1%卢立康唑乳膏体外抗真菌谱及活性研究

冯孝伟 胡文英 冉玉平 庄凯文 代亚玲

(1.四川大学华西医院皮肤性病科，成都 610041；2.四川大学华西医院实验医学科，成都 610041)



·论著·

1%卢立康唑乳膏体外抗真菌谱及活性研究

冯孝伟1胡文英1冉玉平1庄凯文1代亚玲2

(1.四川大学华西医院皮肤性病科，成都 610041；2.四川大学华西医院实验医学科，成都 610041)

目的 探讨1%卢立康唑乳膏单纯制剂的体外抗真菌谱与抗真菌活性，并与2%酮康唑乳膏、1%盐酸特比萘芬乳膏及1%萘替芬-0.25%酮康唑乳膏进行对比。方法 选用临床分离致病真菌及马拉色菌标准株共14种32株，用琼脂扩散法行药敏试验。配制含2%琼脂培养基的含菌培养皿，打孔后分别加入上述4种乳膏，培养7 d后测定各含药孔周围的抑菌圈直径并进行比较。结果 1%卢立康唑乳膏对各实验菌株均形成抑菌圈，抑菌圈直径均数为50.35 mm。1%特比萘芬乳膏对除念珠菌和镰刀菌以外的实验菌株的抑菌圈直径均数为49.24 mm。2%酮康唑乳膏对除镰刀菌以外的实验菌株的抑菌圈直径均数为33.22 mm。1%萘替芬-0.25%酮康唑乳膏对各实验菌株的抑菌圈直径均数为52.46 mm。1%卢立康唑乳膏的抑菌圈直径均数与2%酮康唑乳膏及1%特比萘芬乳膏相比，差异均有统计学意义 (P=0.000)，而与1%萘替芬-0.25%酮康唑乳膏无明显差异 (P>0.05)。结论 1%卢立康唑乳膏与1%萘替芬-0.25%酮康唑乳膏体外抗真菌谱及抗真菌活性相近，且强于2%酮康唑乳膏及1%特比萘芬乳膏。

1%卢立康唑乳膏；抗真菌谱；抗真菌活性；体外

[Chin J Mycol，2016，11(2):90-94]

外用抗真菌药物是治疗浅部真菌病和皮下真菌感染 (孢子丝菌、着色真菌、镰刀菌等)的重要手段[1]，其主要分为丙烯胺类 (特比萘芬等)和咪唑类 (酮康唑等)两种。自20世纪60年代末以来唑类及其衍生物成为临床治疗真菌感染的主要药物并不断发展。1%卢立康唑乳膏是一种新型咪唑类抗真菌剂，在日本临床试验中显示出了对皮肤癣菌、念珠菌和马拉色菌良好的抗菌活性[2]，但目前国内尚无1%卢立康唑乳膏对各种皮肤致病真菌的体外抗菌谱及活性研究。因此，本次实验采用琼脂扩散法对新型唑类-1%卢立康唑乳膏和临床常用的2%酮康唑乳膏、1%盐酸特比萘芬乳膏、1%萘替芬-0.25%酮康唑乳膏的体外抗真菌谱及活性进行对比研究，为外用抗真菌药物的临床应用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

实验药品 1%卢立康唑乳膏为海南海灵化学制药有限公司提供 (每支10 g含卢立康唑100 mg，批号1305102)；作为对照药的2%酮康唑乳膏 (西安杨森制药有限公司，每支15 g含酮康唑300 mg，批号130706069)、1%萘替芬-0.25%酮康唑乳膏 (重庆华邦制药股份有限公司，每支10 g含萘替芬100 mg和酮康唑25 mg，批号2013031)、1%盐酸特比萘芬乳膏 (北京诺华制药有限公司，每支10 g含特比萘芬100 mg，批号M03018A)，均购自正规药店且在有效期内。

实验菌株 纳入常见致病真菌14种32株，其中11种26株来自临床分离，均根据形态学和分子生物学方法 (核糖体基因及与之相邻的间隔区测序)鉴定到种；其余3种6株为马拉色菌标准株 (见表1)。

培养基 根据实验菌株不同分别采用：①沙堡弱培养基 (SDA，质量分数为蛋白胨1%、葡萄糖4%、氯霉素0.02%、琼脂2%)。②改良Leeming-Notman培养基 (质量分数为蛋白胨1%、葡萄糖4%、琼脂2%、酵母浸膏0.01%、单硬脂酸甘油酯0.25%、菜籽油4%、吐温-80 1%、放线菌酮0.05%、氯霉素0.005%)。③马铃薯葡萄糖琼脂培养基 (PDA，质量分数为马铃薯20%、葡萄糖2%、琼脂2%)。

1.2 实验方法

经多次预实验比较发现直径为15 cm或9 cm的培养皿对各药膏抑菌圈大小无明显影响 (见图1)，为便于观察及测量，选择直径为15 cm的大培养皿，具体实验步骤如下：①活化菌株：3株马拉色菌用改良Leeming-Notman培养基，32℃培养7 d。红色毛癣菌、须癣毛癣菌用PDA，其余菌株用SDA，培养温度为28℃，培养7 d。②制作培养基平板：取直径15 cm培养皿，加入含2%琼脂的熔化培养液约100 mL，分别制作成SDA、PDA、改良Leeming-Notman培养基平板[3]。③制作菌悬液：挑取芝麻粒大菌落1团，溶于灭菌蒸馏水1 mL，充分混合均匀，调节菌悬液浊度至0.5～1麦氏浊度，相当于 (5～10)×106CFU/mL[4]。④制作含菌平板：以无菌棉签蘸取菌悬液并在管壁挤去过多液体后，将菌悬液均匀涂布于实验用培养基平板表面。⑤打孔加药：以直径7 mm打孔器在涂菌后的培养基上打孔，将孔内的琼脂挑去后分别将新打开的实验乳膏挤入孔内，使药膏与孔边缘平齐并充分接触，勿使药膏溢出孔外琼脂平面。⑥将培养基置于合适温度下 (念珠菌和马拉色菌32℃，其余菌株28℃)培养，每天观察真菌生长情况和药物孔周围有无抑菌圈形成，连续观察,第7天照相并测定抑菌圈直径。

表1 实验菌株来源及所用培养基

1.3 结果判读及数据统计分析

2 结 果

2.1 各抗真菌药膏对皮肤癣菌的抗菌活性

4种药膏对4种12株常见皮肤癣菌的抑菌圈直径比较显示组间差异有统计学意义 (F=124.031，P<0.05)；两两比较示各亚组间均有统计学差异 (P<0.05)，抑菌圈从大到小依次为：1%萘替芬-0.25%酮康唑乳膏>1%卢立康唑乳膏>1%盐酸特比萘芬乳膏>2%酮康唑乳膏 (见表2、图2)。

2.2 各抗菌药膏对念珠菌酵母态的抗菌活性

4种药膏对3种念珠菌酵母态的抑菌圈直径差异有统计学意义 (F=47.146，P<0.05)。两两比较示1%萘替芬-0.25%酮康唑乳膏、2%酮康唑乳膏以及1%卢立康唑乳膏三组药膏的抑菌圈直径差异无统计学意义 (P>0.05)，而1%盐酸特比萘芬乳膏与其他3组差异均有统计学意义 (P=0.000)。抑菌圈从大到小顺序为：1%萘替芬-0.25%酮康唑乳膏=2%酮康唑乳膏=1%卢立康唑乳膏>1%盐酸特比萘芬乳膏 (见表3、图3)。

表2 各抗真菌乳膏对各皮肤癣菌的抑菌圈直径大小比较

Tab.2 The comparison of diameter of the inhibition zone around the well full of each cream in the plate which was spread with dermatophytes

皮 肤癣 菌1%卢立康唑乳膏1%盐酸特比萘芬乳膏2%酮康唑乳膏1%萘替芬⁃0．25%酮康唑乳膏红 色A 69．30±0．9960．88±0．3449．30±0．7181．10±1．56毛癣菌B 73．22±1．7057．72±1．5754．76±0．5183．63±1．13C 63．38±1．5655．56±1．5452．90±0．9979．30±0．99须 癣A 57．60±1．7650．98±0．2323．40±1．4165．54±1．51毛癣菌B 80．74±2．1853．08±1．1330．65±0．6477．52±1．81C 79．36±0．7967．73±1．5522．77±0．8185．63±0．46D 85．50±1．5661．92±0．4329．00±0．2887．40±1．49E 79．42±0．8568．31±0．7535．60±1．7083．50±1．27犬 小A 71．02±1．7363．00±0．4538．95±1．7679．12±1．24孢子菌B 81．10±1．5669．55±1．0547．30±0．9991．13±1．56石膏样A 65．83±1．1363．89±0．7233．30±1．5681．65±0．78小孢子菌B 58．13±2．5063．38±1．4429．07±1．3284．41±0．14

表3 各抗真菌乳膏对念珠菌酵母态的抑菌圈直径大小比较

Tab.3 The comparison of diameter of the inhibition zone around the well full of each cream in the plate which was spread withCandida

念珠菌酵母态1%卢立康唑乳膏1%盐酸特比萘芬乳膏2%酮康唑乳膏1%萘替芬⁃0．25%酮康唑乳膏白 念A 30．57±0．617．00±0．0032．04±0．1131．12±0．93珠 菌B 31．22±0．707．00±0．0031．76±0．5133．63±1．13克 柔A 13．62±0．547．00±0．0010．56±0．798．18±0．85念珠菌B 14．74±1．187．00±0．0011．65±0．647．52±1．81热 带A 13．80±0．747．00±0．0027．62±0．5425．98±0．19念珠菌B 15．13±1．507．00±0．0029．07±1．3224．41±0．14

2.3 各抗真菌药膏对马拉色菌的抗菌活性

4种药膏对3种马拉色菌的抑菌圈直径有统计学差异 (F=17.24，P<0.05)。两两比较结果示各药物的抑菌圈从大到小顺序为：1%萘替芬-0.25%酮康唑乳膏=2%酮康唑乳膏>1%卢立康唑乳膏>1%盐酸特比萘芬乳膏 (见表4、图4)。

2.4 各抗真菌药膏对茄病镰刀菌的抗菌活性

不同药膏对茄病镰刀菌抑菌圈直径有统计学差异 (F=726.491，P<0.05)；两两比较结果示抑菌圈从大到小顺序为:1%卢立康唑乳膏>1%萘替芬-0.25%酮康唑乳膏=1%盐酸特比萘芬乳膏>2%酮康唑乳膏 (见表5、图5)。

2.5 各抗真菌药膏对各着色真菌的抗菌活性

各抗真菌乳膏对着色真菌抑菌圈直径不同，差异有统计学意义 (F=23.247，P<0.05)，两两结果示抑菌圈从大到小顺序为:1%卢立康唑乳膏>1%萘替芬-0.25%酮康唑乳膏=1%盐酸特比萘芬乳膏>2%酮康唑乳膏 (见表6、图5)。

表4 各抗真菌乳膏对马拉色菌的抑菌圈直径大小比较

Tab.4 The comparison of diameter of the inhibition zone around the well full of each cream in the plate which was spread withMalassezia

马拉色菌1%卢立康唑乳膏1%盐酸特比萘芬乳膏2%酮康唑乳膏1%萘替芬⁃0．25%酮康唑乳膏糠秕马拉色菌19．33±0．988．95±0．2425．80±1．1325．55±0．55球形马拉色菌21．10±1．5610．31±0．5039．38±0．9931．40±1．13斯洛菲马拉色菌25．52±1．5011．01±0．3255．30±1．8349．34±0．87

表5 各抗真菌乳膏对茄病镰刀菌的抑菌圈直径大小比较

Tab.5 The comparison of diameter of the inhibition zone around the well full of each cream in the plate which was spread withFusariumsolani

茄病镰刀菌1%卢立康唑乳膏1%盐酸特比萘芬乳膏2%酮康唑乳膏1%萘替芬⁃0．25%酮康唑乳膏菌株A36．00±1．707．00±0．007．00±0．0010．50±1．56菌株B58．15±1．777．00±0．007．00±0．0019．30±0．99

表6 各抗真菌乳膏对各着色真菌的抑菌圈直径大小比较

Tab.6 The comparison of diameter of the inhibition zone around the well full of each cream in the plate which was spread withFonsecaeapedrosoi

着 色真 菌1%卢立康唑乳膏1%盐酸特比萘芬乳膏2%酮康唑乳膏1%萘替芬⁃0．25%酮康唑乳膏裴氏着A 67．63±1．7055．52±1．8739．40±0．8557．75±1．56色真菌B 81．15±1．7763．50±1．2747．38±0．9961．30±0．99卡 氏枝孢霉65．35±1．3550．00±1．7045．60±1．8353．24±1．69

2.6 各抗真菌药膏对球形孢子丝菌菌丝相的抗菌活性

不同药膏对球形孢子丝菌菌丝相抑菌圈直径有统计学差异 (F=17.541，P<0.05)；两两比较结果示各药物抑菌圈从大到小顺序为:1%卢立康唑乳膏=1%萘替芬-0.25%酮康唑乳膏=1%盐酸特比萘芬乳膏>2%酮康唑乳膏 (见表7、图5)。

表7 各抗真菌乳膏对球形孢子丝菌菌丝相的抑菌圈直径大小比较

Tab.7 The comparison of diameter of the inhibition zone around the well full of each cream in the plate which was spread withSporothrixglobosa

球形孢子丝菌菌丝相1%卢立康唑乳膏1%盐酸特比萘芬乳膏2%酮康唑乳膏1%萘替芬⁃0．25%酮康唑乳膏菌株A30．97±0．7231．65±0．6219．72±0．6833．74±0．88菌株B31．90±0．9330．00±0．7617．50±0．8731．40±1．13菌株C39．24±0．8237．05±0．3817．15±0．3837．20±0．62

3 讨 论

传统培养皿直径为9 cm (加入含2%琼脂的熔化培养液约为30 mL)，若抑菌作用强则抑菌圈直径超出平皿边缘的培养基范围而影响准确观察，故该实验中首次采用直径为15 cm的大培养皿，经过前期的预实验以及统计分析比较表明培养皿直径不会影响药物抑菌圈的大小，较大的培养皿中可同时观察在完全等同条件下4种药物形成的抑菌圈大小，以免因每个药物抑菌圈太大相互融合而不利于观察，或者在不同的小培养皿中会造成各培养皿环境不统一而造成误差。

酮康唑可选择性干扰真菌细胞色素P-450活性，抑制14-α-去甲基酶催化活性，使羊毛固醇不能转化成14-α-去甲基固醇，阻止麦角固醇合成，使真菌细胞膜合成受阻，真菌细胞破裂死亡[5]。特比萘芬及萘替芬可选择性地抑制真菌角鲨烯环氧化酶活性，抑制真菌麦角固醇合成并造成角鲨烯堆积[6]。萘替芬酮康唑是前两者的复合制剂。卢立康唑曾被称为NND-502，首先由Nihon Nohyaku有限公司合成的咪唑类抗真菌药，其作用机制与其他唑类抗真菌药大致相同，但其独特的化学结构又决定了其不同的抗菌活性，尤其表现在其较强的抗皮肤癣菌活性[7-9]。本实验通过对比观察1%卢立康唑乳膏、2%酮康唑乳膏、1%萘替芬-0.25%酮康唑乳膏、1%特比萘芬乳膏4种外用抗真菌药对14种32株临床分离真菌菌株及马拉色菌标准株的抗菌谱及抗菌活性，结果发现卢立康唑乳膏对以上真菌均有抗菌活性，抗菌谱更广；且在某些少见菌及难治性真菌中 (如镰刀菌、着色真菌等)，只有卢立康唑有较大抑菌圈，抗菌活性更强。

图1 在含有沙堡弱培养基的大培养皿 (左侧，直径15 cm)和小培养皿 (右侧，直径9 cm)中各抗真菌乳膏对球形孢子丝菌的抑菌圈大小对比 (L.1%卢立康唑乳膏,T.1%盐酸特比萘芬乳膏,K.2%酮康唑乳膏,NK.1%萘替芬-0.25%酮康唑乳膏)。球形孢子丝菌菌丝态在SDA培养基中，28℃，培养7 d在各受试乳膏 (孔内白色物)周围形成的抑菌圈 图2 在沙堡弱培养基中各抗真菌乳膏对皮肤癣菌抑菌圈比较 (L.1%卢立康唑乳膏,T.1%盐酸特比萘芬乳膏,K.2%酮康唑乳膏,NK.1%萘替芬-0.25%酮康唑乳膏;红毛.红色毛癣菌,须癣.须癣毛癣菌,犬小.犬小孢子菌,石小.石膏样小孢子菌) 图3 在沙堡弱培养基中各抗真菌乳膏对念珠菌酵母态抑菌圈比较 (L.1%卢立康唑乳膏,T.1%盐酸特比萘芬乳膏,K.2%酮康唑乳膏,NK.1%萘替芬-0.25%酮康唑乳膏;白念.白念珠菌,克柔.克柔念珠菌,热带.热带念珠菌) 图4 在改良Leeming-Notman培养基 (mLNA)上各抗真菌乳膏对马拉色菌抑菌圈 (L.1%卢立康唑乳膏,T.1%盐酸特比萘芬乳膏,K.2%酮康唑乳膏,NK.1%萘替芬-0.25%酮康唑乳膏;糠秕.糠秕马拉色菌,球形.球形马拉色菌,斯洛菲.斯洛菲马拉色菌) 图5 在沙堡弱培养基中各抗真菌乳膏对4种实验菌株抑菌圈比较 (L.1%卢立康唑乳膏,T.1%盐酸特比萘芬乳膏,K.2%酮康唑乳膏,NK.1%萘替芬-0.25%酮康唑乳膏;卡氏.卡氏枝孢霉,裴氏.裴氏着色真菌,镰刀菌.茄病镰刀菌,孢子丝.球形孢子丝菌菌丝相)

Fig.1 The comparison of the inhibition zone around the well full of each cream between the large plate (left,diameter:15 cm) and small plate (right,diameter:9 cm) in which the organism suspension ofSporothrixglobosawas spread on the surface of SDA Fig.2 The comparison of the inhibition zone around the well full of each cream in the plate which was spread with dermatophytes Fig.3 The comparison of the inhibition zone around the well full of each cream in the plate which was spread withCandidaFig.4 The comparison of the inhibition zone around the well full of each cream in the plate which was spread withMalasseziaFig.5 The comparison of the inhibition zone around the well full of each cream in the plate which was spread with four experiment isolates respectively

1%卢立康唑乳膏不仅可有效地抗真菌，还可在皮肤内持久保留以明显缩短治疗时间。卢立康唑乳膏是第1个每日用1次1周疗程的唑类抗真菌药物，治疗股癣和体癣安全有效，相比于其他上市的唑类药物可缩短用药时间[10]。对多个随机对照实验的数据综合及比较表明1天1次，连续使用两周1%卢立康唑的疗效优于或与1天1～2次、连续使用4周其他对照组药物的疗效相近，表明使用1%卢立康唑可缩短疗程，提高患者依从性，从而根除真菌，减少复发[11]。

4 结 论

1%卢立康唑乳膏对皮肤癣菌、念珠菌、马拉色菌、球形孢子丝菌、着色真菌、茄病镰刀菌等14种32株菌株均形成抑菌圈，其中对少见难治真菌 (茄病镰刀菌、着色真菌)有更强的抗菌活性及更好的临床应用价值。

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[本文编辑] 施 慧

Invitroantifungal spectrum and activity of 1% luliconazole cream compared with 2% ketoconazole cream,1% terbinafine cream and 1% naftifine-0.25% ketoconazole cream

FENG Xiao-wei1,HU Wen-ying1,RAN Yu-ping1,ZHUANG Kai-wen1,DAI Ya-ling2

(1.DepartmentsofDermatovenereologyand2.LaboratoryMedicine,WestChinaHospital,SichuanUniversity,Chengdu610041,China)

Objective To research the anti-fungal spectrum and activity of the 1% luliconazole cream compared with other three creams that contain of 2% ketoconazole,of 1% terbinafine,of 1% naftifine-0.25% ketoconazole cream respectively.Methods Thirty-two isolates of pathogenic fungi belonging to 14 species isolated from clinic and three species ofMalasseziastandard stains were enrolled into the experiment.The agar diffusion method was used to judge drug sensitivity.Organism suspension of each species was spread on the surface of the plate of the optimal media containing 2% agar.Then wells were made in the plate and four types of cream were put in each well respectively.After seven-day incubation,the diameter of the inhibition zone around the well full of each cream was observed and recorded.Results The inhibition zone around the well filled with 1% luliconazole cream for all experiment isolates was observed,with the mean diameter of 50.35 mm.Similarly,the mean diameter of inhibition zone of 1% naftifine-0.25% ketoconazole cream for all experiment isolates was 52.46 mm.About 1% terbinafine cream,the mean diameter was 49.24 mm but there was no inhibition zone observed aroundCandidaspp.and Fusarium solani.As for 2% ketoconazole cream,the mean diameter was 33.22 mm but there was no inhibition zone observed aroundFusariumsolani.There were no significant significances for mean diameters of the inhibition zone when comparing 1% luliconazole cream with 1% naftifine-0.25% ketoconazole cream,but when comparing 1% luliconazole cream with 2% ketoconazole cream and 1% terbinafine cream,the difference was statistically significant (P=0.000).Conclusion The anti-fungal spectrum and activity of 1% luliconazole cream are nearly the same as that of 1% naftifine-0.25% ketoconazole cream,and is stronger than that of 2% ketoconazole cream and 1% terbinafine cream.

1% luliconazole cream;anti-fungal spectrum;anti-fungal activity;invitro

冯孝伟，女 (汉族)，硕士，住院医师.E-mail:845217284@qq.com

冉玉平，E-mail:ranyuping@vip.sina.com

R 978.5

A

1673-3827(2016)11-0090-05

2015-04-06