中药热奄包对兔膝骨关节炎关节滑液CRP、IL-1、TNF-α的影响

吴红 王岚 朱业崇

(1.贵阳中医学院第二附属医院，贵州 贵阳 550003；2.贵阳中医学院，贵州 贵阳 550001)



中药热奄包对兔膝骨关节炎关节滑液CRP、IL-1、TNF-α的影响

吴红1王岚1朱业崇2

(1.贵阳中医学院第二附属医院，贵州 贵阳 550003；2.贵阳中医学院，贵州 贵阳 550001)

中药热奄包； 兔； 膝； 骨关节炎； C-反应蛋白; 白细胞介素-1; 肿瘤坏死因子-α

膝骨关节炎(KOA) ，又称增生性膝关节炎、退行性骨关节炎等，是一种以膝关节关节软骨的变性、破坏及骨质增生为病理特点的慢性关节病，膝关节肿胀疼痛、功能障碍甚至畸形为主要临床表现,现已成为严重影响中老年人生活质量的疾病之一[1]。因此,研究该病的治疗意义重大。已有研究[2]表明，KOA关节液中炎性介质对滑膜炎症的发展和软骨基质的破坏具有重要作用，而随着KOA病情的变化,关节液中的炎性介质的含量亦发生改变[3]。本研究旨在观察中药热奄包对兔膝骨关节骨液C-反应蛋白(CRF)、白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的影响。

1 材料与方法

1.1 实验材料 实验动物：新西兰大白兔60只，雌雄各30只，体质量(2.0±0.4) kg，一次性购置于贵阳市动物实验中心。动物分组：60只新西兰大白兔采用单纯随机方法分为对照组、治疗组、空白组,每组各20只。每天常规饲养,室温15～25 ℃，空气流通，定时喂食、自由饮水。实验药品：中药热奄包(附方：红花15 g、防风15 g、花椒10 g、艾叶20 g、伸筋草15 g、草乌20 g、桂枝10 g、川芎13 g、大血藤12 g、泽兰10 g、木瓜10 g、牛膝15 g、透骨草10 g、当归10 g、苏木10 g):贵阳中医二附院骨一科提供。木瓜蛋白酶:上海依赫生物科技有限公司生产，国药准字H20060802；；盐酸氨基葡萄糖片：江苏正大清江制药有限公司生产，国药准字H21060840；利多卡因、酒精、生理盐水:购于贵阳中医二附院药房。

1.2 主要试剂及仪器 CRP、IL-1、TNF-α试剂盒: 由贵阳市化学试剂批发公司一次性购入；电子天平(ME2355型，SARTORIUS公司)，系列可调节移液器及吸头、KDC-40低速离心机、快速混匀器、一次性无菌注射器、兔固定台、冰箱等,由贵阳中医学院实验中心提供。

1.3 方法 造模方法：适应性喂养7 d后,按照兔膝关节腔内注射木瓜蛋白酶造成骨关节病变模型的方法对所有动物进行造模。方法为:正常饲养1周后, 将所有兔子的右后肢膝前区剪毛、消毒后，将0.5%利多卡因注射到动物右后肢膝前区周围进行局部麻醉，待麻醉生效后,屈曲膝关节45°以髌骨下极髌腱外缘为进针点，向髁间窝方向进针，抵达股骨髁后后撤2 mm，向膝关节腔内注入1.6%木瓜蛋白酶溶液1 mL，分别于造模实验的第1，4，7天注射，共3次，每次剂量均为1 mL。术中注意尽量不刺激关节软骨及滑膜。于第3次注射完毕后，对60只大白兔右膝关节照射X线片，以确定获得稳定的退行性膝骨关节炎模型。给药方法：确定造模成功后，治疗组造模膝关节外敷中药热奄包(中药热奄包按照上述配方要求取量，置清水中浸泡12 h，煎煮20 min，将毛巾置于药液中浸渍待用),用浸渍药液的毛巾包裹造模关节表面,每日早晚各1次，30 min/次；对照组予以盐酸氨基葡萄糖片灌服，每日早晚各1次，1片/次；空白组造模后不给于任何特殊处理，仅常规饲养。

1.4 观测指标 经4周治疗后，所有兔子均在耳缘静脉处注射空气30 mL,快速处死后固定于解剖架上,造模膝关节快速消毒；切开造模膝关节，用生理盐水冲洗关节，收集冲洗液，用免疫组化方法检测各组冲洗液中CRP、IL-1、TNF-α的水平,将关节混合液置6 000 r/min离心8 min,吸出上清液约0.5mL,装入试管中,置-20 ℃低温冰箱保存待测。关节液的CRP、IL-1、TNF-α含量按试剂盒内说明书进行测定。

2 结 果

造模后的兔子均有精神欠佳,食量减少,部分出现跛行,未做特殊处理。造模3 d后精神、食量逐渐恢复。三组各数据均满足正态分布，且具有方差齐性，兔膝骨关节炎时，关节滑液中CRP、IL-1、TNF-α水平较高，可间接说明造模成功；通过不同方法治疗后，治疗组、对照组与空白组比较差异有统计学意义(P<0.05)，说明两种治疗方法均能降低兔膝骨关节炎关节液中CRP、IL-1、TNF-α含量，即能抑制关节液中的炎性因子；治疗组和对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)，可间接说明中药热奄包治疗兔膝骨关节炎具有明确的治疗作用。见表1。

表1 三组兔膝关节液中CRP、IL-1、TNF-α含量的比较

3 讨 论

KOA发病机理目前尚未清楚,一般都认为其与衰老、创伤、炎症、肥胖、代谢障碍、免疫异常和遗传等多因素的变化有关[4-5]。KOA临床发病率较高,目前对其治疗主要集中在药物镇痛、软骨修复及后期外科手术干预上,其治疗目前尚无特效的方法,只能治疗症状和延缓疾病的进程。因此,对本病的治疗已被医疗界所重视。已有研究[6-7]表明，随着KOA病情的加重,关节液中CRP、IL-1、TNF-α含量明显增加,显示出二者存在明显的相关性。实验中通过测定兔膝骨关节炎关节液中CRP、IL-1、TNF-α的含量来探讨中药热奄包对膝骨关节炎的治疗机制,同时利用关节液中CRP、IL-1、TNF-α含量的变化反映病情严重程度亦具有一定的研究价值，可作为下一步研究的重点。

目前中医药在治疗KOA上方法多种多样,如内服中药、中药外敷、针灸、针刀等。课题中选用的中药热奄包属于中医外治法中的中药外敷，因此具有中医外治法的毒副作用小、可长期使用等独特的优势而被广泛应用并取得较好的临床疗效。武钰等[8]通过中药热敷的方法治疗退行性膝骨关节炎,以外治之法、治内之病，取得满意的临床疗效。谭锐泉等[9]用中药熨烫外治法治疗膝骨关节炎60例，总有效率达到93.3%，其总有效率明显高于对照组的西药治疗且毒副作用小。

KOA属于中医的“痹症”范畴，中医认为“痹症”是由于“风寒湿三气杂致、合而为痹”，所以中医在治疗时主要是在于祛风除湿、温经散寒、活血化瘀、疏通经络止痛，研究中的中药热奄包由红花、防风、花椒、艾叶、伸筋草、草乌、桂枝、川芎、大血藤、泽兰、木瓜、牛膝、透骨草、当归、苏木组成。方中红花、花椒、大血藤、泽兰活血祛瘀消肿；木瓜、伸筋草舒经活络；防风、草乌、川芎、透骨草、花椒祛风散寒除湿止痛；桂枝、艾叶、大血藤温经通脉；牛膝、当归滋补肝肾；全方共奏祛风除湿、温经散寒、活血化瘀、疏通经络止痛之效。现代药理学研究[10]表明，红花、花椒、大血藤、泽兰能够明显的抑制血小板活性和血栓形成，；防风、川芎、草乌、透骨草、花椒中含有镇痛作用的挥发油成分和生物碱成分；木瓜、伸筋草有较强的抗菌作用；桂枝、艾叶、大血藤能加快机体血液循环的速度，从而起到活血化瘀的疗效；牛膝、当归可保护肾脏的功能，同时具有消炎镇痛的作用。外敷祛风除湿、温经散寒、活血化瘀、疏通经络止痛之中药热奄包,可能通过调节关节液中的变异的细胞因子、消灭多余的氧自由基而抑制炎症介质,进一步改善关节腔内微循环和代谢,减低骨内及关节内压力,促进关节积液吸收,保护关节软骨的退变过程,同时有利于关节软骨的修复,从而对KOA起到一定的治疗作用。

[1] 胥少汀,葛宝丰,徐印坎.实用骨科学[M].4版.北京:人民军医出版社,2014：1201-1202.

[2] 张延辉，高春阳，李少华.骨性关节炎患者退变软骨及滑膜组织中细胞因子的表达[J].中国组织工程研究，2013，17(37):6671-6675.

[3] 管兴发,董金波,王维山,等.骨关节炎患者血清及关节液中TNF-A与MMP-3含量及临床意义[J].青岛医药卫生,2013,40(1):9-12.

[4] 申延清，刘风霞，曹红，等.膝骨关节炎患者的临床表现及相关影响因素[J].中国组织工程研究与临床康复,2011,15(9)：1643-1646.

[5] 王伟，王坤正，党小谦，等.中老年膝骨关节炎发病的相关因素[J].中国临床康复,2006,10(44):15-18.

[6] 陈根强,许慧娟,汪志明,等.骨性关节炎患者中血清与关节液的炎性因子水平变化及意义[J].武汉大学学报,2014,35(1)：110-113.

[7] Largo R, Alvarez-Soria MA, Diez-Ortego I, et al. Glucosamine inhibits IL-1beta-induced NFKappa B acti-vation in human osteoarthritic chondrocytes[J] .Osteoarthritis Cartilage, 2003, 11 (4) : 290-298.

[8] 武钰,朱伟,张战行,等.中药湿热敷法治疗膝关节骨性关节炎[J].内蒙古中医药,2013,8(3)：41.

[9] 谭锐泉,彭力平.中药熨烫外治法治疗膝骨性关节炎伴滑膜炎60例[J].中国医药指南, 2013,11(20),287-288.

[10] 侯家玉，方泰惠.中药药理学[M].2版.北京:中国中医药出版社，200：121.

贵州省中管局课题(编号：QZYY-2014-035 )

R-332；R274.9

B

1000-744X(2016)11-1144-02

2016-06-20)