儿童化学发光免疫检测中的稀释方法研究

岑美婷 陈纯旭 吴振兴 张 慧

广州市第一人民医院 广州市南沙中心医院检验科（广州 510045）

儿童化学发光免疫检测中的稀释方法研究

岑美婷 陈纯旭 吴振兴 张 慧

广州市第一人民医院 广州市南沙中心医院检验科（广州 510045）

目的 对儿童化学发光免疫检验中标本量过少时的稀释方法分析。方法 选取我院2013年5月—2015年5月儿童常规筛查项目50例血清三碘甲状腺原氨酸（TT3）检测为例，其稀释介质分别采用TT3定制液S0、医用蒸馏水以及0.9%氯化钠，对其实施手工2倍（1∶1）和4倍（1∶3）稀释后，对比分析稀释后结合和原始数据差异。结果 结果和原始数据对比，2倍、4倍稀释S0组以及2倍医用蒸馏水稀释结果差异不大，对比没有统计学意义（P＞0.05），其与各组均差异显著（P＜0.05）。结论 在儿童血清三碘甲状腺原氨酸检测中对其实施2倍、4倍稀释S0以及2倍医用蒸馏水稀释能够满足医学检验需求，值得推广应用。

儿童 化学发光免疫检测 稀释方法

化学发光免疫分析法可以分成两种，分别是免疫化学反应和化学发光反应，也就是将化学发光剂在抗体或者抗原上面实施标记的一种免疫检测方式，在应用中优势包括:操作方便、稳定性高以及灵敏度高等，因此在临床中的应用比较广泛［1］。儿童生长激素激发试验测定的经典方法为放射免疫分析法（RIA），并且已形成一套完整的判断标准。但近几年来随着其他免疫学方法迅速发展，尤其是全自动化学发光免疫分析仪的广泛使用，放射免疫法已逐渐被取代。其中在儿童化学发光免疫检测中难免会出现标本量过少的情况，那么也就需要采用合适的稀释剂对其实施稀释检测，本文则以我院儿童常规筛查项目中的血清三碘甲状腺原氨酸（TT3）检测为例，对其稀释剂和稀释倍数分析。

1 资料和方法

1.1 一般资料 选取我院2013年5月—2015年5月儿童常规筛查项目中50例患儿的血清三碘甲状腺原氨酸（TT3）检测标本为例，其中男性患儿26例，女性患儿24例，患者年龄为3～13岁，平均年龄为（12.3±1.1）岁，所有患儿血清样本均在检测线性范围之内。

本次所有检测工作均由美国贝克曼库尔特公司的化学发光免疫分析仪ACCESS 2对其样本进行检测。试剂为配套试剂三碘甲状腺原氨酸（TT3），试剂盒批内质控检测采用BIO-RAD质控品实施检测，低、中、高三个浓度水平均在5%之下。

1.2 稀释方法 其稀释介质分别采用TT3定制液S0、医用蒸馏水以及0.9%氯化钠，对其实施手工2倍（1∶1）和4倍（1∶3）稀释，将所选取的50例血清样本分别放置在不同稀释剂和不同倍数稀释剂中，最后对其临床指标实施检测对比。

2 结 果

和原始数据对比，2倍、4倍稀释S0组以及2倍医用蒸馏水稀释结果差异不大，对比没有统计学意义（P＞0.05），其与各组均差异显著（P＜0.05）。其中各组数据监测数据和原始血清指标见表1。各组差异对比，见表2。

表1 各组数据监测数据和原始血清指标（g/L）

图1 不同稀释剂2倍和原始数据对比结果（单位:μg/L）

表2 不同稀释剂和不同倍数和原始数据对比结果

图2 不同稀释剂4倍和原始数据对比结果（单位:μg/L）

3 讨 论

化学发光是在常温所出现的化学反应光的发射，其发光机理是在反应体系中的一些物质分子，其中包括反应物、荧光物质或者中间体等，对反应释放能力有所吸收的话，从一开始基态跃迁至激发态，其中中间体能够从一开始的激发态回归到基态过程中会出现等能级光子的释放，对这些光子实施临床测定也就能够实施相应的定量分析［2］。化学发光免疫测量则是将化学发光和免疫产物结合应用的一种临床检测方法，因为化学发光具有一定的荧光特异性，但是其和荧光过程中所需要的激发光具有一定的差异，化学发光则是通过化学反应所出现的光强度，在此过程中并不需要激发光，以此也就对荧光分析中激发光杂散光的影响作用有显著避免［3］。基于其原理可以明确，在其检测过程中对其精度要求较高，患者检测过程中的血清加注可以直接影响到其检测物浓度，从而影响检测结果。儿童检验和成人检验具有一定差异，比如在加样环节儿童化学免疫检验通常会出现标本量不足问题，究其原因则主要包括三个方面，分别是儿童血液样本通常是14岁以下儿童，患儿血球压积过高血清量偏少，因此具有一定的采集难度；针对具体的检验结果需要对某些问题实施复查；不可预估的仪器故障会导致标本出现浪费情况等等［4-5］。针对这些问题，为了能够有效避免反复抽血情况的出现，就需要找到相应的稀释介质和合理的稀释倍数，解决标本量不足问题。

其中在本次研究中所选用的稀释介质有三种，分别是和TT3相配合定制液S0，医用蒸馏水以及0.9%氯化钠，并各个稀释介质采用2倍和4倍实施稀释。其中在临床分析结果中显示2倍、4倍稀释S0组以及2倍医用蒸馏水稀释结果可用，但是其他稀释办法在临床应用对其结果具有较大影响。其原因是S0定标液组成成分为人血清含有零浓度甲状腺原氨酸，这一物质和样品血清基本相近，两者的结合应用具有较高稀释能力。同时零浓度甲状腺原氨酸胶体具有较高稳定性，成分单一，能够有效排除其他物质对血清所产生的影响作用，也就显著降低了机制效应对检验结果所具有的影响作用。因此S0定标液在本次实验中所选用的2倍以及4倍稀释对其检测结果均影响不大。医用蒸馏水本身没有任何杂质，在其稀释过程中所产生的基质效应也比较小，能够用来进行稀释，但是在医用蒸馏水量达到4倍的时候，也就会出现随着稀释液量的逐渐增大也就逐渐提高了之间的误差，从而导致其结果偏差过大［6］。0.9%氯化钠的分析结果则显示不管是2倍还是4倍均不可用，主要原因是将其作为稀释剂应用，其本身不含有蛋白质和血清成分，如果用其进行稀释血清，也就会对其之前的稳定性有所降低，也会引起吸光度范围有较大波动的出现，从而最终导致检验结果具有较大差异，不可用。

化学发光免疫分析测定中经常会用到稀释液和稀释方法，其也对检测结果具有直接影响。关于稀释液的选择不但要简单方便，同时也不能够对其检测结果准确性产生影响。在本次研究中所选用的三种稀释液中，最好的为SO稀释液，并且每一种检测项目的SO定制液成分均是这一实际的零浓度入血清。因此在实施其他标本鉴定的时候也可以采用这一方式。但是在应用中是否能够选用4倍以上标本稀释液则还需要进一步研究。医用蒸馏水比较容易得到，但是其使用仅限制在2倍稀释，相对而言0.9%氯化钠则不能够作为稀释液应用，在临床中需要注意。

总之，在儿童血清总三碘甲状腺原氨酸检测中对其实施2倍、4倍稀释S0以及2倍医用蒸馏水稀释能够满足医学检验需求，检验结果和原有数据之间偏差较小，因此也就说明其能够成功应用在儿童血清标本量过少情况中，同时也值得推广应用。

［1］鲍俊杰，杨红玲，郭彩娇，等.酶联免疫吸附测定法与化学发光微粒子免疫分析法检测广州地区儿童HB-sAb结果分析［J］.中西医结合肝病杂志，2009，19（1）:44-46.

［2］麦爱芬.血清性激素水平的测定对儿童性激素分泌异常的早期诊断［J］.医学检验与临床，2015（1）: 48-49.

［3］李华荣.化学发光免疫分析技术在跟踪儿童乙型肝炎疫苗免疫效果中的动态观察［J］.中国现代药物应用，2013，7（20）:83-84.

［4］李丽珍.广西那坡县1～6岁儿童乙型病毒性肝炎及白喉免疫效果分析［J］.现代医药卫生，2013，29（1）:154-155.

［5］黄军林，黄夏声，罗炬，等.化学发光法和酶联免疫吸附试验检测免疫儿童乙型肝炎表面抗体的结果分析［J］.吉林医学，2013，34（13）:2468-2469.

［6］陈红兵，谢国锦，沈京培，等.化学发光法在儿童生长激素缺乏症诊断中的应用［J］.广东医学，2011，32（3）:325-327.

10.3969/j.issn.1000-8535.2016.01.021

2015-10-12）