防风配方颗粒的提取工艺优化以及含量测定

赵粉荣 刘 斌 田志杰

内蒙古大唐药业股份有限公司，内蒙古 呼和浩特 010010



防风配方颗粒的提取工艺优化以及含量测定

赵粉荣 刘 斌 田志杰

内蒙古大唐药业股份有限公司，内蒙古 呼和浩特 010010

目的：优选防风配方颗粒的提取工艺，建立升麻素苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量测定方法，为有效控制该制剂的质量提供参考。方法：以升麻素苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷提取量和出膏率为评价指标，采用正交试验考察加水量、提取时间和提取次数对防风配方颗粒提取工艺的影响。采用HPLC 测定升麻素苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷含量。结果：最佳提取工艺为浸泡0.5h，加10、8、6倍量水提取3次，每次0.5h；升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷分别在6.24～62.4μg、5.68～56.8μg与峰面积呈良好线性关系，平均加样回收率依次为99.63%、99.75%，RSD分别为0.13%、1.04%。结论：该提取工艺和含量测定方法稳定可行，有效成分提取效率高，为防风配方颗粒的生产和质量控制提供参考。

防风配方颗粒；升麻素苷；5-O-甲基维斯阿米醇苷；浸膏得率； 质量标准

防风是常用中药，为伞形科植物防风Saposhnikoviadivaricata(Turcz.)Schischk.的干燥根。具有祛风解表，胜湿止痛，止痉之功效。用于感冒头痛，风湿麻痹，风疹瘙痒，破伤风。春、秋二季采挖未抽花茎植株的根，除去须根和泥沙，晒干[1]。主要成分有升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷等。《中国药典》(2015年版)规定升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷为防风药材质量控制的指标成分。防风配方颗粒是将防风饮片经现代制药工艺提取、浓缩、干燥、制粒而成的颗粒剂。目前有关防风配方颗粒的工艺及质量标准研究尚未有报道，但配方颗粒研究前景广阔。故本实验通过正交试验，利用HPLC测定升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量，并结合干浸膏得率作为质量指标，优选防风药材水提取的最佳工艺，为中药防风配方颗粒的质量标准研究提供参考。

1 仪器与材料

1.1 仪器 高效液相色谱仪(岛津)；BP211D 型电子天平(德国 Sautoris 公司)；KQ-500DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 材料 升麻素苷对照品(批号：111522-201511 中国食品药品检定研究院)；5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品(批号：111523-201509 中国食品药品检定研究院)；防风药材(安国义通中药材有限公司)，甲醇(色谱纯)，水(超纯水)。

2 方法与结果

2.1 配方颗粒的制备 称取防风药材，按优选的工艺条件提取，合并煎液，浓缩后干燥，得干浸膏粉，粉碎过3号筛，加入适量辅料，混匀，经过制粒、整粒，得防风配方颗粒。

2.2 高效液相色谱含量测定

2.2.1 色谱条件 十八硅烷键合硅胶为填充剂C18色谱柱( 4.6mm×250mm，5μm)，流动相：甲醇-水(40∶60)，流速1.0mL·min-1，检测波长254nm，理论板数按升麻素苷峰计算应不低于2000。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取升麻素苷对照品3.12mg，5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品2.84mg，加甲醇溶解并定容至50mL，分别制成62.4μg·mL-1和56.8μg·mL-1对照品溶液，备用。

2.2.3 供试品溶液的制备 取本品颗粒适量，研细，取约0.5g，精密称定，置50mL锥形瓶中，精密加入80%甲醇20mL，称定重量，超声处理15min，取出，放冷，用80%甲醇补足减失重量，滤过，取续滤液，得供试品溶液。见图1。

2.2.4 检测波长的选择 取升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液在200～400nm进行全波长扫描，结果显示在254nm处有最大吸收且灵敏度最高， 故确定其检测波长254nm。

2.3 线性关系考察 精密吸取升麻素苷(62.4μg·mL-1)和5-O-甲基维斯阿米醇苷(56.8μg·mL-1)对照品溶液1.00mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL、8.00mL、10.0mL，分别置10mL量瓶中，并加甲醇稀释至刻度，摇匀，按2.2.1项下色谱条件测定，以峰面积为纵坐标，样品含量为横坐标，得回归方程依次为Y=119530X+7436.2，R2=0.9997(n=6)，Y=121669X+ 4218.4,R2=0.9997(n=6)，结果表明升麻素苷在6.24～62.4 μg范围、5-O-甲基维斯阿米醇苷在5.68～56.8μg范围呈良好的线性关系。

2.4 精密度试验 精密吸取升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液10μL，连续进样 6 次，按2.2.1项下色谱条件测定，计算峰面积的RSD为分别0.39%与0.45%，表明仪器精密度良好。

2.5 重复性试验 精密称取同一批样品，按2.2.3项下方法制备供试品溶液，共6份，按2.2.1项下色谱条件测定，计算峰面积的RSD分别为0.44%与0.42%，表明该方法重复性良好。

2.6 稳定性试验 精密取同一供试品溶液10μL，按0h、1h、2h、4h、8h、10h时间间隔，分别进样分析，测定色谱峰面积。结果表明供试品溶液在10h内稳定性良好，其RSD分别为1.13%与1.11%。

2.7 加样回收率试验 精密称取已知含量的防风配方颗粒样品约0.25g，共6份，分别精密加入升麻素苷对照溶液10mL(浓度为62.4μg·mL-1)，或5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液6mL(浓度为56.8μg·mL-1)，按上述色谱条件测定，计算回收率，结果见表1、2。平均加样回收率99.63%与99.75%，RSD为0.13%与1.04%，表明样品回收率良好。

表1 升麻素苷加样回收试验结果

表2 5-O-甲基维斯阿米醇苷加样回收试验结果

3 提取工艺的正交试验

3.1 正交设计 在预试验基础上，固定浸泡时间0.5 h，选择加水量(A)、提取时间(B)、提取次数(C)作为考察因素。以升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的总含量和出膏率为评价指标。采用L9(34) 正交表设计，因素水平详见表3。

表3 防风配方颗粒提取的因素与水平

3.2 实验方法 取内蒙防风药材9份，每份40 g，按表4设计的工艺条件进行提取，合并水煎煮提取液，滤过，水煎液均定容到1000mL容量瓶中，备用。从定容到1000mL的水煎液中吸取5mL至25mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度。用微孔滤膜滤过，取滤液，进样，测定升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷总含量。

3.3 正交试验结果及方差分析 按上述实验方法进行正交试验得到9份供试品溶液，按照含量测定方法进行含量测定，并计算总含量。正交试验结果见表4，方差分析结果见表5。

由直观分析可知， 各因素影响提取效果的顺序为C>B>A。方差分析表明因素C对提取工艺具有显著性影响，其他因素则影响不明显，考虑大生产节约成本等因素，最佳提取工艺条件为A1B1C3，即加10、8、6倍量水提取3次，每次0.5h。

表4 防风提取工艺正交设计与试验结果表

表5 综合评分方差分析

3.4 优选工艺的验证试验 按最佳提取工艺进行了3次验证试验，取防风药材500g，结果升麻素苷质量分数分别为0.506%、0.509%、0.528%，5-O-甲基维斯阿米醇苷质量分数分别为0.357%、0.350%、0.381%，出膏率依次为41.9%、44.5%、43.8%， 说明该工艺稳定可行。因此，确定防风配方颗粒提取工艺为：加10、8、6倍量水提取3次，每次0.5h。

4 配方颗粒样品含量测定

按照最优提取工艺，制备出防风配方颗粒。精密称取防风配方颗粒约0.5 g，按2.2.3项下方法制备供试品溶液，按2.2.1项下色谱条件测定，计算升麻素苷质量分数分别为2.37、2.29、2.32 mg·g-1，5-O-甲基维斯阿米醇苷质量分数分别为1.31 、1.28、1.39mg·g-1，故暂定本品配方颗粒每1g含升麻素苷( C22H28O11)和5-O-甲基维斯阿米醇苷(C22H28O10)总量不得少于3.0 mg。

5 讨论

对于原料药材饮片的选择，是中药配方颗粒研制、生产、开发和应用等最根本的前提的前提条件，只有在确保了原料药材的质量的基础上，才能保证和提高稳定中药配方颗粒的质量[2]。由于条件有限，本研究只收集了两个不同产地的品种进行含量测定等一系列的对比考察研宄，通过研究发现两个不同产地的品种含有效成分总含量差别不大。

防风配方颗粒的水提工艺直接关系到配方颗粒的质量，以出膏率和升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷含量作为衡量指标，初步评价了工艺的提取效果，结果表明煎煮时间和加水量对工艺的影响较小，而煎煮次数对其二者的含量和出膏率有显著的影响，是该饮片提取工艺的重要因素。目前由于防风配方颗粒样品数量较少，有待于后续试验数据的积累，制定了升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的限量范围，使该制剂的质量更加稳定可靠，为有效控制防风配方颗粒的质量提供保证。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S]. 北京:中国医药科技出版社, 2010: 239.

[2]涂瑶生，毕晓黎，罗文汇. 中药配方颗粒的质量控制研究[J].世界科学技术中医药现代化思路与方法，2011,13(1)：41.

(编辑：程鹏飞)

2016-09-26

赵粉荣，女，硕士，工程师，从事中药质量控制研究。E-mail：454962527@qq.com

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1007-8517(2016)23-0024-03