硝苯地平缓释片含量测定及体外释药机理研究

刘壬通，陈惠文，潘雪刁，杨智承

（1．广东省惠东县妇幼保健院，广东 惠州 516300； 2．广东药学院，广东 广州 510006）

硝苯地平缓释片含量测定及体外释药机理研究

刘壬通1，陈惠文1，潘雪刁2，杨智承2

（1．广东省惠东县妇幼保健院，广东 惠州 516300； 2．广东药学院，广东 广州 510006）

目的 建立测定硝苯地平缓释片中硝苯地平含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法 色谱柱为Diamonsil C18柱（250 mm×4．6mm，5 m），流动相为甲醇－水（60∶40），检测波长为237 nm，流速为 1 m L／min，柱温为 30℃。结果 硝苯地平对照品溶液质量浓度在4．83～43．55 g／m L（r＝0．999 9）范围内与峰面积呈良好线性关系，精密度、重复性试验结果的 RSD分别为0．91%和1．46%(n＝6)，平均回收率为99．94%，RSD为0．74%(n＝9)。结论 该方法简便、快速、灵敏、重复性好，可用于硝苯地平缓释片的质量控制。

硝苯地平；缓释片；高效液相色谱法；含量测定；释放度

硝苯地平是第1代钙拮抗剂，是目前公认的安全有效的一线降压药物[1]。但治疗高血压的药物必须作用持久、效果稳定，而硝苯地平的持续作用时间较短，半衰期为4～5 h，一般常用量为每日2～3次[2－3]，且血药浓度波动大，会产生峰谷现象，引起较多不良反应。为减少用药次数，使用药更安全，可通过改变工艺，采用亲水凝胶骨架材料，根据水分透过骨架微孔进而缓慢释放药物的原理[4]，研制出硝苯地平缓释剂型，使药物平缓释放，达到理想效果。但2010年版《中国药典（二部）》并未对该缓释剂型含量的检测进行规定。为更好地控制和评价该剂型的质量，本研究中采用高效液相色谱（HPLC）法测定硝苯地平缓释片中硝苯地平的含量，并考察其体外释放行为，方法准确、灵敏度高、快速简便，现报道如下。

1 仪器与试药

仪器：Agilent1100 Series型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；UV－2450型紫外可见分光光度计（日本岛津公司）；80－2型离心沉淀机（上海手术器械厂）；AB265－S型分析天平（梅特勒托利多公司）。

试药：硝苯地平对照品（中国药品生物制品检定所，批号为100338－200502）；硝苯地平缓释片（广东环球制药有限公司，批号为 111003－2，120815－2，121010－1，规格为每片5mg）；甲醇（广州化学试剂厂，色谱纯），水为超纯水（美国Milipore公司），其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 含量测定

2．1．1 色谱条件[5]

色谱柱：Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：甲醇－水（60∶40）；检测波长：237 nm；流速：1m L／min；柱温：30℃；进样量：20μL。

2．1．2 溶液制备

对照品溶液：避光操作。精密称取硝苯地平对照品适量，置50m L棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度制成每1mL含20μg的溶液，摇匀，即得。

供试品溶液：避光操作，取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于硝苯地平10mg），置50mL容量瓶中，加甲醇适量，超声处理使硝苯地平溶解，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5m L，置50m L容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

阴性对照品溶液：按硝苯地平缓释片处方取处方中除硝苯地平外的其他辅料，按制备工艺制成阴性供试品，并依法制得。

2．1．3 方法学考察

检测波长选择：精密称取硝苯地平对照品适量，加适量甲醇溶解配制成20μg／mL的溶液，在210～400 nm波长范围内扫描，紫外扫描图谱见图1。结果在237 nm和233 nm波长处均有吸收峰，为提高检测灵敏度，最终选择 237 nm为检测波长。

图1 硝苯地平紫外吸收光谱图

专属性试验：分别取2.1.2项下硝苯地平对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液适量，按拟订色谱条件进样20μL，记录色谱图，见图2。结果，在供试品溶液相同色谱峰处，阴性对照品溶液无吸收峰，表明硝苯地平对测定结果无干扰，方法专属性强。

图2 高效液相色谱图

标准曲线制备：避光操作。精密称取硝苯地平对照品7mg，置25mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取0.4，0.9，1.8，2.7，3.6mL置25m L棕色容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，配制成每1mL含硝苯地平4.83，10.89，21.77，32.66，43.55μg的系列溶液。精密量取上述系列溶液各20μL注入高效液相色谱仪，按拟订色谱条件分别进样测定，记录色谱图。以硝苯地平质量浓度（C，μg／mL）为横坐标、峰面积（A）为纵坐标进行线性回归，得回归方程 A＝57.522C+22.987，r＝0.999 9(n＝5）。结果表明，硝苯地平对照品溶液质量浓度在4．83～43．55μg／m L范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液20μL，重复进样6次，测定峰面积。结果的 RSD为0．91%（n＝6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于0，1，2，6，12，24 h时进样 20μL，测定峰面积。结果的 RSD为1．02%(n＝6)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

重复性试验：取同一批样品，按2．1．2项下方法平行制备供试品溶液6份，分别进样20μL。结果的 RSD为1．46%（n＝6），表明方法重复性良好。

回收率试验：称取已知硝苯地平含量的供试品适量（约相当于硝苯地平7mg）9份，精密称定，置25m L棕色容量瓶中，分别加入硝苯地平对照品的量为80%，100%，120%各3份，加甲醇适量，超声处理使溶解，放冷，用甲醇稀释至刻度，精密吸取2mL置25mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过。按拟订色谱条件，进样20μL测定，计算回收率。结果见表1。

表1 硝苯地平回收率试验结果（n＝9）

2．1．4 样品含量测定

分别取3批硝苯地平缓释片，按2．1．2项下方法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，计算样品含量。结果批号为111003－2，120815－2，121010－1的样品中硝苯地平平均含量分别为101．91%，100．26%，100．06%（n＝3）。

2．2 体外释药机理研究

取本品，照2010年版《中国药典（二部）》附录ⅩD第二法的释放度测定法，采用第二法装置，以水（含1%的十二烷基硫酸钠）为释放介质，体积为900mL，转速为100 r／min，依法操作，分别于4，8，12，16，24 h时各取溶液5mL，并及时补充相同温度、相同体积的水，用0．45μm的滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液，按拟订色谱条件进样检测，计算不同时间的累积释放率。结果见图3。

图3 硝苯地平缓释片释放曲线（n＝6）

为更直观地描述硝苯地平缓释片的体外释药机理，根据上述释放度测定结果，分别用不同释放模型（零级方程、一级方程、Higuchi方程、Ritger－Peppas方程、Weibull方程）进行线性拟合。结果见表2。可见，硝苯地平缓释片的体外释药符合Weibull释放模型，呈两相释药，前期快速释药，后期缓慢释药。

3 讨论

硝苯地平遇光不稳定，易分解成硝基苯吡啶衍生物和亚硝基吡啶衍生物，为避免影响测定结果，在整个操作过程中需注意避光。

本方法采用甲醇－水（60∶40）为流动相，有效地使硝苯地平与上述2种分解产物得到分离，保证了结果的准确性。另外，本试验中曾试用不同的柱温进行测定，主峰保留时间和与分解产物的分离度基本无变化，但柱压变动较大，最后发现柱温为30℃时最佳。试验结果显示，用HPLC法检测硝苯地平缓释片中硝苯地平的含量，方法回收率高、精密度好、简便、稳定可靠，可有效控制本品的质量，为该剂型确立质量标准提供了可靠依据。

本研究的另一目的在于探索硝苯地平缓释片的体外释药规律，为其体内释药行为提供一定的理论依据。由表2可见，Weibull分布拟合的相关系数最大，说明该方程能很好地描述硝苯地平缓释片的体外释药特征。另外，Ritger－Peppas方程拟合的相关系数也较大，Ritger－Peppas方程变换前的形式为 Q＝ktn，其中 n为释放参数，是该方程中表征释放机制的特征参数。当n＜0.45时，药物释放机制为Fick′s扩散；当 n＞0.89时为骨架溶蚀；当0.45＜n＜0.89时，则为扩散和溶蚀的协同作用。比较上述拟合结果可知，溶出参数 n＝1.199 5，表明主药以骨架溶蚀方式释药。

表2 不同释药模型的拟合方程和相关度

[1]陈光亮，王滨燕，戴小华，等．控释硝苯地平对不同证型高血压病的降压疗效的研究[J]．时珍国医国药，2012，23（2）：421－423．

[2]段官平，李 霞，杨成之．硝苯地平对人体平滑肌的作用研究进展[J]．中国现代医生，2010，48（1）：12－13．

[3]凌 俐，王 东．缓释与控释硝苯地平对高血压患者的降压作用比较[J]．中国药房，2012，23（12）：1 116－1 117．

[4]唐东霞，陈洪轩，和 平．硝苯地平缓释片的研究[J]．中国现代药物应用，2007，1（4）：21－22．

[5]王志强，吴继禹，夏锦泉．RP－HPLC法测定硝苯地平缓释片中硝苯地平的含量及分解产物[J]．安徽医药，2007，11（2）：132－133．

Content Determ ination and Release M echanism of Nifedipine Sustained Release Tab lets

Liu Rentong1，Chen Huiwen1，Pan Xuediao2，Yang Zhicheng2
（1．Huidong Women and Children Hospital，Huizhouo，Guangdong，China 516300； 2．Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou，Guangdong，China 510006）

Objective To establish a method for the content determination of nifedipine in Nifedipine Sustained Release Tablets by HPLC．M ethods The chromatographic separation condition of determination was as follows：Diamonsil C18column（250 mm×4．6 mm，5μm）．The mobile phase consisted of methanol－water（60∶40）with the flow rate of 1．0 mL／min．The wave length of detection was 237 nm and the column temperature was maintained at 30℃．Resu lts The standard curve of nifedipine was linear within range of 4．83－43．55μg／mL（r＝0．999 9）．RSD of precision and reproducibility were 0．91% and 1．46%(n＝6)，respectively．Average of recovery was 99．94% with RSD of 0．74%（n＝9）．Conclusion The determination method of content by HPLC is simple，quick，sensitive，fine reproducibility，which could be used to control the quality of nifedipine sustained release tablets．

nifedipine；Sustained Release Tablets；HPLC；content determination；dissolution

R969.1；R972+.4

A

1006-4931(2016)06-0055-04

2015－08－13)