盐酸氨基葡萄糖原料及制剂的药学影响因素研究

沈丹丹，曾 杰，吴 群，姜学美，张 涛

（1．重庆市食品药品检验检测研究院，重庆 401121； 2．重庆市药物过程与质量控制工程技术研究中心，重庆 401121； 3．福安药业集团重庆礼邦药物开发有限公司，重庆 401121）

盐酸氨基葡萄糖原料及制剂的药学影响因素研究

沈丹丹1，2，曾 杰1，2，吴 群1，2，姜学美1，2，张 涛3

（1．重庆市食品药品检验检测研究院，重庆 401121； 2．重庆市药物过程与质量控制工程技术研究中心，重庆 401121； 3．福安药业集团重庆礼邦药物开发有限公司，重庆 401121）

目的 考察盐酸氨基葡萄糖原料及不同剂型的影响因素，为处方工艺研究及质量控制提供依据。方法 样品经过破坏试验和高温、高湿处理后，用反相高效液相色谱法测定有关物质。通过考察盐酸氨基葡萄糖的有关物质变化，作为影响因素的评价指标。结果 盐酸氨基葡萄糖原料比较稳定。在高温高湿条件下，原料与硬脂酸镁和羧甲基淀粉钠辅料分别发生了相容性反应，产生杂质2，5－脱氧果糖嗪或果糖嗪。在高温及高湿条件下，盐酸氨基葡萄糖片剂A厂和颗粒剂D厂有关物质均增加明显，A厂总杂质分别为9．95%和9．22%（未破坏总杂质为5．20%），D厂总杂质分别为8．74%和7．92%（未破坏总杂质为2．82%）。结论 盐酸氨基葡萄糖制剂中处方工艺的差异可能是影响有关物质出现较大差异的重要因素。

盐酸氨基葡萄糖；制剂；影响因素试验；相容性

盐酸氨基葡萄糖（glucosamine hydrochloride）是一种天然的氨基己糖，广泛应用于医药及保健食品领域，主要用于治疗和预防全身所有部位的骨关节炎[1－5]。现代工业生产中主要采用甲壳素为原料，经盐酸水解其糖苷键和酰胺键后得到氨基葡萄糖粗品，再经活性炭脱色和干燥步骤得到盐酸氨基葡萄糖成品，盐酸氨基葡萄糖成品通过离子化反应可进一步得到氨基葡萄糖复盐成品[6－8]。

目前，国内盐酸氨基葡萄糖原料生产企业有2家，制剂生产企业有8家，剂型包括盐酸氨基葡萄糖片剂、颗粒剂和胶囊剂。《欧洲药典》(8．0版)列出了盐酸氨基葡萄糖原料可能在合成过程中容易引入的杂质，包括N－乙酰氨基葡萄糖（N－Acetyl－D－glucosamine）、2，5－脱氧果糖嗪（2，5－deoxyfructosazine）及果糖嗪（deoxyfructosazine）[9]。由于不同生产企业原料及处方工艺的差异，制剂间有关物质测定结果可能差异也较大，但影响其原料和制剂稳定性的具体因素尚未见报道。因此，本研究中考察了原料及制剂在不同影响因素作用下的稳定性，参照2015年版《中国药典》通则中原料药与制剂稳定性试验指导原则[10]，包括高温及高湿影响因素研究，并对原辅料相容性进行研究，考察活性成分、制剂中每种辅料受到环境条件如温度、湿度等的影响情况[11]，为制剂处方及工艺研究提供依据。现报道如下。

1 仪器与试药

1．1 仪器

Waters e2695型高效液相色谱仪，包括Waters 2489型紫外检测器（美国Waters公司）；K51502653型电子天平（德国赛多利斯公司）。

1．2 试药

盐酸氨基葡萄糖对照品（中国食品药品检定研究院，批号为140649－201304，含量为100%）；盐酸氨基葡萄糖系统适用性EP对照品（批号为1．0）；N－乙酰氨基葡萄糖USP对照品（批号为 FOL512；A厂，批号为150535；B厂，批号为150505；C厂，批号为150314)；盐酸氨基葡萄糖颗粒（D厂，批号为150501；E厂，批号为12A141115）；盐酸氨基葡萄糖胶囊（F厂，批号为140822；G厂，批号为20140507；H厂，批号为150602）；盐酸氨基葡萄糖原料（F厂，批号为 1803－2014－10017；I厂，批号为20150201）；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：氨基硅烷键合硅胶为填充剂，Phenomenex luna NH2柱(150 mm×4．6 mm，5 μm）；流动相：磷酸盐缓冲液（称取7．0 g磷酸氢二钾溶解于适量水中，加0．5 mL氨水，加水稀释至2 000 mL，用磷酸调节pH至7．5）－乙腈（25∶75）；检测波长：195 nm；流速：1．5 mL／min；柱温：30℃，进样量：10 μL。在上述条件下，精密量取系统适用性溶液10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，见图1。除空白溶剂峰和氯离子峰外，N－乙酰氨基葡萄糖、2，5－脱氧果糖嗪、果糖嗪和盐酸氨基葡萄糖依次出峰，各峰之间分离度不低于1．5。

图1 系统适用性试验高效液相色谱图

2．2 溶液配制

取N－乙酰氨基葡萄糖与盐酸氨基葡萄糖系统适用性对照品适量，精密称定，加乙腈－水（1∶1）使溶解，并稀释制成每1 mL约含N－乙酰氨基葡萄糖10 μg、盐酸氨基葡萄糖10 mg的混合溶液，作为系统适用性试验溶液。取本品的细粉或内容物适量（约相当于盐酸氨基葡萄糖 500 mg），精密称定，置50 mL容量瓶中，加乙腈－水（1∶1）适量，振摇使溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液2 mL，置100 mL量瓶中，用乙腈－水（1∶1）稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。

2．3 原料影响因素试验

分别称取约500 mg盐酸氨基葡萄糖原料药6份。碱破坏：加乙腈－水（1∶1）溶解后，加1 mol／L氢氧化钠溶液10 mL，于室温下放置10 min，用1 mol／L盐酸调至中性；酸破坏：加乙腈－水（1∶1）溶解后，加1 mol／L盐酸10 mL，于室温下放置10 min，用1 mol／L氢氧化钠溶液调至中性；氧化破坏：加乙腈－水（1∶1）溶解后，加30%H2O2溶液1 mL，于室温下放置10 min；高温破坏：于60℃恒温干燥箱中放置10 d；高湿破坏：相对湿度(80±5)%条件下放置 10 d；光照破坏：于照度为（4 500±500）lx的条件下放置10 d。将6份破坏后的样品分别转移至50 mL容量瓶中，用乙腈－水（1∶1）溶解并稀释至刻度。在拟订色谱条件下进样分析，记录色谱图，见图2。利用二极管阵列检测器对各破坏条件下的盐酸氨基葡萄糖峰进行纯度检查，主峰的纯度因子均超过990，峰纯度符合要求。结果，与未经破坏的原料进行比较，仅在紫外光破坏下产生杂质果糖嗪，高湿条件下产生2，5－脱氧果糖嗪杂质，强酸、强碱、高温及强氧化条件下均未产生杂质，表明样品在强酸、强碱、高温及氧化条件下均稳定。

图2 原料影响因素试验高效液相色谱图

2．4 制剂影响因素试验

分别称取8个不同厂家的盐酸氨基葡萄糖制剂各适量（约相当于盐酸氨基葡萄糖500 mg），进行高温破坏(60℃恒温干燥箱中放置10 d)、高湿破坏[相对湿度（80±5）%条件下放置10 d]。将破坏后的样品分别转移至50 mL容量瓶中，用乙腈－水（1∶1）溶解，并稀释至刻度。按拟订色谱条件进样分析，记录色谱图，见图3。与未经破坏的有关物质测定结果比较，见表1。

结果表明，温、湿度对片剂与颗粒剂的有关物质影响较大，分别与未经破坏的杂质量比较，已知杂质2，5－脱氧果糖嗪和单个未知杂质增加显著，总杂质增加明显，特别是厂家A，B，D，E增加显著，说明温、湿度对不同剂型的杂质降解程度并不完全一致。

2．5 原辅料相容性试验

图3 制剂影响因素试验高效液相色谱图

表1 各厂影响因素试验有关物质测定结果（%）

按表2处方配比称取盐酸氨基葡萄糖原料与辅料，充分混匀后，制成编号1～18号的原辅料混合物，在60℃、相对湿度（80±5）%及60℃条件下分别放置10 d，将破坏后的样品分别转移至50 mL容量瓶中，用乙腈－水（1∶1）溶解，并稀释至刻度。取编号1～18号的辅料各适量，在60℃、相对湿度（80±5）%及60℃的条件下分别放置10 d，将破坏后的样品分别转移至50 mL容量瓶中，用乙腈－水（1∶1）溶解，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。取盐酸氨基葡萄糖原料500 mg，在60℃、相对湿度(80±5)%及60℃条件下分别放置10 d，将破坏后的样品分别转移至50 mL容量瓶中，用乙腈－水（1∶1）溶解，并稀释至刻度。按拟订色谱条件进样分析，记录色谱图，见图4。

结果，辅料在2种条件下均不产生杂质；原料、原辅料混合物在高温条件下均不产生杂质；在高温、高湿条件下，原料与硬脂酸镁或羧甲基淀粉钠的混合物产生杂质2，5－脱氧果糖嗪或果糖嗪；片剂厂家A所提供的原料与硬脂酸镁混合后产生的杂质明显高于厂家B和C，其中片剂厂家B和C的原料均由生产企业F提供，厂家A的原料由生产企业I提供。

图4 高温高湿试验高效液相色谱图

表2 相容性试验处方配比情况

3 讨论

原料破坏试验结果表明，原料在光照、酸、碱、氧化条件下均较稳定，不易降解产生杂质。原辅料相容性试验结果表明，盐酸氨基葡萄糖原料与硬脂酸镁、羧甲基淀粉钠相容性不好，与其他辅料相容性均较好；与硬脂酸镁、羧甲基淀粉钠在高温及高湿条件下产生杂质，但在高温条件下均无杂质生成，这说明原辅料的相容性与水分有一定关系。盐酸氨基葡萄糖原料一共只有2个生产厂家，即原料厂家F与I，原料I与硬脂酸镁的混合物在高温及高湿条件下产生杂质最多，明显高于原料F与硬脂酸镁混合物产生的杂质。这可能是原料的晶型有差异，从而导致药物质量和稳定性的差异[12－13]，具体原因还有待进一步研究。这给原料生产企业提供了重要信息，在原料合成过程中应研究和控制药物在结晶方面的特征和性质。

制剂影响因素试验表明，在高温及高湿条件下，胶囊剂均比较稳定，杂质均无明显变化；片剂与颗粒剂总杂质均明显增加，特别是厂家A，B，D，E增加显著，其中厂家 A，B，D产生的2，5－脱氧果糖嗪杂质均明显增加，厂家D，E产生的未知杂质显著性增加。结合厂家生产工艺和处方分析，影响因素有2个，一是生产工艺中对水分的控制，二是原辅料的影响。胶囊生产工艺均为原料直接分装，制剂中无其他辅料，因此破坏和未破坏后产生的杂质均很少。片剂厂家A和颗粒剂厂家D杂质含量较高，分别为5．20%和2．82%，由于这2个厂家均采用湿法制粒工艺，且水分测定结果表明水分含量相对较高(厂家A为2．0%，厂家D为2．0%）。厂家E虽然也采用湿法制粒工艺，但在生产过程中对干燥温度、时间和水分的控制较严，成品中的水分含量较低（厂家E为0．2%），因此水分可能是影响制剂杂质水平的重要因素。

本研究结果显示，各剂型的处方工艺和质量控制对成品质量具有重要指导意义，各生产企业在工艺流程中应尽量避免采用湿法制粒工艺，对颗粒剂因制粒无法避免水的使用，则应严格控制生产过程中制粒、干燥的时间和制剂中间体的水分含量。同时，提醒药品生产企业在处方中应尽量避免使用硬脂酸镁和羧甲基淀粉钠2种辅料，应重视药品生产过程中的原辅料相容性问题，加强药品原辅料的质量控制，减少辅料与原料可能引起的物理和化学方面的相互作用，从而影响药品质量的安全性和有效性[14－15]。

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Study on the Pharmaceutical Influencing Factors of Glucosamine Hydrochloride Raw M aterials and the Preparations

Shen Dandan1,2,Zeng Jie1,2,Wu Qun1,2,Jiang Xuemei1,2,Zhang Tao3
(1．Chongqing Institute for Food and Drug Control,Chongqing,China 401121; 2．Chongqing Research Center for Drug Process and Quality Control Engineering,Chongqing,China 401121; 3．Fuan Pharmaceutical Lybon Pharm－tech Co．,Ltd,Chongqing,China 401121)

Objective To provide the information for the formulation process and quality control by studying the influencing factors of glucosamine hydrochloride raw materials and preparation experiment．M ethods The relative substances were detected by RP－HPLC after treated under the condition of destruction test,high temperature and high humidity．The changes of related substances of glucosamine hydrochloride were studied as the evaluation index of influencing factors．Results The glucosamine hydrochloride raw materials were relatively stable．Under the condition of high temperature and high humidity,the compatibility reaction occurred among the raw materials and sodium carboxymethyl starch and magnesium stearate respectively,producing impurities 2,5－deoxyfructose or fructose．Related substances in glucosamine hydrochloride of tablets of manufacturer A and granule of manufacturer D both increased significantly,the total impurity of manufacturer A was 9．95% and 9．22% respectively(those not destroyed were 5．20%),and the total impurity of manufacturer D was 8．74% and 7．92%(those not destroyed were 2．82%)．Conclusion The differences of the formulation technology in glucosamine hydrochloride preparations may be the critical factors that influence the relative substances．

glucosamine hydrochloride;preparations;experiment of influencing factors;compatibility

TQ460．7；R943；R982

A

1006－4931(2016)23－0046－05

沈丹丹（1986－），女，硕士研究生，工程师，研究方向为药物分析，（电子信箱）499258077＠qq．com；张涛，硕士研究生，正高级工程师，研究方向为新药开发，本文通讯作者，（电子信箱）zzhtao＠qq．com。

2016－08－01；

2016－09－26)

注：厂家F，G，H均为原料直接填充到胶囊中，未使用辅料。*单位为mg∶mL。