帕洛诺司琼贴剂的含量测定方法

惠 美，权 鹏，方 亮

（沈阳药科大学 药学院, 辽宁 沈阳 110016）

帕洛诺司琼贴剂的含量测定方法

惠 美，权 鹏，方 亮*

（沈阳药科大学 药学院, 辽宁 沈阳 110016）

目的建立帕洛诺司琼贴剂的含量测定方法。方法采用甲醇萃取出帕洛诺司琼贴剂中的药物，并利用HPLC法对其含量进行测定，同时对方法的专属性、精密度及回收率进行考察。结果帕洛诺司琼贴剂的含量为(1.040 3×10-3± 4. 653 0×10-5) g·cm-2；方法的专属性良好；帕洛诺司琼的质量浓度在 0.16～ 40.95 mg·L-1内和帕洛诺司琼与内标尼泊金丙酯的吸收峰面积之比呈良好的线性关系，回归方程为A药/A内标= 4.41×10-2ρ + 1.99×10-2(r = 1)；日内和日间精密度均小于2%，达到分析要求；3种质量浓度的样品回收率均在98%～102%内。结论帕洛诺司琼贴剂的含量测定方法简便、可靠，可以为后续的研究提供实验基础。

药剂学；贴剂；高效液相色谱法；帕洛诺司琼；含量测定

帕洛诺司琼为第二代5-HT3受体拮抗剂，化学名为(3aS)-2-[(3S)-1-氮杂双环[2，2，2]辛烷基-2，3，3a，4，5，6-六氢-1-氧代-1H-苯并[de]异喹啉，化学结构式见图1，主要用于化疗后恶心呕吐的防治[1-4]。

帕洛诺司琼贴剂是将帕洛诺司琼分散于压敏胶中并贴敷于人体完整皮肤上，控制药物释放进入全身系统的剂型[5]。制剂中药物的含量直接影响其用药安全性和有效性，因此对于任何一种制剂，含量测定都是必须的一项质量要求，贴剂也不例外。除此之外，了解帕洛诺司琼贴剂中的药物含量，有助于计算帕洛诺司琼贴剂的生物利用度及其均匀度。而均匀度是体外经皮透过实验和释放实验的基础，因此有效的建立帕洛诺司琼贴剂的含量测定方法显得尤为重要。国内外文献中并未见对帕洛诺司琼贴剂含量测定方法的研究。本文作者利用甲醇来萃取帕洛诺司琼贴剂中的药物，并利用HPLC法对其含量进行测定，同时对方法的专属性、精密度及回收率进行考察。

Fig. 1 Chemical structure of palonosetron图1 帕洛诺司琼的化学结构式

1 仪器与材料

AL-104电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司），高效液相色谱系统包括L-7100泵、L-7420可变波长紫外吸收检测器、L-2200 自动进样器（日本日立公司）， HT-230A柱温箱（天津恒奥科技发展有限公司），SZ-96自动纯水蒸馏器（上海亚荣生化仪器厂）。

帕洛诺司琼（纯度质量分数＞99.9%，天津富宇精细化工有限公司），冰醋酸、三乙胺（天津博迪化工有限公司），甲醇（色谱纯，江苏汉邦实业有限公司），尼泊金丙酯（天津远航化学品有限公司），帕洛诺司琼贴剂（自制）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Diamonsil C1 8柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-体积分数0.5%乙酸的重蒸水溶液(体积比65∶35)，三乙胺调pH值至6.7；内标溶液：10 mg·L-1尼泊金丙酯的甲醇溶液；检测波长：242 nm；柱温：40 ℃；流速：1.0 mL·min-1；进样量：20 μL。

2.2 专属性考察

制备不含主药的空白贴剂（规格同含药贴），按“2.6”条贴剂含量测定方法进行操作，得到色谱图2A；色谱图2B为贴剂含量测定的实测图。由色谱图可知，在该色谱条件下贴剂中的其他成分对药物的测定无干扰。

Fig. 2 Chromatogram of drug content determination for the blank patch (A) and the palonosetron patch (B)图2 空白贴剂(A)和帕洛诺司琼贴剂（B）的含量测定色谱图

2.3 标准曲线的制备

内标尼泊金丙酯溶液的制备：精密称取尼泊金丙酯50.0 mg置于50 mL量瓶中，加入适量流动相溶解后再用流动相定容至刻度，配成质量浓度为1 g·L-1的尼泊金丙酯母液。精密量取母液0.5 mL置于50 mL量瓶中，用流动相定容至刻度，即得10 mg·L-1的内标溶液。

帕洛诺司琼系列标准溶液的制备：精密称取盐酸帕洛诺司琼2.30 mg（约相当于帕洛诺司琼游离碱2.05 mg），置于50 mL量瓶中，加入适量甲醇溶解后再用甲醇定容至刻度，配成质量浓度为40.95 mg·L-1的帕洛诺司琼母液。分别精密量取上述帕洛诺司琼母液0.1、0.3和1 mL置于25 mL量瓶中和1、3和5 mL置于10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀。即得质量浓度分别为0.16、0.49、1.64、4.10、12.29、20.48和40.95 mg·L-1的帕洛诺司琼系列标准溶液。

分别取上述系列标准溶液各200 μL，加入等体积的内标溶液，混匀后精密量取20 μL注入液相色谱仪，在“2.1”条色谱条件下进行测定，得药物与内标的峰面积，计算其比值(A药/A内标)并以帕洛诺司琼的质量浓度(ρ)对该比值进行线性回归，得到标准曲线方程为：A药/A内标= 4.41×10-2ρ+ 1.99×10-2（r = 1）。

结果表明，帕洛诺司琼的质量浓度在0.16～ 40.95 mg·L-1内与峰面积比呈良好的线性关系。

2.4 精密度考察

配制质量浓度分别为0.16、12.29和40.95 mg·L-1的帕洛诺司琼溶液，加入等体积的内标溶液，混匀后在同一天内分别连续进样3次，得药物与内标的峰面积之比，计算该比值的相对标准偏差，得方法的日内精密度。连续测定3 d，同法计算，得到方法的日间精密度，结果见表1。日内精密度RSD 和日间精密度 RSD均小于2%，均达到分析要求。

Table 1 Intra-day and inter-day precision determination of the method表1 分析方法的日内和日间精密度

2.5 贴剂含量测定的回收率考察

精密称取帕洛诺司琼游离碱80、100和120 mg，分别置于50 mL量瓶中，一式3份。同时将9片直径为 2.4 cm的圆形空白贴剂，揭去防层，分别置于上述量瓶中，加甲醇定容摇匀。样品于1.6×104r·min-1低温离心5 min后，取上清液200 μL，加入等体积的内标溶液，混匀，取样品20 μL在“2.1”条色谱条件下进行测定，结果见表 2。

Table 2 Recovery of palonosetron patch content determination表2 帕洛诺司琼贴剂含量测定方法的回收率

2.6 贴剂含量测定方法

随机选取自制的帕洛诺司琼贴剂5片（规格为直径2.4 cm，面积4.52 cm2的圆形贴剂），撕去防层，分别放到50 mL锥形瓶中，加入甲醇20 mL超声20 min，然后转移至50 mL量瓶中，甲醇定容摇匀。样品于1.6×104r·min-1低温离心5 min后，取上清液200 μL，加入等体积的内标溶液，混匀，取样品20 μL在“2.1”条色谱条件下进行测定。3批帕洛诺司琼贴剂的含量测定结果见表3。

Table 3 Results of content determination of palonosetron patch.表3 帕洛诺司琼贴剂含量测定结果

2.7 稳定性试验

按“2.6”条方法操作，将制备好的帕洛诺司琼贴剂供试液样品于室温下放置8 h，每隔2 h进一次样，经计算8 h内的RSD值为1.6%，表明含量测定所配样品溶液在室温下8 h内稳定。

3 讨论

a. 本文作者采用HPLC法对帕洛诺司琼贴剂中的药物含量进行测定，流动相中未加入盐也得到了很好的分离，配制方法简单，同时又降低了对仪器的损耗。内标的选择使结果更加精密可靠，如果在药物标准品可得的情况下，也可以采用外标法。

b. 文献报道过的贴剂含量测定方法[6-7]中多采用甲醇对贴剂中的药物进行萃取，因甲醇极性大且萃取回收率高，另药物的甲醇溶液对色谱柱的伤害也低。因此作者同样采用甲醇对帕洛诺司琼贴剂中的药物进行萃取。

c. 专属性、精密度和回收率的考察结果表明了该方法的可靠性，可为后续的研究提供实验基础。

d. 在对贴剂的回收率进行考察时，特别需要注意的是药物与压敏胶作用强弱的问题。因为贴剂中的药物是均匀分散于压敏胶中的，而回收率的考察是将药物与空白的贴剂混合，若药物与压敏胶的作用太强可能出现回收率虽然合格，但实际上进行含量测定时仅有部分药物被提取出来的现象。从实验的结果得知，3批贴剂样品的实测含量均在1×10-3g·cm-2左右，与贴剂含量的预测值无显著性差异，说明本研究的回收率考察结果可靠。

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[3] GRALLA R, LICHINITSER M, VAN DER VEGT S, et al. Palonosetron improves prevention of chemotherapy-inducednausea and vomiting following moderately emetogenic chemotherapy: Results of a double-blind randomized phase Ⅲtrial comparing single doses of palonosetron with ondansetron[J]. Ann Oncol, 2003, 14(10): 1570-1577.

[4] EISENBERG P, MACKINTOSH F R, RITCH P, et al. Efficacy, safety and pharmacokinetics of palonosetron in patients receiving highly emetogenic cisplatin-based chemotherapy: A dose-ranging clinical study[J]. Ann Oncol, 2004, 15(2): 330-337.

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Determination method of palonosetron in patch

HUI Mei, QUAN Peng, FANG Liang*
(School of Pharmacy, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China)

ObjectiveTo establish a method for the determination of palonosetron in the patch.MethodsPalonosetron in the patch was extracted by methanol. High performance liquid chromatography was used to analyze palonosetron content. At the same time, the specificity, precision and recoveries of the method were also investigated.ResultsPalonosetron content in the patch wasSpecificity of the method was good. Good linear relationship was achieved between the ratio of the peak area (Ad rug/ Ai nternal standard) of palonosetron and internal standard of propylparaben and concentration (C) of palonosetron ranging from 0.16–40.95 mg·L-1. The calibration curve was. The RSDs of intra- and inter- day precisions were both less than 2%, meeting the requirements of analysis. The recoveries of three different concentrations were in the range of 98%–102%.ConclusionsThe method established for palonosetron content determination in the patch is simple and reliable, and can provide experimental basis for further investigation.

pharmaceutics; patch; high performance liquid chromatography; palonosetron; content determination

R94

：A

（2016）04–0120–05

10.14146/j.cnki.cjp.2016.04.002

(本篇责任编辑：赵桂芝)

2015–05–06

惠美(1989–), 女(汉族), 吉林四平人, 硕士研究生,E-mail645755232@qq.com；*通讯作者：方亮(1964–), 男(朝鲜族), 吉林和龙人, 教授, 博士, 博士生导师, 主要从事药剂学研究,Tel. 024–23986330，E-mailfangliang2003@yahoo.cn。