MDR1 C3435T基因多态性与胃溃疡患者治疗相关性分析

卜玲玲

(常州市中医医院消化内科，江苏 常州 213000)



MDR1 C3435T基因多态性与胃溃疡患者治疗相关性分析

卜玲玲

(常州市中医医院消化内科，江苏 常州 213000)

目的 分析MDR1 C3435T基因多态性与胃溃疡患者治疗的相关性。方法 回顾性分析2010年10月至2015年10月来我院就诊的胃溃疡患者共80名，其中Hp阳性患者47例，另选取80例健康体检者作为对照组，测定两组入选对象MDR1 C3435T基因多态性，比较不同基因型胃溃疡患者治疗后Hp阳性率和耐药率。结果 观察组(Hp阳性)患者3435TT基因型频率和T等位基因频率均明显高于观察组(Hp阴性)和对照组(P<0.05)；观察组(Hp阴性)患者3435TT基因型频率和T等位基因频率亦均明显高于对照组(P<0.05)。治疗后3435TT基因型患者Hp阳性率和耐药率均明显高于C3435T和CC3435基因型患者(P<0.05)。结论 MDR1 C3435T基因多态性与胃溃疡患者的治疗具有相关性，3435TT基因型患者较难根除Hp，耐药性较强。

胃溃疡； MDR1； 基因多态性； 3435TT基因型

胃溃疡是临床常见病和多发病，幽门螺杆菌(Hp)是引起胃溃疡发生的重要致病因子，根除Hp是治疗胃溃疡和预防胃溃疡复发的有效措施。无论胃溃疡是否处于活动期，都是根除Hp的主要指征[1]，三联疗法是目前临床根除Hp的常用手段，但由于耐药菌株的出现和患者依从性差等原因，耐药率呈逐年上升趋势。多耐药基因(MDR)通过作用于药物及其代谢物在细胞膜间的转运，降低细胞内药物浓度，影响药物疗效；P-糖蛋白是由MDR编码的能量依赖性膜蛋白，具有多个药物作用位点，PPI是其作用底物之一[2]；而研究发现，MDR1 C3435T基因多态性可影响MDR和P-糖蛋白的表达和功能。为论证MDR1 C3435T基因多态性与胃溃疡患者治疗的相关性，指导进一步临床工作，现将研究结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2010年10月至2015年10月来我院就诊的胃溃疡患者共80例，所有患者胃溃疡均经胃镜检查确诊，排除药物过敏、处于妊娠哺乳期、近1个月内接受过抗菌药物治疗及合并肝肾功能不全等器质性疾病的患者，其中Hp阳性患者47例，诊断依据快速尿素酶实验。80例胃溃疡患者，男43例，女37例，年龄23～67岁，平均(44.1±3.9)岁，病程4个月至11年，平均(3.7±2.2)年；另选取80名同期健康体检者作为对照组，男39名，女41名，年龄21～69岁，平均年龄(45.3±3.3)岁。本研究通过伦理委员会批准，所有入选者均签署知情同意书，两组患者年龄、性别、等比较差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 治疗方法 80例胃溃疡患者均给予三联疗法治疗，埃索美拉唑镁肠溶片(阿斯利康制药有限公司，国药准字H20046379)，20 mg/次，2次/d，阿莫西林胶囊(昆明贝克诺顿制药有限公司，国药准字H53021880)，1 000 mg/次，2次/d，克拉霉素分散片(哈药集团制药六厂，国药准字H20040311)，500 mg/次，2次/d。用药两周后，快速尿素酶实验复查Hp阳性胃溃疡患者Hp根除情况，药敏性试验分析所有患者耐药情况。

1.3 MDR1 C3435T基因多态性的测定 (1)DNA制备：所有患者抽取空腹肘静脉血2 mL，离心后取上清液，置于乙二胺四乙酸二钾抗凝管抗凝处理，采取日本TOYOBO磁珠法DNA提取试剂盒提取外周血白细胞DNA，置于-80℃冰箱低温保存。(2)DNA引物：5’-TGTTTTCAGCTGCTTGATGG-3’，5’-AAGGCATGTATGTTGGCCTC-3’；DNA探针：5’-TGCAGCAGATTGGTCCTGAAATAGTA-3’；限制性核酸内切酶：Sau3AI。(3)PCR扩增：采用PCR扩增仪，加入提取的模板DNA 2 μL，2×PCR缓冲液14 μL，正向引物2 μL，反向引物2 μL，共计20 μL混匀反应，42 ℃反向转录30 min，95 ℃预变性3 min，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，95 ℃变性30 s，反复循环扩增40个周期，72 ℃延伸5 min，退火过程中采用荧光定量PCR仪测定TapMan探针上的FAM荧光信号。(4)限制性核酸内切酶片段长度多态性分析：加入PCR扩增产物10 μL，引物1 μL，缓冲液2 μL，水17 μL，采用限制性核酸内切酶Sau3AI置于37 ℃水浴酶切消化；取酶切产物10 μL，置于3%琼脂糖凝胶负极端加样孔，溴酚蓝作指示剂，溴化乙锭作染色剂，于75 V电压下电泳处理30 min，置于紫外灯下，分析基因型。(5)根据基因型分析数据，采用Hardy-Weinberg平衡法分析研究对象是否具有代表性；等位基因频率计算：(2×纯合子+杂合子)/(2×受体人数)。

1.4 统计学方法 本临床统计结果采用SPSS19.0的统计软件进行统计处理,计数资料采用χ2检验，检验指标设为0.05，P<0.05时，差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 MDR1 C3435T基因酶切产物和PCR产物电泳分析 MDR1 C3435T基因PCR扩增后，经3%琼脂糖凝胶电泳分离，得到196 bp PCR产物(第5泳道)；PCR产物经Sau3AI酶切后，得到CC3435基因型133 bp和96 bp两个产物(第4泳道)，C3435T基因型133 bp、96 bp和16 bp三个产物(第3泳道)，3435TT基因型96 bp一个产物(第2泳道)；第1泳道为100 bp Marker。结果详见图1。

图1 MDR1 C3435T基因酶切产物和PCR产物电泳分析

2.2 两组入选对象各基因型频率及等位基因频率比较 两组入选对象MDR1 C3435T基因型频率和等位基因频率观察值与期望值相符，满足遗传平衡标准，研究对象具有代表性。观察组(Hp阳性)患者3435TT基因型频率和T等位基因频率均明显高于观察组(Hp阴性)和对照组，观察组(Hp阴性)患者3435TT基因型频率和T等位基因频率亦均明显高于对照组，统计学方法分析，P<0.05，差异具有统计学意义。见表1。

表1 两组入选对象各基因型频率及等位基因频率比较[n(%)]

2.3 不同基因型胃溃疡患者治疗后Hp阳性率和耐药率 47例Hp阳性胃溃疡患者经治疗后，3435TT基因型患者Hp阳性率明显高于C3435T和CC3435基因型患者(P<0.05)；80例胃溃疡患者经治疗后，3435TT基因型患者耐药率明显高于C3435T和CC3435基因型患者(P<0.05)。见表2。

表2 不同基因型胃溃疡患者治疗后Hp阳性率和耐药率[n/N(%)]

3 讨 论

胃溃疡是临床常见疾病，Hp是胃溃疡的重要致病因子，同时Hp也与胃癌的发生密切相关，目前，世界卫生组织已将Hp归为第一类致癌因子。Hp根除是胃溃疡治疗的关键，随着三联疗法在临床的广泛推广，其耐药性也日益凸显。有报道显示，MDR1基因多态性可通过改变P-糖蛋白生理活性[3]，影响药物在机体的正常转运，提高耐药性，本文旨在研究MDR1 C3435T基因多态性与胃溃疡患者治疗的相关性。

作为能量依赖性膜蛋白，P-糖蛋白是由第7号染色体上的MDR1基因编码[4]，具有调节细胞物质转运和跨膜运动的功能，可通过分解ATP供能，将底物泵出细胞外。表达于胃肠道、肝脏及血脑屏障等正常组织细胞表面，P-糖蛋白可将有害外源性物质泵出细胞外，起到保护细胞正常生理功能的作用[5]；表达于肿瘤细胞表面，P-糖蛋白可将抗肿瘤药物泵出细胞外，使肿瘤细胞具有耐药性。PPI也是P-糖蛋白的作用底物之一[6]，胃溃疡患者采用三联疗法治疗，药物进入细胞内发挥作用，而P-糖蛋白可通过分解ATP供能将PPI及其代谢产物泵出细胞外，细胞内药物浓度降低，Hp很难得以根除，机体耐药性增强。

本临床调查结果显示，观察组(Hp阳性)患者3435TT基因型频率和T等位基因频率均明显高于观察组(Hp阴性)和对照组，观察组(Hp阴性)患者3435TT基因型频率和T等位基因频率亦均明显高于对照组，Hp阳性胃溃疡患者机体抗原反应增强，释放大量炎症因子和细胞因子，级联反应导致炎症反应进一步加强，免疫系统紊乱，通过一系列病理生理变化，MDR1 C3435T基因发生突变，3435TT基因型频率和T等位基因显著上升[7]。同时，治疗后3435TT基因型患者Hp阳性率和耐药率均明显高于C3435T和CC3435基因型患者，同样证实了MDR1 C3435T基因多态性与胃溃疡患者治疗的相关性。

总之，MDR1基因多态性通过引起P-糖蛋白过表达，影响机体正常物质转运和药代动力学功能，使3435TT基因型患者Hp根除难度加大，耐药性进一步增强。

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Analysis relationship between MDR1C3435T gene polymorphism and the patients with gastric ulcer

BuLingling.

DepartmentofGastroenterology,ChangzhouCityChineseTraditionalMedicineHospital.Changzhou213000,China.

Objective To analyze the relationship between MDR1 C3435T gene polymorphism and the patients with gastric ulcer. Methods Retrospectively analyzed 80 cases of patients with gastric ulcer from October 2010 to October 2015 in our hospital, including 47 cases of Hp positive patients and 80 cases of healthy persons as control group. It was determinate MDR1 C3435T gene polymorphism of the two groups and Compared Hp positive rate and drug resistance rate of different genotype in patients with gastric ulcer. Results 3435TT genotype frequency and T allele frequencies in patients of observation group (Hp positive) were significantly higher than those of the control group (Hp negative) (P<0.05). And the 3435TT genotype frequency and T allele frequency in observation group (Hp negative) were significantly higher than that of the control group (P<0.05). After treatment, Hp positive rate and drug resistance rate of patients with 3435TT genotype were significantly higher than those of the patients with genotypes of C3435T and CC3435 (P<0.05). Conclusion The polymorphism of MDR1 C3435T gene is associated with the treatment of gastric ulcer patients. It is difficult to eradicate Hp of patients with 3435TT genotype, and the drug resistance is stronger.

Gastric ulcer； MDR1； Gene polymorphism； 3435TT genotype

R573.1

A

1000-744X(2016)11-1135-03

2016-08-24)