树莓根保肝作用的实验研究*

何长远，刘慧多，韩晓波，张 宇，张 梦，陈 晶

黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040

树莓根保肝作用的实验研究*

何长远，刘慧多，韩晓波，张 宇，张 梦，陈 晶△

黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040

目的：利用动物实验方法研究树莓根对肝脏的保护作用。方法：将小鼠随机分成模型组，空白对照组，联苯双酯组，树莓根水提物高、中、低剂量组，每组各10只。树莓根水提物高、中、低剂量组给药量分别为4.56、2.28、1.14 g/kg，联苯双酯组给药量为0.15 g/kg，给药体积均为20 m L/kg，每天早上7点灌胃给药1次，连续14天，模型组与空白对照组分别给予等体积生理盐水。实验第13天上午11点采用CcL4制备小鼠急性肝损伤模型，实验第14天上午11点，测定血丙氨酸转氨酶(A LT)和天门冬氨酸转氨酶(A ST)，测定一氧化氮(N O)的含量、肝丙二醛(M D A)的含量和超氧化物歧化酶(SO D)的活性。结果：树莓根水提取物各剂量组模型小鼠血清中A LT、A ST及肝匀浆中M D A的含量均降低，肝匀浆中SO D的含量均升高，与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。树莓根水提取物高、中剂量组模型小鼠血清中N O的含量，与树莓根水提取物低剂量组、模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。结论：树莓根对急性肝损伤小鼠的肝脏具有一定的保护作用。

树莓根；肝损伤；保肝作用

肝脏是糖类、蛋白质、脂肪3大物质代谢的主要场所，也是激素、药物、毒物灭活和解毒的主要场所，肝脏在体内发挥着重要的功能［1］。世界范围内每年有100多万人死于各种类型肝病。而肝损伤是造成肝病死亡的主要原因之一，因此防治肝损伤对于临床肝病的治疗具有重要意义［2］。我国民间有用树莓根煎汤服用治疗肝病的记载。本实验用树莓根水提取物对急性肝损伤小鼠进行干预治疗，研究树莓根对肝脏的保护作用，希望能够为中药新药治疗肝病提供有益的参考。

1 材料与方法

1.1 实验药物 树莓根(采自黑龙江省尚志市帽儿山)；联苯双酯滴丸(浙江万邦药业有限公司生产，批号：20130121)。

1.2 实验动物 昆明种小鼠，体质量25～30 g，雄性［购自黑龙江中医药大学实验动物中心，动物实验许可证号：SCXK(黑)2008004］。

1.3 实验试剂 丙氨酸转氨酶(ALT)和天门冬氨酸转氨酶(AST)试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司提供，产品批号：20130513，20130624)；一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)试剂盒(南京建成生物工程研究所提供，产品批号：20130625,20130629,20130717)；四氯化碳、无水乙醇、冰醋酸(北京化工厂提供，产品批号：20121206，20130123，20130312)。

1.4 实验仪器 722型紫外分光光度仪(上海棱光技术有限公司提供)；日立KY2000半自动生化仪(天津开元医疗设备有限公司提供)。

1.5 实验方法

1.5.1 供试药制备 将树莓根切割、晒干，加水连续煮2 h，溶液滤出，加水重复上一步骤，共3次。将所得滤液进行浓缩，干燥得到树莓根提取物。树莓根共3800 g，制备得388 g提取物，1 g提取物≈9.79 g生药。

1.5.2 分组和给药 将小鼠随机分成模型组，空白对照组，联苯双酯组，树莓根水提物高、中、低剂量组，每组10只，分别称重、编号、记录。树莓根水提物高、中、低剂量组给药量分别为4.56、2.28、1.14 g/kg，联苯双酯组给药量为0.15 g/kg，给药体积均为20 mL/kg，每天早上7点灌胃给药1次，连续14天，模型组与空白对照组分别给予等体积生理盐水。

1.5.3 模型制备 实验第13天上午11点开始造模，除空白对照组小鼠外，其余各组小鼠行腹腔注射0.6%CcL4溶液，注射量10 mL/kg，空白对照组小鼠腹腔注射生理盐水，注射量10 mL/kg，禁食不禁水。

1.5.4 标本采集及检测 实验第14天上午11点，所有小鼠眼球取血约1 mL，静置，离心机转速调至3 500 r/min，离心10分钟，分离出血清约0.3 mL，测定AST、ALT、NO的含量。小鼠取血后立即处死，快速取出肝脏，冰水浴制备匀浆，用于检测MDA的含量和SOD的活性。

1.6 统计学方法 数据采用SPSS 10.0统计分析软件处理，计量资料以(±s)表示，组间差异采用t检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对血清中A ST、A LT、N O的影响 与空白对照组比较，模型组小鼠血清中AST、ALT、NO含量明显升高，差异有统计学意义(P＜0.05)；与模型组比较，联苯双酯组和树莓根水提取物高、中、低剂量组小鼠血清AST、ALT含量均明显降低，差异有统计学意义(P＜0.05)；与联苯双酯组和树莓根水提取物低剂量组比较，树莓根水提取物高、中剂量组NO含量显著降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 树莓根对A ST、A LT、N O的影响(±s)

表1 树莓根对A ST、A LT、N O的影响(±s)

注：▲表示与空白对照组比较，P＜0.05；■表示与模型组比较，P＜0.05。

组别空白对照组模型组联苯双酯组树莓根低剂量组树莓根中剂量组树莓根高剂量组62.38±18.46 88.09±39.53▲86.40±33.24 80.41±19.03 71.29±15.14■64.22±20.74■只数10 10 10 10 10 10 A ST/(U·L-1) 65.92±16.59 258.02±38.49▲129.29±25.32■178.34±21.39■141.26±20.25■124.57±19.24■A LT/(U·L-1) N O/(μm ol·L-1) 12.94±6.31 376.45±35.12▲127.39±9.20■195.36±14.74■164.15±14.38■130.46±12.49■

2.2 对肝组织M D A、SO D的影响 与空白对照组比较，模型组小鼠肝组织中MDA含量显著升高，差异有统计学意义(P＜0.05)；SOD水平显著下降(P＜0.05)，差异有统计学意义(P＜0.05)。与模型组、联苯双酯组比较，树莓根水提取物高、中、低剂量组小鼠肝组织中MDA含量均显著降低，差异有统计学意义(P＜0.05)；SOD水平均显著升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

表2 树莓根对M D A、SO D的影响(±s)

表2 树莓根对M D A、SO D的影响(±s)

注：△表示与空白对照组比较，P＜0.05；*表示与模型组比较，P＜0.05。

组别 只数 M D A/(nm ol·m gprot-1) SO D/(U·m gprot-1)空白对照组模型组联苯双酯组树莓根低剂量组树莓根中剂量组树莓根高剂量组243.27±20.37 148.60±15.73△204.36±18.39*179.73±17.28*192.74±14.65*202.04±19.65*10 10 10 10 10 10 6.73±0.89 14.47±1.23△7.65±0.91*12.34±0.96*10.84±0.78*8.74±0.78*

3 讨论

大多数肝病ALT、AST的变化基本一致，转氨酶含量增高，表明肝细胞损害加重。本实验结果显示：与模型组相比，树莓根水提取物高、中、低剂量组ALT、AST均下降，差异有统计学意义。在LPS和某些因子诱导下，肝实质和非实质细胞大量生成诱导型NO合成酶(iNOS)，iNOS催化产生大量NO，通过多种机制导致肝细胞损伤或凋亡。有实验表明大鼠双后肢挤压伤诱导机体iNOS来源的N0生成增多，内源性NO介导了肝组织TNF-α和IL-1β基因表达上调，TNF-α和IL-1β参与急性肝损伤的发生［3-6］。本实验结果显示：与模型组比较，树莓根水提取物高、中剂量组小鼠血清中NO含量明显降低，树莓根具有一定的保肝作用。

MDA是一种脂质代谢终产物，可引起细胞损伤，因此通过测定MDA的含量，就可以反映出脂质过氧化的程度，从而间接反映出细胞损伤的程度［7-8］。SOD是一种重要的抗氧化剂，是清除生物体内自由基的重要物质，SOD可对抗自由基对细胞造成的损害，并可修复受损细胞［9］。本实验显示：树莓根水提取物高、中、低剂量组与模型组相比，MDA含量均显著降低，SOD水平均显著升高，说明树莓根能够通过减轻脂质过氧化反应、增强机体抗氧化功能而对肝脏起到保护作用。

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［4］ 董国凯，张晓彤，马丽琴，等.大鼠软组织挤压伤后N O对肝组织TN F-α和IL-1β基因表达的影响［J］.法医学杂志，2014，30(4)：250-252.

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Experimental Research on Protecting Liver of Raspberry Root

HE Changyuan,LIU Huiduo,HAN Xiaobo,ZHANG Yu,ZHANG Meng,CHEN Jing△
Heilongjiang University of Chinese Medicine,Harbin 150040,China

Objective:To study the effects of raspberry root on protecting liver in animals experiment.Methods: The mice were randomly divided into six groups,including the model group,blank control group,biphenyl dimethyl dicarboxylate(ddb)group,and high-dose,medium-dose and low-dose groups of raspberry root water extract,ten mice each group.The dose of each raspberry root water extract group was 4.56 g/kg,2.28 g/kg,and 1.14 g/kg respectively, but that of ddb group was 0.15 g/kg,and the volume of administration was 20ml/kg in all groups,which were given one time a day at 7 a.m for 14 days.And each of the model group and blank control group were given with saline of the same volume.At 11 o'clock a.m in the 13th day of the experiment,CCL4was used to prepare the model of mice with acute liver injury.What's mor，at the same time in the 14th day,the content of serum alanine aminotransferase (ALT),aspartate aminotransferase(AST),nitric oxide(NO)and hepatic malondialdehyde(MDA)in the mice as well as the activity of superoxide dismutase (SOD)in the liver homogenate were determined.Results:The serum ALT, AST and MDA contents of model mice in each of the water extract group decreased,but the SOD content increased. Compared with model group,there was statistical significance(P＜0.05).Furthermore,contrasted with low-dose groupof raspberry root water extract and model group,the NO content of model mice in both the high-dose and medium-dose groups reduced,there was statistical difference(P＜0.05).Conclusion:Raspberry root can definitely protect mice with acute liver injury.

raspberry root;acute liver injury;protecting liver

R285.5

A

1004-6852(2016)08-0021-03

2016-03-04

黑龙江省博士后科研启动金资助项目 (编号LBQ－10005)。

何长远(1987—)，男，博士研究生。研究方向：中医基础理论。

△通讯作者：陈晶(1964—)，女，博士研究生导师，教授。研究方向：中医治则治法机理研究。