解郁安神颗粒中栀子苷含量测定的比对

2016-12-24王世清王全豪

光明中医 2016年21期

王世清王全豪

【实验研究】

解郁安神颗粒中栀子苷含量测定的比对

王世清1王全豪2

目的高效液相色谱法测定解郁安神颗粒中栀子苷含量的比对试验。方法采用回流法与超声处理法分别进行提取，两台高效液相色谱仪同时进样分析。结果回流与超声处理两种提取方法测得的解郁安神颗粒中栀子苷含量基本相同。但是，两台液相色谱仪测定的结果之间有较大偏差。结论超声处理提取法避免了回流法烧瓶形成固体粘附物对栀子苷含量的影响，可以使用超声处理法提取解郁安神颗粒中的栀子苷。

解郁安神颗粒；栀子苷；含量测定

2016年7月河南省食品药品检验所在全省辖区范围内组织中药制药厂、中药饮片厂、各地市药检所进行了一年一度的实验室比对试验，采用《中国药典》2015年版一部解郁安神颗粒含量测定[1]的方法，以干燥品计算每克中栀子苷的含量。试验过程中除使用规定的回流法外，还采用超声法提取，两台液相色谱仪同时测定，结果两种提取方法所得结果基本相同。现汇报如下供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器安捷伦 1260全自动高效液相色谱仪(美国)两台，分别是2008年与2015年安装；色谱柱：Weters(Symmetry C18柱，5μm，柱长：250 mm，内径：4.6mm )、天津兰博(Kromasil C18柱，5μm，柱长：250 mm，内径：4.6mm)；KS-500EII超声波清洗机(宁波海曙科生超声设备有限公司)。

1.2 试药栀子苷参考物(规格：20mg，批号：151204，含量99.79%，成都普菲德生物技术有限公司)一支；解郁安神颗粒(规格：5g，批号：Z2016132-A、Z2016132-B，河南省食品药品检验所)共4袋，A、B样各2袋；甲醇为分析纯，液相流动相使用的乙腈为色谱纯、水为娃哈哈纯净水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件流动相：乙腈-水(15：85)；流速：1.0 ml/min；检测波长：236 nm；柱温：35 ℃；进样量：10 μl

2.2 对照品溶液的制备精密称取栀子苷参考物10.06 mg、9.01 mg，分别置100 ml的容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取15 ml，置 50 ml量瓶中，各加甲醇至刻度,摇匀,即得。

2.3 供试品溶液的制备取本品内容物，混匀，研细，取1 g(剩余样品按照《中国药典》2015年版四部水分测定法之烘干法[2]测定水分)，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 20 ml，称定重量，加热回流40分钟(回流速度约30滴/min)(另取1 g，不回流而是超声处理(功率500 W，频率40 kHz)40分钟)，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，分别注入两台液相色谱仪，同时测定[3～5]，即得。从表1可以看出0.10038874mg/ml浓度的对照品计算出来的结果明显偏低，可能该浓度已超过该台液相的线性范围。从两表结果可以看出超声提取与回流的结果基本一致，可以使用超声处理法提取解郁安神颗粒中的栀子苷，从而相互佐证。从表1和表2的含量可以看出，两个液相的数据偏差较大。可以取两台液相测得结果的平均值报告。结果见表1、表2。

3 讨论

我们在比对试验前，先从市场购买解郁安神颗粒进行预试验，实验过程中发现回流后烧瓶壁上粘附一圈黄白色固体(蔗糖及处方成分)，超声使之脱落、溶解，结果溶解不完全，致使平行试验的两份之间误差较大。对此，我们在第二次预试验的过程中，对粘附物先用粗玻璃棒慢慢研细，取出前触碰内壁，使棒上液体流下，再用甲醇3～5滴冲洗玻棒，洗液入瓶，然后超声3～5分钟，最后调节重量(少了滴加甲醇，过了放置挥发)。

为了克服瓶壁固体粘附物对栀子苷的包埋，考虑到解郁安神颗粒本身为提取物，第二次预试验时增加了超声处理法提取，结果理想，随即决定比对试验增加超声处理法提取样品中的栀子苷。

比对试验过程中发现样品的峰面积特别大，随即将高浓度的对照品溶液装机进样。从两表峰面积可以看出，不同的色谱柱重复性不同，国产色谱柱虽然使用进口填料，但重复性明显不如原装进口色谱柱的好。另外，重复性的好坏也与液相的六通阀的清洁程度有关，可以在卸下色谱柱的情况下，用2.5 ml.min-1流速的甲醇以连续进样的方式冲洗六通阀，进针数为6的倍数。