Gankyrin在胃癌原发灶与转移灶表达差异研究

汪伟民 蔡炜龙 潘杰 许洪宝

Gankyrin在胃癌原发灶与转移灶表达差异研究

汪伟民 蔡炜龙 潘杰 许洪宝

目的 探讨Gankyrin在胃癌原发灶与转移灶中表达的临床意义。方法 选取112例胃癌患者手术切除的胃癌原发灶112例、转移灶43例，应用免疫组化染色方法，比较Gankyrin在胃癌原发灶与转移灶中的表达阳性率，并分析其与临床参数的相关性及对患者预后的影响。结果 Gankyrin在胃癌转移灶中的表达阳性率高于原发灶（P＜0.05）。胃癌患者原发灶中Gankyrin表达阳性率与肿瘤较低的分化程度、较晚的TNM分期及肿瘤转移均有关（均P＜0.05）。胃癌转移患者转移灶与原发灶中Gankyrin的表达呈正相关（r=0.58，P＜0.05）。胃癌患者及胃癌转移患者中Gankyrin表达阳性者的预后较差。结论 Gankyrin在胃癌原发灶及转移灶中的表达与胃癌恶性程度有关，在转移灶中的表达阳性率高于原发灶，对患者预后有一定的预测价值。

Gankyrin 胃癌 原发灶 转移灶 临床意义

胃癌为发病率与病死率均较高的消化道恶性肿瘤；我国更是胃癌高发区，大多数患者确诊时已为中晚期胃癌，并发生远处转移，失去根治手术机会，预后不佳。胃癌转移是多个基因相关的信号转导通路协同的结果，其分子机制一直是抗肿瘤治疗的研究热点。Gankyrin作为一种恶性肿瘤分子标志物被发现在宫颈癌[1]、乳腺癌[2]等肿瘤中高表达，且与肿瘤转移密切相关。但Gankyrin在胃癌组织中的表达情况及其与胃癌转移的关系尚未清楚；Gankyrin在胃癌原发灶与转移灶中表达的临床意义研究亦少见。本研究采用免疫组化染色方法，检测Gankyrin在胃癌原发灶与转移灶中的表达差异，探讨其临床意义，现报道如下。

1 对象和方法

1.1 对象 选取2010年3月至2012年3月在本院行手术切除治疗的胃癌患者112例，术前均未接受任何抗肿瘤治疗。其中男78例，女34例；年龄34~73（51.8± 14.2）岁；术中切除胃癌原发灶及可疑的转移灶。112例原发灶标本术后病理学检查均发现胃癌细胞，在可疑转移灶中发现胃癌细胞淋巴结转移38例，大网膜转移5例，即胃癌转移患者43例。患者术后随访3年，记录预后情况。

1.2 免疫组化染色 患者术中切除的胃癌原发灶及转移灶均经10%甲醛溶液固定，石蜡包埋、切片及HE染色；切片经HE染色观察发现有胃癌细胞后，同一蜡块再次切片、烘烤，经二甲苯脱蜡、不同浓度梯度乙醇溶液水化、柠檬酸缓冲液抗原修复及正常山羊血清抗原封闭后，在切片上滴加Gankyrin抗体（美国Santa Cruz公司，按1∶50稀释），室温下放置4h，冲洗3次，滴加山羊抗兔二抗（北京中杉公司），室温下静置30min后再冲洗3次，DAB显色、复染及封片。

1.3 结果判定 由2位副主任以上职称病理科医师阅片，按如下标准进行结果判定：细胞质或（和）细胞核染棕黄色或黄色为阳性，按光镜下观察到的着色强度计为0（无）、1（弱）、2（一般）、3（强）分；按着色细胞比例计为0（0%）、1（1%～25%）、2（26%～50%）、3（51%～75%）、4（76%～100%）分。两项相加0分为阴性，1～2分为弱阳性，3～5分为阳性，＞5分为强阳性。本研究中表达阳性包括阳性、强阳性。

1.4 观察指标 （1）比较Gankyrin在胃癌原发灶与转移灶中的表达阳性率；（2）分析胃癌转移患者转移灶与原发灶中Gankyrin表达的相关性；（3）分析Gankyrin在胃癌原发灶中的表达阳性率与临床参数（年龄、性别、胃癌分化程度、TNM分期、是否转移）的关系；（4）估计胃癌患者与胃癌转移患者的术后生存率。

1.5 统计学处理 应用SPSS19.0统计软件；计数资料以构成比表示，Gankyrin在胃癌原发灶与转移灶中表达阳性率比较采用χ2检验，在胃癌转移灶与对应原发灶中的表达相关性分析采用Spearman等级相关，在胃癌原发灶中的表达阳性率与临床参数的关系分析采用Kruskal-Wallis检验；采用Kaplan-Meier法估计胃癌患者及胃癌转移患者的术后生存率并绘制生存曲线，生存率的比较采用log-rank检验。

2 结果

2.1 Gankyrin在胃癌原发灶与转移灶中的表达情况比较 见图1、表1。

图1 Gank y r in在胃癌原发灶与转移灶中的表达（a：原发灶；b：转移灶；免疫组化染色，×400）

表1 Gank y r in在胃癌原发灶与转移灶中的表达阳性率比较[例（%）]

由图1可见，在原发灶中胃癌细胞质或（和）细胞核阳性着色，同样地，在转移灶中也阳性着色。由表1可见，Gankyrin在胃癌转移灶中的表达阳性率高于在原发灶中的表达阳性率（P＜0.05）。

2.2 43例胃癌转移患者转移灶与原发灶中Gankyrin表达的相关性 见表2。

表2 43例胃癌转移患者转移灶与原发灶中Gank y r in表达的相关性[例（%）]

由表2可见，43例胃癌转移患者转移灶与原发灶中Gankyrin的表达呈正相关（r=0.58，P＜0.05）。

2.3 112例胃癌患者原发灶中Gankyrin表达阳性率与临床参数的关系 见表3。

表3 112例胃癌患者原发灶中Gank y r in表达阳性率与临床参数的关系[例（%）]

由表3可见，胃癌患者原发灶中Gankyrin表达阳性率与肿瘤分化程度、TNM分期及转移均有关（均P＜0.05），而与患者性别、年龄均无关（均P＞0.05）。

2.4 胃癌患者及胃癌转移患者的术后生存情况 术后随访3年，胃癌患者及胃癌转移患者的术后生存曲线见图2。

图2 胃癌患者及胃癌转移患者的术后生存曲线（a：胃癌患者；b：胃癌转移患者；曲线由上至下分别为Gank y r in表达阴性、弱阳性、阳性、强阳性）

由图2可见，112例胃癌患者术后3年生存率为39.29%（44/112）；Gankyrin在胃癌原发灶中呈阴性、弱阳性、阳性、强阳性表达的患者术后3年生存率分别为66.67%（14/21）、57.69%（15/26）、26.09%（12/46）、15.79%（3/19），差异有统计学意义（P＜0.05）。43例胃癌转移患者术后3年生存率为30.23%（13/43）；Gankyrin在胃癌转移灶中呈阴性、弱阳性、阳性、强阳性表达的患者术后3年生存率分别为100.00%（3/3）、83.33%（5/6）、16.67%（4/24）、10.00%（1/10），差异有统计学意义（P＜0.05）。

3 讨论

肿瘤转移是患者病死的主要原因，由于胃癌转移涉及多基因参与、多种因素相关的信号转导通路调控及多步骤的恶性生物学过程，其发生机制尚不明确，尚有待进一步深入胃癌转移相关研究。Gankyrin又名p28GANK，作为一种重要的肿瘤恶性进展的分子标志物，其在肿瘤转移灶中表达的临床意义研究还不深入。

本研究分析了Gankyrin在胃癌原发灶与转移灶中的表达差异，结果发现其在转移灶中的表达阳性率高于在原发灶中的表达阳性率，这说明Gankyrin高表达的肿瘤细胞恶性程度越高。这也与肿瘤转移灶为高恶性生物学行为相一致，Gankyrin高表达会进一步促进胃癌细胞侵袭、转移能力，且发生转移的癌细胞脱离胃癌原发灶，其生存环境发生变化，新的生存环境因素同样会导致其高表达。

此外，本研究发现胃癌转移患者转移灶与原发灶中Gankyri的表达呈正相关。这可能是由于转移灶与原发灶的同源性，转移灶中的癌细胞由原发灶的脱离细胞定植并增殖、分化产生，因此转移灶中癌细胞基因表达与原始细胞具有一致性，但由于新的生长环境促使其表达增强，会使癌细胞更具有更强的侵袭、转移能力。

本研究还发现胃癌患者原发灶中Gankyrin表达阳性率与较低的肿瘤分化水平、较晚的TNM分期及肿瘤转移有关。这说明Gankyrin与胃癌恶性进展密切相关，可能是其发生、发展及转移的重要因素。这一结果也与Gankyrin在肝癌[3]、食管癌[4]、结肠癌[5]及胰腺癌[6]等的研究中相类似，进一步说明Gankyrin是一种重要的癌基因。

最后，本研究分析胃癌患者与胃癌转移患者术后生存情况，发现不管是在胃癌患者中还是在胃癌转移患者中，Gankyrin表达阳性均提示患者预后不良。这进一步说明Gankyrin对肿瘤细胞恶性生物学行为的重要性。Gankyrin能够增强MDM2泛素化水平，导致抑癌基因p53活性降低[7]，也可与Rb相结合并对其磷酸化，使Rb核外排失去抑制肿瘤生长的能力[8]。这些生物学行为与Gankyrin促进胃癌细胞增殖密切相关，也可通过PI3KAKT-HIF-1α信号转导通路促进肝癌转移[9]。

综上所述，本研究发现Gankyrin在转移灶中的表达阳性率高于原发灶，这对患者预后有一定的预测价值。

[1]Liu Y,Zhang J,QianW,etal.Gankyrin is frequently overexp ressed in cervicalhigh g rade d isease and is associated w ith cervical carcinogenesis and metastasis[J].PLoSOne,2014,9(4)：e95043.

[2]Gao L,Xie H,Dong L,et al.Gankyrin is essential for hypoxia enhanced metastatic potential in breast cancer cells[J].MolMed Rep,2014,9(3)：1032-1036.

[3]Fu X Y,Wang H Y,Tan L,et al.Overexp ression of p28/gankyrin in human hepatocellular carcinom a and its c linica l significance[J]. World JGastroenterol,2002,8(4)：638-663.

[4]Ortiz CM,Ito T,Tanaka E,eta l.Gankyrinoncop rotein overexp ression as a c ritical factor for tumor g row th in human esophagea l squam ous cell carcinoma and its c linical significance[J].Int J Cancer,2008,122(2)：325-332.

[5]Meng Y,He L,Guo X,etal.Gankyrin p rom otes the p roliferation of human panc reatic cancer[J].Cancer Lett,2010,297(1)：9-17.

[6]Tang S,Yang G,Meng Y,et a l.Overexp ression o f a novel gene gankyrin correlates w ith the m alignant phenotype o f colorectal cancer[J].CancerBiolTher,2010,9(2)：88-95.

[7]HigashitsujiH,Itoh K,Sakurai T,et al.The oncop roteingankyrin binds to MDM 2/HDM 2,enhancing ubiquitylation and deg radation ofp53[J].Cancer Cell,2005,8(1)：75-87.

[8]HigashitsujiH,Liu Y,Mayer R J,et al.The oncop roteinGankyrin negative ly regulates both p53 and RB by enhancing p roteasomal deg radation[J].CellCyc le,2005,4(10)：1335-1347.

[9]Fu J,Chen Y,Cao J,etal.p28GANK overexp ression accelerates hepatocellular carcinoma invasiveness and metastasis via phosphoinositol3-kinase/AKT/hypoxia-inducib lefactor-1αpathways [J].Hepatology,2011,53(1)：181-192.

Differential expression of gankyrin in primary and metastatic gastric cancer and its clinical significance

WANG Weimin,CAI Weilong,PAN Jie,et al.Department of General Surgery,Huzhou Central Hospital,Huzhou 313000，China

【 Abstract】 Objective To investigate the d ifferential exp ression of gankyrin in p rimary and metastatic gastric cancer tissues and its c linical significance. Methods Immunohistochem ical staining was used to detec t the exp ression of gankyrin in p rimary and metastatic gastric cancer tissue,and its c linical significance was analyzed. Results Higher exp ression of gankyrin in p rimary gastric cancer tissues was significantly associated w ith lower differentiation,advanced TNM stage and metastasis(P＜0.05).The exp ression of gankyrin inmetastases was significantly higher than that in p rimary tumor(P＜0.05),and significantly correlated with that in matched p rimary gastric cancer tissues(r=0.58,P＜0.05).Higher exp ression of gankyrin in both the p rimary tumor and metastases was associated with poor survivalof patients(P＜0.05). Conclusion Gankyrin is highly exp ressed in p rimary and metastatic gastric cancer tissues,which is c losely correlated w ith the degree ofmalignancy and poor p rognosis.

Gankyrin Gastric cancer Primary lesion Metastases Clinicalsignificance

2015-12-16）

（本文编辑：李媚）

313000 湖州市中心医院普外科

许洪宝，E-mail：xu hong b ao212@163.com