血小板微颗粒水平与颈动脉粥样硬化的关系研究

童巧文，童 郁，张荷慧，郑丽芬，杨晓凯，王耀光



·论著·

血小板微颗粒水平与颈动脉粥样硬化的关系研究

童巧文，童 郁，张荷慧，郑丽芬，杨晓凯，王耀光

目的 探讨血小板微颗粒(PMP)水平与颈动脉粥样硬化的关系，评价PMP在颈动脉粥样硬化形成中的作用。方法 选取2014年9月—2016年2月在温州市人民医院神经内科就诊的门诊和住院患者187例，根据颈动脉超声检查结果分为颈动脉内膜中层厚度(IMT)正常组(n=52)、IMT增厚组(n=70)和颈动脉硬化斑块组(n=65)。采用流式细胞仪测定血清PMP水平，同时测定空腹血糖(FPG)、血清总胆固醇(TC)、血浆纤维蛋白原(FG)、血小板计数(PLT)等指标；颈动脉粥样硬化的影响因素分析采用多元Logistic逐步回归分析。结果 3组性别、吸烟比例、PLT间差异无统计学意义(P>0.05)，而年龄、收缩压(SBP)、FPG、TC、FG、PMP间差异有统计学意义(P<0.05)。多元Logistic逐步回归分析结果显示，年龄〔OR=1.387，95%CI(1.195，1.610)〕、FPG〔OR=5.597，95%CI(1.695，18.469)〕、TC〔OR=10.241，95%CI(2.727，38.455)〕、PMP〔OR=14.918，95%CI(3.145，70.765)〕是颈动脉粥样硬化的独立危险因素(P<0.05)。结论 PMP是颈动脉粥样硬化的独立危险因素，在颈动脉粥样硬化的病理过程中具有重要的作用。

颈动脉；动脉粥样硬化；血小板微颗粒

童巧文，童郁，张荷慧，等.血小板微颗粒水平与颈动脉粥样硬化的关系研究[J].中国全科医学，2016，19(31)：3822-3825.[www.chinagp.net]

TONG Q W,TONG Y,ZHANG H H,et al.Relationship between platelet microparticle level and carotid atherosclerosis[J].Chinese General Practice，2016，19(31)：3822-3825.

颈动脉粥样硬化(carotid atherosclerosis)是导致缺血性脑卒中的重要病因和危险因素。因此近年来，颈动脉超声检查在缺血性脑卒中患者的预防和检测中的价值越来越受到重视。血小板微颗粒(platelet microparticle，PMP)作为活化血小板的产物，继承了血小板表面的多种抗体，参与了动脉粥样硬化的过程[1-2]。很多研究表明：PMP、内皮微颗粒等与心脑血管动脉硬化性疾病密切相关[3-4]。本研究通过PMP水平检测与颈动脉超声检查，探讨PMP对颈动脉粥样硬化的临床意义。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取2014年9月—2016年2月在温州市人民医院神经内科就诊的门诊和住院患者187 例。纳入标准：(1)年龄18～80岁；(2)来院前2周内均未使用过阿司匹林、氯吡格雷、双嘧达莫、华法林等影响血小板的药物。排除标准：(1)急性心肌梗死、急性脑卒中、感染、心房颤动和肝肾功能不全者；(2)伴有原发性或继发性导致血小板数量或功能异常疾病者。其中男112例，女75例；年龄45～77岁，平均年龄(61.0±6.2)岁。根据颈动脉超声检查结果将所有患者分为颈动脉内膜中层厚度(intimal-medial thickness，IMT)正常组(n=52)、IMT增厚组(n=70)和颈动脉硬化斑块组(n=65)。本研究经本院伦理委员会批准，所有患者或其家属签署知情同意书。

1.2 研究方法

1.2.1 颈动脉超声检查 采用美国GE公司LOGIQ E9型彩色多普勒超声诊断仪(探头9L-D，频率8.4～9.0 MHz)，由专业超声医师负责检查。延颈动脉走向，声束方向垂直于血管的长轴，仔细测定颈总动脉起始部、颈总动脉分叉处以及颈内、外动脉起始部的血管后壁，并在颈总动脉分叉近心端1～2 cm处测量IMT，每侧均重复测量3次，以IMT平均值作为颈动脉粥样硬化的评价指标。颈动脉超声检查结果采用2009年中国血管超声检查指南定义：IMT<1.0 mm为正常，1.0 mm≤IMT<1.5 mm为增厚，IMT≥1.5 mm为动脉粥样硬化斑块形成[5]。

1.2.2 PMP测定 所有患者于清晨空腹抽取静脉血，方法参照文献[6]，取枸橼酸钠抗凝新鲜外周血标本2 ml(轻扎止血带，顺利采血)，将血标本按离心力80g室温下离心10 min，制备富血小板血浆(PRP)。将5 μl CD61-percp和5 μl PRP分别加入流式管，混匀后室温避光孵育15 min，以1 ml磷酸盐缓冲液(PBS)悬浮细胞，同时加入0.82 μm标准微球1 μl(1∶400稀释)待测。通过后以MXP cytometer软件获取样本并分析结果。流式细胞仪为Cytomics FC500MPL(美国BECKMAN公司)，CD61-percp(Cat NO.340560)为美国BD公司试剂，标准微球(0.82 μm)为美国Sigma公司产品(本研究采用0.82 μm标准微球进行PMP定位对照)。

1.2.3 其他资料收集 记录患者的性别、年龄，询问吸烟情况，测量收缩压(SBP)，检测空腹血糖(FPG)、血清总胆固醇(TC)、血浆纤维蛋白原(FG)及血小板计数(PLT)。

2 结果

2.1 PMP水平检测结果 流式细胞仪技术检测循环血PMP水平结果见图1。

2.2 3组一般资料及实验室检查结果比较 3组性别、吸烟比例、PLT间差异无统计学意义(P>0.05)，而年龄、SBP、FPG、TC、FG、PMP间差异有统计学意义(P<0.05，见表1)。

表1 3组一般资料及实验室检查结果比较Table 1 Comparison of general data and laboratory test results among three groups

2.3 颈动脉粥样硬化影响因素的多元Logistic逐步回归分析 以是否颈动脉粥样硬化(赋值：IMT正常组=0，IMT增厚组和颈动脉硬化斑块组=1)为因变量，性别(赋值：女=1，男=2)、年龄实际值、SBP实际值、吸烟(赋值：不吸烟=1，吸烟=2)及FPG、TC、FG、PLT 、PMP实际值为自变量，进行多元Logistic逐步回归分析。结果显示，年龄、FPG、TC、PMP是颈动脉粥样硬化的独立危险因素(P<0.05，见表2)。

注：A为血小板散点图，B为经0.82 μm标准微球比对的PMP水平；PMP=血小板微颗粒

图1 流式细胞仪技术检测循环血PMP水平

Figure 1 Level of circulating blood PMP measured by flow cytometry

表2 颈动脉粥样硬化影响因素的多元Logistic逐步回归分析Table 2 Multiple Logistic stepwise regression analysis of influencing factors for carotid atherosclerosis

3 讨论

当今社会，随着人们生活水平的提高和人口老龄化，脑卒中已经成为导致人类死亡的第三大主要原因。而在颈动脉粥样硬化基础上，不稳定斑块的突然脱落、血小板活化激活、动脉血栓形成是缺血性脑卒中重要的病理过程[7]。PMP是1967年由WOLF[8]首次发现描述,在一些刺激作用下活化或者凋亡的血小板细胞膜向外伸展以吐芽的方式进入循环而形成的小微粒,直径为0.1～1.0 μm，故也称为“血小板尘埃”。血小板活化聚集、血栓形成以及血管内皮损伤参与动脉硬化的发生发展过程，这些病理变化均可以导致PMP的生成；而随后发生的缺血低氧反应和炎性刺激，则进一步促进PMP的产生。PMP能够参与多种生理功能，主要包括血栓形成，促进内皮修复、血管生成、细胞间信号转导和炎性反应[9-11]，并影响许多疾病，包括恶性肿瘤的形成、血液系统疾病、动脉粥样硬化性疾病如冠心病，缺血性卒中等。目前认为PMP可能通过以下途径促进动脉粥样硬化的形成：(1)损伤内皮细胞促进PMP黏附到血管壁，PMP释放的花生四烯酸激活细胞间黏附分子-1(ICAM-1)，介导白细胞募集迁移到血管壁，促进动脉粥样硬化形成；(2)PMP表面含有带负电荷的磷脂酰丝氨酸(PS)，PS可促进凝血酶原复合物形成，支持膜相关酶联反应，从而激活凝血因子，参与内源性和外源性凝血途径；(3)PMP可以减少一氧化氮合成和一氧化氮合酶的活性，此过程可以增强血管的炎性反应和损害血管内皮功能，导致动脉粥样硬化的发展；(4)PMP与低密度脂蛋白、磷脂、脂肪酸相关，而氧化后低密度脂蛋白可以对内皮产生严重损伤，从而加速动脉硬化的进展[12]。

本研究结果显示，颈动脉硬化斑块组PMP均高于IMT正常组和IMT增厚组，且IMT增厚组PMP高于IMT正常组，显示PMP和颈动脉粥样硬化程度有关，这与国外文献报道一致[13-14]。颈动脉硬化斑块组的PMP高于其他两组，提示斑块组有更高的血小板活化状态，这可能与损伤的内皮细胞促进PMP吸附到血管壁，PMP表面含有带负电荷的PS，促进凝血酶原复合物的聚集，进一步激活血小板有关[15]。本研究多元Logistic逐步回归分析结果显示，PMP与其他已知动脉硬化因素如年龄、血糖、血脂等，均为颈动脉粥样硬化的独立危险因素，提示PMP水平升高与颈动脉粥样硬化形成密切相关。临床上进行PMP水平检测，为监测颈动脉粥样硬化程度和血小板活化状态提供了一种有效的手段，有利于早期对缺血性脑卒中高危群体进行预防干预。

综上所述，PMP在颈动脉粥样硬化形成的病理过程中具有重要的作用，在一定程度可以反映动脉粥样硬化的发生和发展，对临床有一定的实用性，可将其作为预防性治疗动脉硬化和心脑血管疾病的生物标志；并且在治疗动脉粥样硬化方面，需重视血小板活化的作用，将PMP作为一项治疗心脑血管疾病的作用靶点。

作者贡献：童巧文、王耀光进行试验设计与实施、撰写论文、成文并对文章负责；童郁、张荷慧、郑丽芬进行试验实施、评估、资料收集；杨晓凯、王耀光进行质量控制与审校。

本文无利益冲突。

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(本文编辑：崔沙沙)

Relationship between Platelet Microparticle Level and Carotid Atherosclerosis

TONGQiao-wen,TONGYu,ZHANGHe-hui,ZHENGLi-fen,YANGXiao-kai,WANGYao-guang.

DepartmentofNeurology,WenzhouPeople′sHospital,Wenzhou325000,China

WANGYao-guang,DepartmentofNeurology,WenzhouPeople′sHospital,Wenzhou325000,China;E-mail:wz4204@163.com

Objective To discuss the relationship between platelet microparticle(PMP) level and carotid atherosclerosis,and assess the role of PMP in the development of carotid atherosclerosis.Methods 187 outpatients and inpatient who received treatment in Department of Neurology of Wenzhou People′s Hospital from September 2014 to February 2016 were selected,according to results of carotid ultrasonography,they were divided into normal group of carotid intima-media thickness(IMT)(n=52),IMT thickening group(n=70) and carotid atherosclerotic plaque group(n=65).Serum PMP level was measured by flow cytometry,and in the meanwhile fasting blood-glucose(FPG),serum total cholesterol(TC),plasma fibrinogen(FG),platelet count(PLT) and other indicators were also measured;multiple Logistic stepwise regression analysis was used to analyze the influencing factors of carotid atherosclerosis.Results There was no significant difference in sex,smoking rate and PLT among the three groups(P>0.05),but there was significant difference in age,SBP,FPG,TC,FG and PMP(P<0.05).Multiple Logistic stepwise regression analysis showed that age 〔OR=1.387,95%CI(1.195,1.610)〕,FPG 〔OR=5.597,95%CI(1.695,18.469)〕,TC 〔OR=10.241,95%CI(2.727,38.455)〕,PMP 〔OR=14.918,95%CI(3.145,70.765)〕 were the independent risk factors of carotid atherosclerosis(P<0.05).Conclusion PMP is the independent risk factor of carotid atherosclerosis,and it plays an important role in the pathological process of carotid atherosclerosis.

Carotid arteries;Atherosclerosis;Platelet microparticle

温州市科技计划项目(Y20140274)

325000浙江省温州市人民医院神经内科(童巧文，张荷慧，郑丽芬，杨晓凯，王耀光)，检验科(童郁)

王耀光，325000浙江省温州市人民医院神经内科；E-mail：wz4204@163.com

R 543.5

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2016.31.013

2016-04-28；

2016-09-19)