高效液相色谱法测定老蔻丸中大黄酚含量

苑思坤，王庚南，崔明旭

（1．河北省保定市食品药品检验所，河北 保定 071000； 2．河北农业大学，河北 保定 071000； 3．沈阳药科大学，辽宁 沈阳 110000）

高效液相色谱法测定老蔻丸中大黄酚含量

苑思坤1，王庚南2，崔明旭3

（1．河北省保定市食品药品检验所，河北 保定 071000； 2．河北农业大学，河北 保定 071000； 3．沈阳药科大学，辽宁 沈阳 110000）

目的 建立测定老蔻丸中大黄酚含量的高效液相色谱法。方法 色谱柱为 Waters Sunfire C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm），流动相为甲醇－0．1%磷酸（80∶20），流速为 1．0 mL／min，检测波长为 254 nm，柱温为25℃。结果 该方法专属性强，大黄酚进样量在0．015 70～0．784 85 μg范围内与峰面积线性关系良好，平均加样回收率为99．54%，RSD＝1．48（n＝6）。结论 该方法操作简便，结果准确，重复性良好，可用于老蔻丸的质量控制。

高效液相色谱法；老蔻丸；大黄酚

中成药老蔻丸由大黄、当归、豆蔻、砂仁、肉桂、丁香、山楂、六神曲等24种中药材组方，具有开郁舒气、温胃消食的功效，临床主要用于肝郁气滞、饮食不消、膨闷胀饱、胃脘疼痛等病症[1]。方中大黄具有健胃[2－3]、增进食欲、促进消化的功效，对慢性胃炎有较好的疗效[4]。祝金泉等[5]在关于大黄对胃黏膜细胞功能影响的研究中发现，大黄可促进胃黏膜主细胞分泌胃蛋白酶，并可轻度增加胃黏膜细胞的增殖作用。文献[6－11]报道，大黄对于老年胃溃疡、应激性胃溃疡及胃溃疡出血有良好的疗效。大黄酚是大黄的主要成分之一，老蔻丸现行质量标准[1]中无含量测定项。为加强对该药品的质量控制，本研究中采用高效液相色谱（HPLC）法，对制剂所含有效活性成分大黄酚进行含量测定。现报道如下。

1 仪器与试药

1．1 仪器

Waters e2695型高效液相色谱仪，2998型DAD检测器，Waters Sunfire C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm），均由美国Waters公司生产；BT125D型十万分之一电子天平（德国Sartorius公司）。

1．2 试药

大黄酚对照品（中国食品药品检定研究院，批号为110796－201118，含量为99．5%，供含量测定用）；老蔻丸（药都制药集团股份有限公司，批号分别为140601，141101，150401）；甲醇为色谱纯（美国Fisher公司）。

2 方法与结果

2．1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Waters Sunfire C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；流动相：甲醇－0．1%磷酸（80∶20）；流速：1．0 mL／min；柱温：25℃；检测波长：254 nm；进样量：10 μL。理论板数按大黄酚峰计算应不低于3 000。

2．2 溶液制备

对照品溶液：称取大黄酚对照品0．015 76 g，精密称定，置50 mL容量瓶中，加甲醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL，置100 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得每1 mL含大黄酚15．70 μg的对照品溶液。

供试品溶液：取供试品，剪碎，精密称取5 g，置25 mL容量瓶中，加甲醇10 mL，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）30 min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

阴性对照品溶液：取除大黄的其余药材，按制备工艺和处方比例制备阴性制剂，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

专属性试验：取处方中除大黄以外的23味中药材，按处方剂量及工艺要求制备缺大黄的阴性对照品，按2．2项下方法制成阴性对照品溶液。分别取供试品溶液、阴性对照品溶液和对照品溶液，按拟订色谱条件进样测定。结果，阴性对照品溶液色谱中，在与大黄酚峰相同保留时间处，无相同色谱峰出现，表明除大黄外的其他原辅料对大黄酚峰均无干扰，见图1。

线性关系考察：分别精密吸取2．2项下制备的对照品溶液 1，2，5，10，20，50 μL注入高效液相色谱仪，按拟订色谱条件进样测定，以峰面积（Y）为纵坐标、进样量（X）为横坐标进行线性回归，得回归方程Y＝5 503．5 X－57 875，r＝0．999 9（n＝6）。结果表明，大黄酚进样量在0．015 70～0．784 85 μg范围内与峰面积线性关系良好。

图1 高效液相色谱图

精密度试验：精密吸取2．2项下制备的对照品溶液，按拟订色谱条件重复进样6次，测定大黄酚峰面积积分值。结果的 RSD＝0．46%（n＝6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，在拟订色谱条件下分别于2，4，6，8，10，12 h时进样测定大黄酚峰的面积。结果的 RSD＝1．03%（n＝6），表明供试品溶液在12 h内稳定。

重复性试验：取同一批供试品（批号为140601）6份，按2．2项下方法制备供试品溶液，依法进样测定，以外标法计算峰面积。结果大黄酚的平均含量为0．097 12 mg／g，RSD＝1．26%（n＝6），表明该方法重复性良好。

加样回收试验：称取6份已知含量的供试品（批号为140601，大黄酚含量为为0．096 82 mg／g）各5 g，精密称定，置25 mL容量瓶中，分别精密量取贮备液0．5，1．0，2．0 mL各3份，加入6份样品中，按2．2项下方法制备供试品溶液，各进样10 μL，测定并计算回收率。结果见表1。

2．4 样品含量测定

按拟订方法制备3批（批号分别为140601，141101，150401）样品的供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，按外标法计算样品含量。结果3批样品中大黄酚的含量分别为0．096 82，0．106 44，0．113 80 mg／g。

表1 大黄酚加样回收试验结果（n＝6）

3 讨论

老蔻丸属中药复方制剂，具有健胃消食、开郁舒气、温胃养胃的作用，方中大黄为寥科植物掌叶大黄Rheum palmatum L．、唐古特大黄 Rheum tanguticum Maxim．ex Balf．或药用大黄 Rheum officinale Baill．的干燥根和根茎[12]，有泻热通畅、凉血解毒、逐瘀通经、攻积导滞、利胆退黄之功效[13]，《神农本草经》称大黄“主下瘀血、血闭、寒热、破 瘕积聚、留饮、宿食、荡涤肠胃、通利水谷、调中化食、安和五藏”。而大黄酚为大黄中主要活性成分，故本试验中以大黄酚为指标，采用高效、便捷、准确的HPLC法测定其含量。

检测波长选择：本试验中采用二极管阵列检测器，于200～400 nm波长范围进行紫外光谱扫描，结果显示大黄酚在254 nm波长处有最大吸收，故选择254 nm作为检测波长。

流动相选择：参考文献[14－17]，经反复试验与筛选，本试验中最终采用了甲醇－0．1%磷酸（80∶20）作为流动相。结果大黄酚峰形良好，塔板数高，与周围杂质分离较完全，且方法的专属性、精密度、重复性与稳定性均较好。

提取方式选择：参考文献[16－17]，制剂中大黄酚的提取可采用甲醇、盐酸2次回流，再用三氯甲烷多次振摇提取的方法。经试验，的确可去除大量杂质，但操作过于烦琐，步骤过多，在操作过程中易产生误差。本研究中供试品溶液的制备采用了超声处理的方法，分别超声10，20，30，40 min，测得大黄酚的含量最高为超声30 min和40 min，认为大黄酚在超声30 min基本提取完全，故选用甲醇超声处理30 min为宜。由试验结果可见，超声提取的方法能确保大黄酚测定方法的良好专属性及回收率，且操作简便，提高了试验效率及试验的准确性。

耐用性考察：选取了3种不同品牌的色谱柱，即Waters Sunfire C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm），资生堂Capcell Pak C18柱（200 mm×4．6 mm，5 μm），Phenomenex ODS3 C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm），测定同一批样品，结果3种色谱柱测定结果重复性均较好。

柱温试验：分别选择柱温为25℃和40℃时进样测定大黄酚的含量，结果两者基本无差异，说明在不同柱温测定的结果重复性较好。最终选择接近室温的25℃为柱温箱设定温度。

综上所述，本试验中建立的HPLC法操作简便，专属性强，线性方程、精密度、重复性、回收率均满足要求，可作为中药老蔻丸的质量控制方法。

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Content Determination of Chrysophanol in Laokou Pills by HPLC

Yuan Sikun1，Wang Gengnan2，Cui Mingxu3
（1．Baoding Institute for Food and Drug Control，Baoding，Hebei，China 071000； 2．Agricultural University of Hebei，Baoding，Hebei，China 071000；3．ShenyangPharmaceutical University，Shenyang，Liaoning，China 110000）

Objective To establish an HPLC method for determination of the content of chrysophanol in Laokou Pills．M ethods Waters Sunfire C18column（250 mm×4．6 mm，5 μm）was used，the mobile phase was Methanol－0．1% phosphoric solution（80∶20），the flow rate was 1．0 mL／min，the detection wavelength was 254 nm，the column temperature was 25℃．Results This method had good specificity．The good linear relationship was found in the range of 0．015 70－0．784 85 μg，and the average recovery rate was 99．54%，RSD＝1．48(n＝6)．Conclusion This method has the advantages of simple operation，accurate results，and good reproducibility，can be used for the quality control of Laokou Pills．

HPLC；Laokou Pills；chrysophanol

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)10－0063－03

苑思坤（1983－），男，硕士研究生，主管药师，研究方向为药品检验、药物质量评价及分析，（电话）0312－5906326（电子信箱）yuansikun＠sina．com；王庚南（1984－），女，讲师，研究方向为药物分析、药物代谢动力学，本文通讯作者，（电话）0312－2020700（电子信箱）yiyuone＠sina．com。

2015－08－13；

2015－12－06)