicine,Guiyang550002,China.2.SecondHospitalAffiliatedtoGuiyangCollegeofTraditionnalChineseMedicine,Guiyang550003,China.

Objective To study the influence of Qingjieyifei decoction and capsule the content of serum INF-γ、IL-2 and spleen index on lewis lung carcinoma in mice .Methods: The male mouse model ofC57BL/6J was built to do the experiments. They were randomly divided into normal group, model group, the traditional Chinese medicine high, middle, low dose group, cisplatin group, cisplatin +middle dose group, Chinese medicine capsule dose. Each group were given medicine respectively.Observing spleen index and using the method of ELISA to detect the contents of serum IL-2、INF-γ. Results: Cisplatin group has lower spleen index compared with model group(P<0.05).Unions and traditional Chinese medicine groups have higher spleen index(P<0.05). Chinese medicine groups have higher contents of serum IL-2、INF-γcompared with model group(P<0.05). Conclusion: Qingjieyifei decoction and capsule can improve lung cancer in mice spleen index and to a certain extent to lift the immunosuppressive effect of chemotherapy ,on increase serum levels of IL-2, INF-γ to enhance cellular immune function of T cell mediated, play the anti-lung cancer effect.

Qingjieyifei decoction and capsule , lewis lung，IL-2，INF-γ

贵州省科学技术联合基金项目[No：2010LKZ7005]

R-332

A

1000-744X(2016)02-0153-03

2015-07-16)