美洲大蠊提取物CⅡ-3对家兔血常规及抗氧化活性的影响
2017-01-04邵维莉吴道勋刘光明陈俊雅
邵维莉 吴道勋 彭 芳,2 刘光明,2 陈俊雅,2 王 涛
1.大理大学药学与化学学院,云南 大理 67100;2.云南省昆虫生物医药研发重点实验室,云南 大理 671000;3.大理大学基础医学院,云南 大理 671000
美洲大蠊提取物CⅡ-3对家兔血常规及抗氧化活性的影响
邵维莉1吴道勋1彭 芳1,2刘光明1,2陈俊雅1,2王 涛3*
1.大理大学药学与化学学院,云南 大理 67100;2.云南省昆虫生物医药研发重点实验室,云南 大理 671000;3.大理大学基础医学院,云南 大理 671000
目的:研究美洲大蠊提取物CⅡ-3对正常家兔血常规和血清抗氧化能力的影响。方法:给予正常家兔高(16mg/kg)、中(8mg/kg)、低(4mg/kg)耳缘静脉注射CⅡ-3,对各剂量组血常规和血清中抗氧化因子活性进行测定。结果:单次给药后,高剂量CⅡ-3能够明显降低正常家兔血液中白细胞、红细胞的数量(P<0.05);多次给药后,与NS组比较,CⅡ-3对CAT、MPO的含量及T-AOC活性均有一定的提高作用(P<0.05)。结论:美洲大蠊提取物CⅡ-3具有一定的抗炎和抗氧化活性。
美洲大蠊;血常规;抗炎;抗氧化
美洲大蠊(PeriplanetaamericanaL.)为蜚蠊目蜚蠊科昆虫,俗称蟑螂。据《本草纲目》记载,蟑螂以干燥或新鲜全体入药,有活血化瘀、解毒消疳、利水消肿等功效[1]。自20世纪70年代以来,国内外学者从其体内分离纯化出多种活性物质,如与组织再生有关的p10蛋白[2]、促进血细胞吸收感染细菌的防御型分子脂多糖结合蛋白[3]以及具有利尿作用的多肽[4]等。并开发了美洲大蠊系列昆虫药品,如康复新液、心脉隆注射液和肝龙胶囊等[5]。实验通过测定美洲大蠊醇提取物CⅡ-3对家兔外周血细胞因子和血清液中抗氧化因子的含量,进一步阐明美洲大蠊的抗炎及抗氧化作用,为其进一步研究提供参考。
1 仪器与材料
1.1 美洲大蠊提取物的制备 受试药物CⅡ-3(批号:20140823,由大理大学药学院刘光明教授提供)为棕褐色冻干粉末,其制备过程如下:用溶剂提取粉碎后的美洲大蠊虫体干品,浓缩回收溶剂,得到的浓缩液经大孔吸附树脂材料柱层析,水洗,然后用醇溶剂洗脱,所得洗脱液经减压浓缩至无醇味,干燥后得到产品CⅡ-3[6]。实验前受试药物用生理盐水分别配制成不同浓度的药液,然后用0.22 μm的微孔滤膜进行过滤灭菌。
1.2 动物与试剂 家兔42只,体重1.5~2.0kg,由大理大学实验动物中心提供,许可证号SYXK(滇)2011-0004,普通级别。过氧化氢酶(CAT,批号:20150707)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px,批号:20150421)、髓过氧化物酶(MPO,批号:20150415)、总抗氧化能力(T-AOC,批号:20150706)等试剂盒均购自南京建成生物工程研究所;XFA6000动物血细胞分析仪用稀释液(批号:PD1501)、HB探针清洗液(批号:PB9407);ANI-3D溶血剂(批号:PF2402);HB含酶清洗液(批号:PB7501)等购自南京普朗医疗设备有限公司。
1.3 仪器 TL-16R高速冷冻离心机(上海市离心机机械研究所);EMP-168G半自动生化分析仪(深圳市恩普电子技术有限公司);XFA6000全自动动物血细胞分析仪(南京普朗医疗设备有限公司)。
2 方法
2.1 单次给药对家兔血细胞含量的影响 体重1.5~2.0kg健康雄性家兔18只,随机分为3组,每组6只,即CⅡ-3高(16mg/kg)、中(8mg/kg)、低(4mg/kg)剂量组。各组家兔按给药量2mL/kg通过耳缘静脉给药1次,分别于给药前,给药后5、15、30、60、120、240min耳缘静脉采血20μL,全自动血细胞分析仪上检测不同时间点家兔血液中白细胞、红细胞、血小板等含量的变化。
2.2 连续给药对家兔血清中抗氧化因子含量的影响 体重1.5~2.0kg健康雄性家兔24只,按体重随机分为4组,每组6只,分别为3个给药组(与2.1中相同)和1个生理盐水对照组(NS组)。给药组家兔每日耳缘静脉给药,给药量均为2mL/kg,NS组给予生理盐水,连续给药5d。末次给药后24 h,心脏采血5 mL,并分离血清,参照试剂盒说明书分别测定血清中过氧化氢酶(Catalase;CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(Myeloperoxidase;GSH-PX)、髓过氧化物酶(Myeloperodidase;MPO)的含量以及血清总抗氧化能力(Total Antioxidant Capacity ;T-AOC)的活性。
3 结果
3.1 单次给药美洲大蠊提取物CⅡ-3对家兔血细胞含量的影响
3.1.1 单次给药后CⅡ-3对家兔白细胞含量的影响 与给药前比较,给药后30、60min时,高剂量组家兔血液中白细胞含量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结果见表1。
3.1.2 单次给药CⅡ-3对家兔红细胞含量的影响 与给药前比较,给药后240min时高剂量CⅡ-3组红细胞数量的减少较明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结果见表 2。
3.1.3 单次给药CⅡ-3对家兔血小板含量的影响 与给药前比较,CⅡ-3各剂量组对家兔血小板的影响不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。结果见表 3。
注:与给药前比较,*P<0.05。
注:与给药前比较,*P<0.05。
组别给药前/×109/L给药后/×109/L5min15min30min60min120min240min低剂量组327.8±146.4344.8±127.4354.8±109.9214.5±59.6284.7±95.9269.2±94.9287.2±94.9中剂量组312.3±89.5335.8±68.3242.2±160.9262.3±148.0345.3±87.9290.2±68.6305.5±68.1高剂量组356.2±97.1318.8±93.4331.3±90.2 265.8±96.1278.8±80.7362.3±105.0244.7±144.0
3.2 多次给药CⅡ-3对正常家兔血清中抗氧化因子含量的影响 与NS组比较,CⅡ-3能够明显增强正常家兔血清中MPO的活性,差异有统计学意义(P<0.05)。低剂量、中剂量CⅡ-3能使血清中CAT的含量显著增加,差异有统计学意义(P<0.05),中剂量CⅡ-3还可以显著提高血清中T-AOC的活性,差异有统计学意义(P<0.05);另外,高剂量CⅡ-3也能提高血清中GSH-PX的含量,但差异不具有统计学意义(P>0.05)。结果见表4。
注:与NS组比较,*P<0.05。
4 讨论
血常规检查是血液细胞部分的检查,也是临床一项基本的常规检查[7-8]。根据其数量和分布的变化,可以作为疾病诊断的辅助手段。红细胞各项参数出现异常时,可对一些疾病的诊断提供依据。白细胞可以保护机体避免各种病毒性和细菌性感染,以及其他异物的入侵[9]。有证据表明[10],血小板对急性炎症和损伤,包括类风湿性关节炎、脑型疟和急性肺损伤等起主要作用。试验中,高剂量CⅡ-3能够降低正常家兔血液中白细胞、红细胞的数量,提示其具有一定的抗炎作用。
过氧化氢酶(CAT)能够刺激H2O2生成水并且可以清除机体氢过氧化物,且过氧化氢酶利用H2O2可以氧化一些毒素,包括酚类、甲酸、甲醛和酒精等[11]。过氧化氢作为机体代谢过程中产生的废物,能够对机体造成损害。为了避免这种损害,过氧化氢必须被快速地转化为其他无害或毒性较小的物质,而过氧化氢酶就是常常被细胞用来催化过氧化氢分解的工具。实验结果显示,与NS组相比,低、中剂量CⅡ-3能够明显增强家兔血清中过氧化物酶的活力(P<0.05)。谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)是机体内广泛存在的抗氧化酶,它在信号平衡、免疫调节[12],以及清除氢过氧化物,避免氧化损伤中发挥重要作用[13-14]。实验中,中、高剂量CⅡ-3可以增加家兔血清中谷胱甘肽过氧化物酶的含量。髓过氧化物酶(MPO)存在于吞噬细胞中,是抗微生物系统和炎症调节的基本成分[15],其活性的变化可对早期组织损伤做出较敏感的反应[16]。作为中性粒细胞和单核细胞的标志酶[17],其水平与细胞数量成正比,与血常规中的中性粒细胞和单核细胞数的增加一致;且根据实验发现,各剂量CⅡ-3均能明显提高家兔血清中MPO的活性(P<0.05)。而从整体抗氧化水平而言,总抗氧化能力(T-AOC)对防御体的抗氧化作用主要通过消除自由基和活性氧,分解过氧化物,去除催化作用的金属离子等来实现。结果发现,中剂量CⅡ-3能够明显增加家兔血清中T-AOC水平(P<0.05)。根据所测定家兔血清中抗氧化因子的活性和水平,可以认为CⅡ-3具有一定的体内抗氧化作用。
实验通过对正常家兔外周血细胞含量及抗氧化因子进行测定,结果显示,给予美洲大蠊提取物CⅡ-3后,正常家兔血液中白细胞、红细胞数量减少,对抗氧化因子MPO、CAT、GSH-PX、T-AOC具有一定的提高作用,从而表明美洲大蠊提取物CⅡ-3具有一定的抗炎、抗氧化作用,这一结果将为美洲大蠊的下一步研究提供理论依据。
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(编辑:梁志庆)
The Effect of CⅡ-3 Extracted fromPeriplanetaamericanaL. on Blood Cell Parameters and Antioxidant Capacity of Rabbits
SHAO Weili1WU Daoxun1PENG Fang1,2LIU Guangming1,2CHEN Junya1,2WANG Tao3*
1.College of Pharmacy and Chemistry, Dali University, Dali 671000,China;2.Yunnan Provincial Key Laboratory of Entomological Biopharmaceutical R&D, Dali 671000,China;3.College of Basic Medical Sciences, Dali University, Dali 671000, China
Objective To study the effects of CⅡ-3 extracted fromPeriplanetaamericanL. on the blood cell parameters and serum antioxidant capacity of normal rabbits. Methods The level of blood cell parameters and serum antioxidant factors of all dose groups were determined after the ear margin vein of normal rdbbits was injected with high(16mg/kg),Medium(8mg/kg) and low-dose(4mg/kg) of CⅡ-3.Results After the treatment, high dose CⅡ-3 could significantly reduce the number of white blood cells and red blood cells in normal rabbits (P<0.05); compared with the NS group, the activity of CAT, MPO, T-AOC in CⅡ-3 groups were higher (P<0.05). Conclusion CⅡ-3 extracted fromPeriplanetaamericanaL. has a certain anti-inflammation and anti-oxidation effects.
PeriplanetaamericanaL.; Blood Cell Parameters; Anti-Infammation; Anti-Oxidation
2010-9-22
国家自然科学基金(81560600);云南省昆虫生物医药研发重点实验室开放课题(201406-04)。
邵维莉(1992-),女,汉族,硕士,研究方向为中药药理学。E-mail:770892271@qq.com
王涛(1975-),女,白族,本科,实验师,研究方向为微生物与免疫学。E-mail:1977757178@qq.com
R
A
1007-8517(2016)23-0036-03