新白膜法与富浆法制备浓缩血小板的质量比较

杨丽美

(广州血液中心，广东广州510095)

新白膜法与富浆法制备浓缩血小板的质量比较

杨丽美

(广州血液中心，广东广州510095)

目的分析新白膜法与富浆法制备浓缩血小板的质量差异。方法将采集的40袋400ml全血随机分为两组：新白膜法制备组和富浆法制备组，对分离出的浓缩血小板进行红细胞混入量、pH值、血小板计数检测比较。结果新白膜法制备组血小板计数显著高于富浆法制备组，二者存在统计学显著性差异（P＜0.05），两种制备方法的红细胞混入量及pH值无显著性差异（P＞0.05）。结论新白膜法分离出的浓缩血小板质量优于富浆法分离出的浓缩血小板。

新白膜法；富浆法；浓缩血小板；质量

血小板的功能主要是具有生理性止血和促进凝血，血小板输注在预防或治疗血小板减少或血小板功能障碍引起的出血方面起着重要的作用[1]，常用于治疗因血小板减少或血小板功能减退导致的有出血倾向的患者[2]。近年来，血小板的制备方法有手工法和机采法两种，随着全自动血液成分分离机的推广应用，机采血小板的用量明显大于手工分离浓缩血小板[3]。通过对欧美地区目前输血状况的考察而知，大部分地区采用手工采集的血小板[4]，而我国大部分采血机构放弃使用手工采集血小板，对血液资源造成浪费。同时，国内多数血站存在机采血小板无偿捐献不足的现象，为满足临床用血需求，从全血中提取浓缩血小板的制备尤为重要。最近，临床实验研究表明，不同的血小板制备方法可能影响其输注后活性[5]。而制备浓缩血小板目前国内主要有新白膜法与富浆法。为优选制备方法，提高浓缩血小板的质量，我们通过实验将新白膜法制备浓缩血小板，与富浆法制备浓缩血小板进行质量比较，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料2016年4月选择广州血液中心采集的献血者400ml四联袋全血，并且血液的净重在（456±5）g者作为研究对象，共40份，分成2组。Sorval1．RE-12BP型离心机(美国杜邦公司)，r=29．72cm；Beckman Coulter血细胞计数仪(美国贝克曼公司)；400ml四联采血袋(广州费森尤斯公司)；血小板收集二联袋（四川南格尔生物科技有限公司），Compomat G4全自动血液成分分离机(德国费森尤斯公司)，分血夹板。

1.2 方法

1.2.1 新白膜法制备浓缩血小板(buffy coat，BC）⑴接驳：联接血小板收集二联袋于400ml四联袋全血上。⑵血液的初次离心和分离：将四联袋采集的新鲜(4~6h内)400ml全血，以2100g、12min、22℃为离心条件，进行重离心，离心后的血袋置于Compomat G4全自动血液成分分离机上，按照预先编制的程序，自动分离含血小板的血浆，分离完毕，机器自动将红细胞血浆热合封口。⑶将分离出的含血小板的血浆袋室温悬挂静置1~1.5h。⑷含血小板血浆进行第2次离心和分离：将静置后含血小板和空转移袋的二联袋，以400g、8min、22℃为离心条件进行轻离心（Sorval1．RE-12BP型离心机）。⑸用分血夹板通过虹吸法缓慢分离出上层血浆（含血小板），即为制备的浓缩血小板。

1.2.2 富浆法制备浓缩血小板（platelet rich plasma，PRP）⑴血液的初次离心和分离：将四联袋采集的新鲜(4~6h)400ml全血，以1076g、10min、22℃为离心条件，进行轻离心，离心后的血袋置于Compomat G4全自动血液成分分离机上，按照预先编制的程序，自动分离含血小板的血浆，分离完毕，机器自动将红细胞、血浆热合封口，进行2次离心。⑵富含血小板血浆的2次离心和分离：将含血小板和空转移袋的二联袋，以4036g、8min、22℃为离心条件进行重离心，离心后的二联袋置于Compomat G4全自动血液成分分离机上，按照预先编制的程序，进行自动分离，分去上层血浆（血小板在袋子下层中），分离完毕，机器自动热合含血小板的袋子，待血小板静置1h，此袋内容物即为制备的浓缩血小板。

1.2.3 血小板产品的检测按Beckman Coulter血细胞计数仪说明书提供的方法和配套试剂对血小板产品进行检测，检测内容包括：血小板计数，红细胞混入量、pH值等。

1.3 统计学分析用t检验，P<0.05有统计学意义。

2 结果

2.1 新白膜法与富浆法手工制备血小板的方法比较（见表1）

表1 两组制备血小板的方法比较

2.2 新白膜法与富浆法手工制备血小板的质量比较（见表2）

表2 两组制备血小板的质量比较

3 讨论

从表1及1.2方法中可看出，新白膜法是先重离心、用Compomat G4全血自动分离机分离白膜层、后轻离心，分离出血小板和剩下白膜，即第一次重离心后，由G4全血自动分离机按程序分出含血小板血浆的白膜层，血小板绝大部分集中在白膜层中，这是新白膜法血小板含量高的主要原因；第二次轻离心用分血夹板通过虹吸法缓慢分离出上层血浆（含血小板），主要是控制红细胞的混入。富浆法是先轻离心、再重离心分离出上层血浆，剩下血小板在血小板袋子下层中，即第一次轻离心后由用G4全自动血液成分分离机按程序分出含血小板血浆，因为轻离心，只分离出部分血小板在富含血小板的血浆中，还有一小部分仍留在红细胞中，分离不出来，这是富浆法法血小板含量较少的主要原因。

血小板计数是浓缩血小板质量评价的一个基本指标[6]，从表2可以看出，新白膜法分离的血小板计数明显高于富浆法的血小板计数，两者存在显著性差异（P<0.05）。新白膜法分离血小板与富浆法分离血小板相比，红细胞混入量无显著性差异（P>0.05）。保存期末期pH值的差异无显著性差异（P>0.05），即两种分离法的保存期末期pH值无差异【2012年国家标准：浓缩血小板质量控制项目和要求：⑴储存期末pH6.4~7.4。⑵血小板含量≥4.0× 1010个（来源于400ml，全血）。⑶红细胞混入量≤2.0×109个（来源于400ml，全血）】。

近年来，来自国外不同实验室的研究发现新白膜法制备手工血小板有很大的优势，其中Levin[7]等发现，新白膜法制备的手工血小板较富浆法有优势，Compomat G4全自动血液成分分离机分离血小板可实现自动化、标准化，并可以降低全血保存后微聚物的形成，降低了受血者发生肺部、脑部检塞的危险性，减少非溶血性输血反应的发生[8，9]，同时Compomat G4全自动血液成分分离机制备浓缩血小板，是全血离心后，将其从离心桶中轻轻取出，把主袋固定在血液分离机的悬挂板上，利用上下挤压板，通过探头B控制挤压速度（先快后慢），在多达16个探测器的探头A的探测识别血液分层界面下，把富含血小板的白膜层精确地分离开来。另外，独特设计的中隔板位于上下挤压板之间，启动后可以非常有效地隔离白膜层-红细胞界面，从而达到减少红细胞混入与血小板流失的双重效果[10]。

通过本次有限数量实验，结果显示：采用Compomat G4全自动血液成分分离机用新白膜法制备浓缩血小板是提高血小板计数的一种优化方法，值得血站系统推广应用，既能保证血小板质量，又可减少血液资源浪费，同时可缓解国内多数血站存在机采血小板无偿捐献不足的现象，以满足临床用血需求[11]。

[1]赵凤绵，王毅，张爱红，等．白膜层方法制备的汇集血小板和单采血小板对比研究[J]．河北医药，2013，35(1)：123-126．

[2]Smelov V，Krylova T，et al．Azithmmyein treatment follow-up：antibacterial susceptibilityof Chlamydia trachomatis in patients with chronic prostatitis[J].Ins Antimicrob Agents，2004，23：79-82．

[3]袁小玲，李文斌，熊春梅，等．优化手工制备浓缩血小板方法的应用[J]．实验与检验医学，2010，28(5)：493-494．

[4]Vassallo RR，Wagner SJ，Einarson M，et al.Maintenance of in vitro properties of leukoreduced whole blood-derived pooled platelets after a 24 hour interruption of agitation[J].Transfusion，2009，49 (10)：2131-2135.

[5]Heddle NM，Blajchman MA，Meyer RM，et al．A randomized Controlled trial comparing the frequency of acute reactions to plasmaremoved platelets and prestorage WBC-reduced platelets[J]. Transfusion，2002，42（5）：556-566．

[6]秦艳兰，刘景春，刘仁强，等．自动和手工制备浓缩血小板的质量评价[J]．实验与检验医学，2009，27(1)：33-34.

[7]Levin E，Culibrk B，Gyongyossy-Issa M，et al.Implementation of buffy coat platelet component production：comparison to plateletrichplasma platelet production[J].Transfusion，2008，48(11)：2331-2337.

[8]欧阳锡林，刘景汉，黄宁，等．悬浮红细胞保存过程中高浓度血小板一白细胞聚合物的形成及其预防措施[J]．解放军医学杂志，2002，27(12)：1096-1097．

[9]Li N，Goodall AH，Hjemdahl P．Efficient flow cytometric assay for platelet-leukocyte aggregates in wholeblood using fluorescence signal triggering[J]．Cytometry，1999，35(2)：154-161．

[10]赵晓霞，沈莉，李建民，等.Compomaster G4血液分离仪制备血小板质量评估[J]．河北医药，2010，32(16)：2276-2277.

[11]董长征，韦丽娟.两种不同方法制备混合少白手工血小板的比较[J]．医学理论与实践，2008，21（10）：1024.

R457.1+2，R193.3

A

1674-1129(2016)06-0804-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2016.06.039

2016-07-04；

2016-11-16)