黄芪三七合剂改善慢性肾衰竭模型大鼠营养状态的研究

王 丽，马 欣，喻 琴，樊均明

黄芪三七合剂改善慢性肾衰竭模型大鼠营养状态的研究

王 丽，马 欣，喻 琴，樊均明

目的观察黄芪三七合剂对慢性肾衰竭(chronic renal failure，CRF)大鼠营养状况的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为正常组(normal group，NOR组)、模型组(CRF组)、黄芪三七合剂组(astragalus and radix notoginseng，A＆R组)、缬沙坦组(valsartan group，Val组)4组。CRF组、A＆R组及Val组采用腺嘌呤灌胃方法建立大鼠CRF模型；建模后予以A＆R组黄芪三七合剂(3 mL/d)灌胃，Val组予以缬沙坦[20 mg/(kg·d)]灌胃，NOR组和CRF组予以同等体积生理盐水灌胃，均连续4周。治疗4周后检测大鼠一般情况及摄食量、体质量、白蛋白、血红蛋白、三酰甘油、总胆固醇、肾功能指标的变化。结果与CRF组比较，A＆R组摄食量与体质量显著增加，白蛋白、血红蛋白显著升高(P＜0.05)，肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白显著下降(P＜0.05)。结论黄芪三七合剂可明显改善腺嘌呤致慢性肾衰竭模型大鼠的营养状况。

黄芪三七合剂；慢性肾衰竭；营养不良

慢性肾衰竭(chronic renal failure，CRF)是严重危害人类健康的常见多发疾病，营养不良往往伴发于肾脏衰竭的过程中。目前CRF所致营养不良越来越受关注。营养不良的主要发病机制目前尚不完全清楚，但主要与摄入不足、蛋白丢失、合成降低等有关[1]，寻找有效的治疗营养药物尤为重要。中医药在CRF营养不良治疗中具有明显优势。黄芪三七合剂是在中医理论指导下制成的复方制剂，由黄芪、三七、牡蛎等药物组成。多年来，采用黄芪三七合剂治疗慢性肾脏病获得良好疗效[2-3]。艾娜等[4]在一项临床研究中发现，黄芪三七复方结合西医基础治疗能明显提高慢性肾脏病(chronic kidney disease，CKD)3期患者的总有效率，改善生活质量。本研究旨在通过腺嘌呤建立大鼠CRF模型，探索黄芪三七合剂对CRF大鼠营养状况的影响，进一步为开拓该方的临床应用提供基础证据。

1 材料与方法

1.1 材料 健康雄性SD大鼠70只，体质量200～220 g，10～16周龄，购自西南医科大学无特定病原体动物实验中心[SYXK(川)2013-065]。黄芪三七合剂主要试剂由生黄芪50 g、三七10 g、怀牛膝30 g、昆布30 g、煅牡蛎20 g、当归10 g、生大黄3 g组成。药物采购和制备由西南医科大学附属中医医院中药制剂室完成。方剂制备成浓缩剂备用，由药剂室负责一次性制备完成。最终每毫升药液含生药2.5 g。

1.2 方法

1.2.1 动物分组、模型建立及处理 随机选取10只大鼠为正常组(normal group，NOR组)，予以同等体积生理盐水灌胃，连续4周。其余大鼠参照文献[5-6]采用腺嘌呤(300 mg/kg)灌胃4周的方法建立大鼠CRF模型，符合CRF模型条件的大鼠再随机分为3个治疗组:①模型组(CRF组)，予以同等生理盐水灌胃，连续4周；②黄芪三七合剂组(astragalus and radix notoginseng group，A＆R组)，予以黄芪三七合剂3 mL/d(在预实验中，A＆R组分为高、中、低剂量组，但中剂量组的肾脏保护功能最明显，故在正式实验中仅选用了中剂量组作为中药治疗组)灌胃，连续4周；③缬沙坦组(valsartan group，Val组)，予以缬沙坦20 mg/(kg·d)灌胃，连续4周。在造模期的前3周中，所有大鼠给予同等量饲料，每日均放置25 g饲料于鼠笼凹槽。从造模第4周起至治疗结束，此期间大鼠采用自由饮食。整个实验过程均自由饮水。造模结束末(治疗前)及治疗后每2周称体质量及摄食量；于治疗第4周末，禁食24 h后代谢笼收集24 h尿液，并腹主动脉采血检测血清肌酐(serum creatinine，Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)、白蛋白(albumin，Alb)、血红蛋白(hemoglobin，Hb)、总胆固醇(total cholesterol，TC)、三酰甘油(triacylglycerol，TG)水平。

1.2.2 检测指标

1.2.2.1 一般情况 观察大鼠精神状况、毛发情况、活动度、摄食量及体质量变化。体质量差＝治疗后第4周体质量－治疗前体质量。

1.2.2.2 肾功能指标测定 采血3 mL，离心后取上层血清，全自动血清自动生物化学仪(Beckman CX7，美国Beckman公司)检测BUN、Scr。24 h尿蛋白由全自动尿液分析仪(Clinitek Atlas，德国Bayer公司)分析。

1.2.2.3 生化指标检测 Alb采用溴甲酚绿比色法，Hb采用氰化高铁血红蛋白比色法，TC测定采用胆固醇氧化酶-过氧化物酶偶联法，TG测定采用甘油磷酸氧化酶-过氧化物酶偶联法。

1.3 统计学处理 应用SPSS 13.0软件，计量资料用均数±标准差(± s)表示，组间比较采用t检验及单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般情况 造模期间死亡9只大鼠，共有51只大鼠符合CRF模型条件，随机分配至CRF组(17只)、A＆R组(17只)及Val组(17只)3个治疗组。NOR组大鼠精神可，行动活跃，饮水、进食正常，皮毛有光泽，无腹泻，体质量增长快。CRF组大鼠食欲减退，活动度降低，皮毛晦暗；后期部分大鼠出现脱毛，甚至腹泻，死亡4只。A＆R组大鼠精神可，皮毛光泽度及食欲较模型大鼠好，且体质量有明显增加，无死亡。Val组大鼠无死亡，精神可，食欲较模型组有增加。

2.2 治疗前、后各组摄食量及体质量变化 与NOR组比较，各治疗组摄食量及体质量明显降低。在治疗第2周及第4周时，A＆R组较CRF组摄食量及体质量明显升高，差异有统计学意义(P＜0.05)；第4周的体质量差，A＆R组较CRF组显著性增加(P＜0.05，表1)。

2.3 治疗前、后各组肾功能 实验至治疗后第4周时Scr、BUN及24 h尿蛋白:各治疗组均较NOR组明显增加(F值分别为447.53、257.80、83.64，P＜0.01)；A＆R组与CRF组比较，各指标明显减小，差异有统计学意义(F值分别为671.51、130.38、39.54，P＜0.05)；A＆R组在治疗后，Scr、BUN及24 h蛋白均比治疗前明显降低，差异有统计学意义(t值分别为12.35、7.64、10.32，P＜0.05)。见表1。

2.4 治疗前、后各组Alb和Hb 实验至治疗后第4周时Alb和Hb，各治疗组均较NOR组出现明显降低(F值分别为34.21、68.43，P＜0.01)；与CRF组比较，A＆R组水平显著升高，差异有统计学意义(F值分别为38.32、234.56，P＜0.05)；A＆R组与治疗前比较差异也有统计学意义(t值分别为－7.59、－13.54，P＜0.05)。见表1。

2.5 治疗前、后各组大鼠TC和TG 治疗4周后TC和TG水平，与CRF组比较，A＆R组显著升高(F值分别为28.45、24.65，P＜0.01)；A＆R组与治疗前比较差异也有统计学意义(t值分别为－0.79、－0.80，P＜0.05)。见表1。

表1 各组治疗前、后摄食量、体质量、Scr、BUN、24 h尿蛋白、Alb、Hb、TC、TG变化(± s)

表1 各组治疗前、后摄食量、体质量、Scr、BUN、24 h尿蛋白、Alb、Hb、TC、TG变化(± s)

注:与NOR组比较，＃P＜0.01；与CRF组比较，∗P＜0.05；与治疗前比较，△P＜0.05

组 别摄食量(g)治疗前 第2周 第4周体质量(g)治疗前 第2周 第4周NOR组(10只) 33.32±2.21 34.12±1.21 36.21±2.52 257.65±12.54 288.11±22.54 311.21±19.17 CRF组(13只) 25.54±2.76＃ 22.94±2.16＃ 23.64±1.94＃ 200.89±9.51＃ 213.16±15.92＃ 220.72±11.09＃A＆R组(17只) 25.97±1.27＃ 27.28±0.96＃∗ 30.21±1.39＃∗ 202.61±11.04＃ 228.71±14.75＃ 252.62±12.43＃∗Val组(17只) 25.25±1.74＃ 26.18±1.02＃∗ 27.53±1.23＃ 200.71±11.93＃ 222.64±11.13＃∗ 231.73±12.93∗第4周体质量差(g) Scr(μmol/L)治疗前 治疗后BUN(mmol/L)治疗前 治疗后24 h尿蛋白(mg/24 h)治疗前 治疗后54.43±15.76 50.12±2.31 51.22±2.85 6.51±0.35 6.43±0.27 5.21±1.42 5.14±0.92 20.65±3.21＃ 191.14±22.46＃ 222.15±25.81＃ 17.89±3.51＃ 21.97±5.12＃ 55.12±5.32＃ 68.21±9.58＃49.18±5.17∗ 190.36±18.53＃ 137.28±17.96＃∗△ 17.61±2.08＃ 13.25±3.15＃∗△ 54.91±6.43＃ 42.18±5.26＃∗△32.56±6.52∗ 191.26±21.61＃ 149.87±12.44＃∗△ 17.73±2.12＃ 15.57±2.71＃∗△ 54.98±5.12＃ 49.21±4.14＃∗△Alb(g/L)治疗前 治疗后Hb(g/L)治疗前 治疗后TC(mmol/L)治疗前 治疗后TG(mmol/L)治疗前 治疗后35.11±2.01 36.68±1.93 146.71±4.83 148.25±5.97 1.51±0.31 1.68±0.33 0.85±0.11 0.82±0.17 28.16±2.78＃ 24.35±2.39＃ 90.43±3.78＃ 72.58±9.02＃ 1.36±0.48 1.05±0.39 0.78±0.18 0.70±0.19 27.38±1.02＃ 31.98±1.18＃∗△ 91.05±4.75＃ 113.75±8.31＃∗△ 1.32±0.32 1.41±0.18∗△ 0.80±0.15 0.91±0.11∗△28.43±1.21＃ 28.18±3.24＃∗ 90.13±6.28＃ 88.42±7.52＃ 1.35±0.56 1.21±0.42∗ 0.79±0.16 0.73±0.16

3 讨论

营养不良是CRF的常见并发症之一，其发病率达80%[7]。CRF患者营养不良本身不仅能加快病情发展，还能增加心脑血管疾病的发生率，从而使病死率增高。研究表明，营养状况是预测CRF患者预后的主要指标，是导致其死亡的重要原因[8-9]。因此，若是在延缓肾功能进展的同时，注意改善患者的营养状态，不仅能有效减缓患者病情发展，更能提高患者的生存质量。CRF患者往往存在低蛋白血症[10]，此时若采用高蛋白饮食，定会加重肾脏负担；如何在治疗CRF改善肾功能的同时缓解营养不良，是一个尤为重要的问题。

中医认为，CRF营养不良属于“虚劳”范畴，CRF病位在肾，因外感、内伤多种因素导致肾受损，肾开阖失司，气不化水，阳不化浊，气血运行无力，血流瘀滞，水湿痰浊瘀毒不能下泄外达，聚于体内，蕴结脏腑，久之成毒，损伤脾、肾，耗伤机体而发病[11]。根据现代医家和临床、基础研究认为，治疗CRF应根据其本虚标实、虚实错杂的病机辨证施治，黄芪三七合剂即是在此理论下凝练出的专利复方。方剂主要药物包括黄芪、三七、当归、牛膝、昆布、大黄。方中黄芪、三七为君药，黄芪具补气升阳、益卫固表、利水消肿功效，与当归配伍，气血双补，能有效纠正肾衰竭患者的贫血；三七活血化瘀，与黄芪、当归配伍，补而不滞，协助二药改善患者贫血的症状。药理学研究表明，大黄的活性成分乐丹宁有促进蛋白质合成的作用[12]。郑昱[13]发现，联用黄芪、当归可以明显增高肝细胞白蛋白基因转录活性，从而促进白蛋白的合成。另外，研究表明三七具有补血的作用，能促进各类血细胞的分裂与增殖，改善红细胞膜功能，增加外周血中红细胞的数量，能调控造血细胞分化基因的表达，因而具有显著的造血功能[14]。前期临床研究中发现黄芪三七合剂治疗CKD疗效显著，能明显提高CKD 3期患者的总有效率，改善生活质量，且可明显改善CRF患者面色晦暗、疲软无力症状，同时有很好提升血红蛋白的作用[4]。本实验中，CRF组大鼠食欲减退，活动度降低，皮毛晦暗，后期腹泻；而应用黄芪三七合剂治疗后，A＆R组大鼠精神状态明显改善，皮毛光泽度及食欲较CRF大鼠明显增加，且腹泻症状得到缓解。说明黄芪三七合剂治疗后大鼠肠道功能有所恢复，吸收能力增加，大鼠的整体生理特征逐渐好转，与临床研究一致，这可能与提高蛋白合成、增加造血功效有关。

CRF营养不良的发生机制并不完全清楚，但饮食摄入的不合理为发生营养不良的重要因素，使得蛋白和能量的摄入不能满足机体需要[15]。另外，CRF患者常常并发代谢性酸中毒，且体内毒素大量堆积，引起患者胃肠道功能紊乱，出现恶心、呕吐、食欲缺乏等症状。有研究表明，CRF营养不良的主要原因包括蛋白、热量摄入不足，而厌食是致其发生的主要因素[16]。本研究发现，应用黄芪三七合剂的大鼠摄食量明显增加，伴随体质量增加显著，大鼠精神活动度均好于模型组，且Scr、BUN和24 h尿蛋白明显降低。表明黄芪三七合剂在改善肾功能的同时，增加CRF大鼠食欲，饮食摄入得到保证。此外，本研究结果显示，治疗4周后，与模型组比较，A＆R组大鼠的Alb、Hb、TG及TC水平均显著升高，这些指标均能代表营养状况。表明黄芪三七合剂可促进蛋白质的合成，纠正低蛋白血症，改善营养不良；同时，增加血红蛋白水平，促进造血，改善肾性贫血。另外，本实验中，应用黄芪三七合剂后，Scr、BUN及24 h尿蛋白均比治疗前明显降低，差异有统计学意义(P＜0.05)，说明黄芪三七合剂能保护肾功能、延缓肾脏病的发展。多项结果表明，黄芪三七合剂对慢性肾脏疾病营养不良的治疗是通过多途径、多靶点实现的。另外需要说明的是，在本实验中，因为缬沙坦是临床常用治疗慢性肾脏疾病的药物，故选用当做阳性对照组，但缬沙坦并无明显改善CKD大鼠营养状态的作用。

黄芪三七合剂可以较好地改善CRF大鼠的营养状态，从而为黄芪三七合剂的临床应用提供理论依据。

[1]周冬枝，张晓菊，夏欣欣，等.益肾保真方干预慢性肾衰竭营养不良的作用[J].西安交通大学学报:医学版，2011，32(4):519-522.

[2]文集，谢席胜，张明华，等.基于创新中医理论辨证施治慢性肾脏疾病的临床研究[J].四川大学学报:医学版，2014，45(1):34-38.

[3]谢席胜，王宝福，王彦江，等.黄芪三七合剂对原发性肾病综合征临床疗效观察[J].中国中西医结合肾病杂志，2012，13(5):417-419.

[4]艾娜，谢席胜，王宝福，等.黄芪三七复方对CKD 3期患者肾功能及其生活质量的影响[J].西部医学，2014，26 (11):1445-1450.

[5]Boon AC，Lam AK，Gopalan V，et al.Endogenously elevated bilirubin modulates kidney function and protects from circulating oxidative stress in a rat model of adenine-induced kidney failure[J].Sci Rep，2015，5:15482.

[6]Nguy L，Johansson ME，Grimberg E，et al.Rats with adenine-induced chronic renal failure develop low-renin，saltsensitive hypertension and increased aortic stiffness[J]. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol，2013，304(9): R744-R752.

[7]Bammens B，Verbeke K，Vanrenterghem Y，et al.Evidence for impaired assimilation of protein in chronic renal failure [J].Kidney Int，2003，64(6):2196-2203.

[8]叶任高，郑智华.要重视腹透析患者的营养状态[J].新医学，2003，34(10):597-598.

[9]邓聪，魏连波，龚春水，等.肾衰养真胶囊对腺嘌呤致CRF营养不良模型大鼠营养状态的影响[J].中成药，2008，30(3):333-337.

[10]李俊霞，周欣谕，丘美兰，等.脐带间充质干细胞对难治性肾病综合征的疗效观察[J].中华细胞与干细胞杂志:电子版，2016，6(2):92-96.

[11]樊均明，谢席胜，李飞燕.基于循证建立从“肾痿”的慢性肾衰竭论治[J].中国中西医结合肾病杂志，2012，13 (3):189-192.

[12]黄娟，张庆莲，皮凤娟，等.大黄的药理作用研究进展[J].中国医院用药评价与分析，2014，14(3):282-284.

[13]郑昱.黄芪当归合剂对原发性肾病综合征的疗效分析[J].亚太传统医药，2012，8(3):78-79.

[14]古丽丽，王慧敏.三七总皂苷对血液及造血系统的药理作用研究进展[J].首都医药，2012(10):37-38.

[15]汪燕，郑锦锋，黄家玲.慢性肾衰非透析治疗患者膳食调查及营养评价[J].现代康复，2000，4(2):208-209.

[16]Jaworska M，Szulińska Z，Wilk M.Development of a capillary electrophoretic method for the analysis of amino acids containing tablets[J].J Chromatogr A，2003，993(1/2): 165-172.

Protective effect of astragalus and radix notoginseng on malnutrition rats with chronic renal failure

WANG Li1，MA Xin2，YU Qin2，FAN Junming2
(1.Research Center of Combine Traditional Chinese and Western Medicine，Affiliated Traditional Medicine Hospital，Xinan Medical University，Luzhou Sichuan 646001，China；2.Xinan Medical University，Luzhou Sichuan 646000，China)

Objective To investigate the effect of astragalus and radix notoginseng(A＆R) on malnutrition rats with chronic renal failure(CRF).Methods Male rats were divided randomly into four groups，which were normal group(NOR group)，CRF group，A＆R group and valsartan group(Val group).All the rats in CRF group，A＆R group and Val group were given adenine by gavage.Rats in A＆R group received A＆R(3 mL/d).Val group was received the valsartan[20 mg/ (kg·d)]，NOR group and CRF group received corresponding amount of saline.Renal function，blood serum albumin(Alb)，haemoglobin(Hb)，total cholesterol(TC)，triglyceride(TG)and renal functin were examined with automatic biochemical analyzer.Results The food intake and weight in A＆R group were higher than those in CRF group.The levels of Scr and BUN in CRF group were significantly lower than those in CRF group(P＜0.05)，and in A＆R group the levels of Alb，Hb，TG，TC were all higher than those in chronic kidney disease group(P＜0.05).Conclusion A＆R has a significant protective effect on malnutrition rats with chronic renal failure.

Astragalus and radix notoginseng；Chronic renal failure(CRF)；Malnutrition

R286

A

2095-3097(2016)06-0344-04

10.3969/j.issn.2095-3097.2016.06.007

2016-01-29 本文编辑:徐海琴)

四川省科技厅项目(14JC0150)；泸州市科技局项目(2013CDLZ-S20)

646001四川泸州，西南医科大学附属中医医院中西医结合研究中心(王 丽)；646000四川泸州，西南医科大学(马 欣，喻 琴，樊均明)

樊均明，E-mail:junmingfan＠163.com