高效液相色谱法测定蒙药萨布如木病颗粒中苦参碱含量

么世英

（内蒙古自治区呼和浩特市食品药品检验所，内蒙古 呼和浩特 010020）

高效液相色谱法测定蒙药萨布如木病颗粒中苦参碱含量

么世英

（内蒙古自治区呼和浩特市食品药品检验所，内蒙古 呼和浩特 010020）

目的 建立测定蒙药萨布如木病颗粒中苦参碱含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法 色谱柱为WatersXbridge C18柱（75mm×4．6mm，2．5 m），柱温为 30℃，流动相为乙腈 －0．1%磷酸溶液－甲醇（76∶19∶5，三乙胺调节 pH至8．0），流速为1．0 mL／min，检测波长为220 nm。结果 苦参碱进样量在0．202～4．040 g范围内与峰面积线性关系良好，平均加样回收率97．64%，RSD＝1．69%(n＝6)。结论 该方法准确可靠，可用于蒙药萨布如木病颗粒中苦参碱的含量测定。

高效液相色谱法；萨布如木病颗粒；含量测定

萨布如木病颗粒为蒙药复方制剂，方中苦参为君药。为此，以苦参碱作为指标成分进行含量测定方法研究，经分析验证，所建立的高效液相色谱（HPLC）法重复性好，专属性强，其他成分对苦参的测定无干扰，可用于该制剂中苦参碱的质量控制。现报道如下。

1 仪器与试药

岛津2010AHT(日本岛津公司)、LabSolutions色谱工作站。苦参碱对照品（中国食品药品检定研究院，批号为110805－200508，供含量测定用）；萨布如木病颗粒（内蒙古国际蒙医院提供，批号分别为 20150106，20141030，20140816)；乙腈、甲醇为色谱纯，水为高纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱：Waters Xbridge C18柱（75 mm×4.6 mm，2.5μm）；流动相：乙腈－0.1%磷酸溶液－甲醇（76∶19∶5，三乙胺调节pH至8.0）[1－3]；柱温：30℃；检测波长：220nm；进样量：10μL。

2．2 溶液制备

称取经五氧化二磷干燥过的苦参碱对照品5.050mg，精密称定，置25m L容量瓶中，加流动相使溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；称取本品约1 g，精密称定，加5mL氨水、10m L水溶解后，用三氯甲烷（30，30，20，10mL）提取[4－5]，合并提取液，蒸干，残渣加流动相溶解并转移至10mL容量瓶中，摇匀，作为供试品溶液。按处方比例以相同工艺制备缺苦参碱的阴性样品，按供试品溶液制备方法制得阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

阴性干扰试验：取按2.2项下方法制备的供试品溶液、对照品溶液、阴性对照品溶液，按拟订色谱条件进样测定。结果，阴性对照品溶液色谱图中，在与苦参碱对照品溶液色谱相应保留时间处未出现色谱峰，表明处方中其他组分对苦参碱的测定无干扰。主峰分离度 R＞1.5，理论板数大于4 000，色谱图见图1。

线性关系考察：取按2.2项下方法制备的对照品溶液（含苦参碱0.202 g／L）适量，分别进样1，2，5，10，15，20μL，依法测定，以峰面积（Y）对进样量（X）进行回归分析，得回归方程 Y＝980 728X+11 958.0，r＝0.999 9 (n＝6)。结果表明，苦参碱进样量在0.202～4.040μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：取2.2项下方法制备的同一对照品溶液10μL，注入液相色谱仪，连续进样6次，依法测定。结果的 RSD为0.6%（n＝6），表明仪器精密度良好。

图1 高效液相色谱图

重复性试验：取同一批（批号为20150106）样品，按拟订方法测定含量。结果的 RSD为1．5%（n＝6），表明方法重复性良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，室温放置，分别于0，2，4，6，19，24 h时进样测定，记录峰面积。结果的 RSD为 0．5%（n＝6），表明供试品溶液在室温放置24 h内稳定。

加样回收试验：取已知含量的样品6份，分别加入一定量的对照品溶液，按供试品溶液制备方法制备溶液，依法进样测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 苦参碱加样回收试验结果（n＝6）

2．4 样品含量测定

取 3批样品（批号分别为 20150106，20141030，20140816），按拟订方法测定，计算含量。结果3批样品测定苦参碱平均含量为2．16mg／g，见表2。

3 讨论

提取时氨水加入量[6－7]：在样品提取时，分别尝试加入氨水1，5，10m L进行提取。结果加氨水5m L时，乳化现象最轻微，分层效果好，提取最完全，回收率达97%，故提取时加入氨水的量定为5mL。

表2 样品中苦参碱含量测定结果（n＝3）

提取次数选择：分别对提取3次（30，30，20 m L），4次（30，30，20，10m L），5次（30，30，20，10，10mL）后的溶液进行测定，结果表明，4次就已提取完全，故提取次数定为4次。

流动相选择[8－10]：对乙腈－0．1%磷酸溶液 －甲醇（76∶19∶5，三乙胺调节pH为8．0）和乙腈－水－乙二胺（45∶55∶0．05）2种流动相进行了对比，结果前者的主峰理论板数高，与各杂质峰的分离效果更好，故选择前者为流动相。

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R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)06－0057－02

么世英（1971－），女，主管药师，主要从事药品检验工作，（电子信箱）hhhtzyq＠sina．com。

2015－05－13；

2015－09－01)