皮氏蛾螺和水泡蛾螺线粒体基因组及核糖体ITS2的比较研究

鲍 相 渤

( 辽宁省海洋水产科学研究院，辽宁省海洋水产分子生物学重点实验室，辽宁 大连 116023 )

皮氏蛾螺和水泡蛾螺线粒体基因组及核糖体ITS2的比较研究

鲍 相 渤

( 辽宁省海洋水产科学研究院，辽宁省海洋水产分子生物学重点实验室，辽宁 大连 116023 )

利用PCR技术分别扩增皮氏蛾螺和水泡蛾螺的线粒体全基因组以及核糖体第二转录间隔区ITS2，对所得序列进行了分析。结果表明，皮氏蛾螺和水泡蛾螺的线粒体基因组全序列长度分别为15 255 bp、15 265 bp，具有相似的碱基组成和AT含量，其基因排列顺序完全一致，蛋白质编码基因长度相同，两种螺的ITS2分别为340 bp和329 bp，一致性达83.6%。经比对发现，皮氏蛾螺和水泡蛾螺的线粒体基因组及ITS2序列与已知的新腹足目动物相似。利用线粒体全基因组和核糖体序列构建系统发育树，两种序列的分析均显示皮氏蛾螺和水泡蛾螺亲缘关系较近。

皮氏蛾螺；水泡蛾螺；线粒体基因组；ITS2；系统发育

皮氏蛾螺(Volutharpaperryi)和水泡蛾螺(Bucciniumpemphigum)属软体动物门、腹足纲、新腹足目、蛾螺科，前者隶属于涡蜀螺属，后者属于蛾螺属[1-3]。蛾螺科动物在中国南北沿海均有分布，但多年来的调查结果表明，皮氏蛾螺和水泡蛾螺均仅见于黄海北部[2,4-5]。这两种螺的足部可食用，价格相对于同科的香螺(Neptuneaarthriticacumingii)较为低廉且味道鲜美，近年来市场认可度逐渐增加。因此，有必要对这两种螺的宏观和微观基础信息进行探索、积累，进而在保护种质资源的前提下对其科学开发、合理利用。

国内的一些专著中已对皮氏蛾螺、水泡蛾螺的分类地位、形态和习性等进行了较为系统的描述[1-2,6]，也有学者先后开展了蛾螺科分类学研究[7-9]和系统学分析[10-12]。在分子生物学领域，有研究获得了蛾螺科一些种类的12S rRNA、16S rRNA、18S rRNA、28S rRNA、H3、COⅠ等基因的序列并以此为基础进行了系统分析[10-11,13]，但鲜见线粒体基因组全序列和核糖体ITS的报道。动物线粒体基因组DNA是核外遗传物质，在新陈代谢、疾病、衰亡过程中发挥重要作用，具有结构简单、母系遗传、进化速度快等特点，被广泛应用于物种鉴定、类群系统分析等研究[14-16]。ITS区是位于编码核糖体的18S rRNA、5.8S rRNA 、28S rRNA基因间的内转录间隔区，承受的选择压力较小，进化速度快，具有很高的可变性，因此近年来对ITS序列进行分析成为探讨近缘种类遗传关系的有效方法[17-19]。

相比单纯使用线粒体基因片段而言，用线粒体基因组全序列进行比较分析更为全面、更具说服力[20]，但线粒体DNA系母系遗传，具有一定的局限性，因此本研究结合线粒体和核糖体序列，比较分析皮氏蛾螺和水泡蛾螺的线粒体基因组全序列及核糖体ITS2序列基本信息，探讨其在系统发育分析中的应用，旨在为研究蛾螺科演化关系提供分子领域论证，亦为这两种螺的保护、开发和利用提供分子生物学理论基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料

本研究使用的皮氏蛾螺共6个个体，3个于2015年6月采自大连市长海县獐子岛，3个于2015年9月采自大连市长海县海洋岛；水泡蛾螺共5个个体，3个于2015年6月采自獐子岛，2个于2015年10月采自大长山岛，取足切成小块置于95%乙醇固定保存。

1.2 试验方法

1.2.1 DNA提取

试验时取固定的组织约50 mg，放入纯净水中漂洗去除乙醇，采用海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒[天根生化科技(北京)有限公司]，按说明书步骤操作提取基因组DNA。

1.2.2 引物设计和PCR扩增

使用无脊椎动物COⅠ扩增通用引物[21]COⅠF和COⅠR扩增皮氏蛾螺、水泡蛾螺的COⅠ基因片段(表1)。按照Takara LA Taq说明书的建议体系配制50 μL反应液，具体反应条件为：94 ℃ 2 min；94 ℃ 30 s，48 ℃ 30 s， 72 ℃ 1 min，30个循环；72 ℃ 10 min。琼脂糖凝胶电泳进行检测，凝胶成像系统显示产物约500 bp，委托生工生物工程(上海)有限公司克隆测序。对测序结果进行BLAST比对(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)，确定种后进行后续试验。

表1 皮氏蛾螺和水泡蛾螺序列扩增引物信息

根据GenBank(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank)已公布的皮氏蛾螺、水泡蛾螺线粒体COⅠ和16S rRNA部分序列，每个物种设计两对引物(表1)，采用两步法分别扩增COⅠ和16S rRNA基因间的长片段。按Takara LA Taq说明书建议体系配制50 μL反应液，PCR条件为：94 ℃ 3 min；94 ℃ 30 s，68 ℃ 9 min，35个循环；72 ℃ 10 min。经琼脂糖凝胶电泳检测，皮氏蛾螺和水泡蛾螺的PCR产物大小十分相近，COⅠ至16S基因间约5000 bp，16S至COⅠ基因间约10 000 bp，委托生工生物工程(上海)有限公司对PCR产物采用引物步移法测序。

采用通用引物BTS2F、BTS2R[22]扩增皮氏蛾螺和水泡蛾螺的ITS2片段(表1)。使用Takara La Taq并按说明书配制50 μL反应液，具体反应条件为：94 ℃ 2 min；94 ℃ 30 s，52 ℃ 30 s， 72 ℃ 1 min，35个循环；72 ℃ 10 min。琼脂糖凝胶电泳检测显示产物约500 bp，委托生工生物工程(上海)有限公司对PCR产物克隆测序。

所有样本均用于扩增ITS2片段，线粒体全序列的扩增和测定使用取自獐子岛的皮氏蛾螺、水泡蛾螺样本各1个完成。试验用引物由生工生物工程(上海)有限公司合成。

1.2.3 序列拼接及分析

结合已知的COⅠ和16S基因部分序列，利用Bioedit 7.0.1软件对测序所得的皮氏蛾螺、水泡蛾螺序列进行分析、辅助拼接，得到完整的线粒体基因组全序列。通过DNAMAN软件、ORF Finder(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/orfig.cgi)和tRNAScan-SE(http://130.235.46.10/ARWEN/)在线工具，加之在GenBank中与近缘物种线粒体基因组相比较，分析定位蛋白编码基因、rRNA基因和tRNA基因；用Mega 5软件统计计算序列的碱基组成、密码子使用情况，AT偏斜和GC偏斜分别根据公式(A-T)/(A+T)和(G-C)/(G+C)计算，DnaSP软件确定ITS2序列的核苷酸多样性参数。

1.2.4 系统发育分析

在GenBank中检索近缘序列，下载13个物种线粒体基因组全序列，与本研究得到的皮氏蛾螺、水泡蛾螺线粒体基因组全序列共同分析；下载8个物种的ITS2序列，与本研究得到的皮氏蛾螺、水泡蛾螺ITS2序列共同分析。用ClustalX 1.83软件进行比对，Phylip 3.695软件最大似然法构建系统发育树，分析皮氏蛾螺、水泡蛾螺与近缘种的系统发育关系。

2 结果与分析

2.1 线粒体基因组概况

皮氏蛾螺线粒体基因组全序列长度为15 255 bp(GenBank登录号：KT382829)，水泡蛾螺线粒体基因组全序列长度为15 265 bp(GenBank登录号：KT962044)，两者均为闭合环状分子，长度在已测知的软体动物线粒体基因组长度范围内。两者全序列长度非常接近，编码区长度完全相同，差异存在于非编码区。这两种蛾螺的线粒体基因组都包含了13个蛋白质编码基因、2个rRNA基因和22个tRNA基因(表2)，基因排列的顺序和位置与GenBank中公布的大多数新腹足目动物相同，除了8个tRNA基因外的其余基因都编码于H链。皮氏蛾螺与水泡蛾螺的线粒体基因组碱基组成也非常接近，4种碱基所占比例相仿(表3)。

注：Vp，皮氏蛾螺；Bp，水泡蛾螺. 表3同.

表3 皮氏蛾螺和水泡蛾螺线粒体碱基组成信息

2.2 蛋白质编码基因

皮氏蛾螺和水泡蛾螺的线粒体基因组各包含13个蛋白质编码基因：3个细胞色素氧化酶亚基基因(COX1、COX2、COX3)、7个NADH脱氢酶亚基基因(ND1、ND2、ND3、ND4、ND4L、ND5、ND6)、2个ATP合成酶亚基基因(ATP8、ATP6)、1个细胞色素b编码基因(CYTB)，编码区长度均为11 244 bp。皮氏蛾螺的13个蛋白质编码基因均以ATG作为起始密码子，水泡蛾螺除ND4基因外也均以ATG作为起始密码子；两种蛾螺的ND4L、ND4、ND5和ND3基因终止密码子为TAG，其余基因终止密码子均为TAA(表2)。

2.3 tRNA和rRNA基因

皮氏蛾螺、水泡蛾螺的线粒体12S rRNA位于tRNA-Glu和tRNA-Val间，长度分别为881、876 bp，16S rRNA位于tRNA-Val和tRNA-Leu间，分别为1357、1270 bp，2个rRNA基因一致性均超过90%(表2)。皮氏蛾螺和水泡蛾螺的线粒体基因组都含有22个tRNA基因，其中tRNA-Met、tRNA-Tyr、tRNA-Cys、tRNA-Trp、tRNA-Gln、tRNA-Gly、tRNA-Glu和tRNA-Thr位于L链上。tRNA-Ser缺少D臂，剩余的tRNA都能折叠成典型的三叶草二级结构。

2.4 ITS2核苷酸组成及序列分析

对皮氏蛾螺、水泡蛾螺ITS2的PCR产物的测序结果进行分析，比对近缘物种去除两端的5.8S和28S区域，发现不同采样地的同种螺ITS2序列一致性均达99.7%以上，未见片段插入或缺失。得到皮氏蛾螺ITS2序列340 bp，A、T、C、G 4种碱基的平均含量为14.4%、21.3%、34.2%、30.1%，共检测到3个多态位点，其中简约信息位点2个；水泡蛾螺ITS2的A、T、C、G平均含量分别为16.7%、22.2%、31.6%、29.5%，329个位点中共检测到2个多态位点，均为简约信息位点。取扩增线粒体全基因组的皮氏蛾螺、水泡蛾螺个体为例，两者ITS2序列一致性达83.62%，碱基组成较相似，GC含量(64.1%、61.1%)均明显高于AT含量(35.9%、38.9%)。

2.5 系统发育分析

基于线粒体基因组全序列和ITS2序列，分别采用最大似然法构建系统发育树，得到的系统进化拓扑结构与各物种的分类学地位基本一致。线粒体基因组全序列发育树中，以绵竹拟钉螺(Triculahortensis)和湖北钉螺(Oncomelaniahupensis)为外群，各超科的物种均形成了不同分支，皮氏蛾螺、水泡蛾螺与织纹螺科的Ilyanassaobsolete、Nassariusreticulatus和蛾螺科的Babylonialutosa、B.areolata聚到一起(图1)；在ITS2发育树中，以艳尖耳螺(Melampusluteus)为外群，各超科聚类清晰，皮氏蛾螺、水泡蛾螺与蛾螺属的B.striatissimum聚为一支(图2)。

图1 线粒体基因组全序列最大似然法系统发育树

图2 ITS2核苷酸序列最大似然法系统发育树

3 讨 论

在研究生物起源及进化研究领域，线粒体基因组发挥着很大作用[23]。对皮氏蛾螺和水泡蛾螺的分析表明，这两种蛾螺线粒体的基因组成、排列顺序与大多数新腹足目动物较为相似[24]，说明了线粒体基因组在进化上的保守性。关于海产软体动物的各项研究中，双壳贝类的相关报道更为详细、深入，其线粒体基因组的分析也更为成熟。在已公布的双壳纲贝类中，帘蛤目、珍珠贝目、贻贝目均有部分物种出现了线粒体ATP8基因的缺失，也有不同科、属间出现编码基因及tRNA基因排列顺序发生变化的情况[25]；本研究得到的皮氏蛾螺、水泡蛾螺，以及GenBank中检索到的新腹足目线粒体全基因组序列，均未发现缺少ATP8基因的情况，tRNA排列顺序也变化不大。有学者在比对海洋与淡水双壳类线粒体基因组结构后，认为海洋贝类ATP8基因的缺失有可能与其生存环境条件和能量代谢相关[26]，但现已公布线粒体全基因组的海洋新腹足目动物未出现ATP8基因缺失现象，推测该基因在一些双壳贝类中的缺失并非受环境影响，可能与进化有关。虽然目前腹足纲的线粒体基因组研究与双壳纲还有很大距离，但已知的序列亦提供了有价值的参考信息，对两个纲的具体进化和基因功能研究具有特殊意义。

后生动物中线粒体AT含量普遍高于GC含量[27]，本研究获取的皮氏蛾螺和水泡蛾螺也是如此，无论是基因编码区还是rRNA都表现出这个特征。两种蛾螺蛋白质编码基因密码子第3位的AT含量分别高达81.3%和84.1%，这一结果与很多海洋软体动物线粒体碱基组成相似，在巨牡蛎(Crassostrea)、竹蛏(Solen)等贝类中均有过报道[28-29]；而在ITS2的碱基组成上，GC含量则大于AT含量，均超过60%，这一高GC含量与双壳贝类中的文蛤(Meretrixmeretrix)、杂色蛤(Ruditapesvariegata)、西施舌(Coelomactraantiquata)等较为类似[30-31]。值得注意的是，水泡蛾螺线粒体ND4基因以GTG作为起始密码子，真核生物和原核生物里均出现过以GTG作为起始密码的情况，如鸡和一些鱼类的COⅠ基因、鼠的ND1和ATP8基因、果蝇的ND5基因等[32-34]，但目前海洋腹足类动物中尚未见类似信息。

通常认为动物线粒体呈母系遗传，且种内不同个体间存在序列差别，但线粒体基因组还存在着父系渗漏、双单亲遗传方式，少数贻贝目、蚌目、帘蛤目的双壳贝类中有过双单亲遗传的报道[35-38]。新腹足目动物线粒体基因组的研究中尚未发现特殊的遗传方式，为了在系统发育中提供更客观的信息，本研究同时引入了核糖体ITS2综合探讨。ITS序列具有较多变异，常被用来进行种的鉴别和近缘遗传分析，在水产软体动物的相关研究中，曾有学者将ITS序列应用到了鲍属(Haliotis)19个种的系统分类分析上[39]。基于线粒体全序列和核糖体ITS2序列，本研究构建的两个系统发育树拓扑结构基本符合形态分类学结论。笔者注意到，ITS2系统发育树中，水泡蛾螺与同为蛾螺属的B.striatissimum聚为一支，之后与涡蜀螺属的皮氏蛾螺聚到一起，可见新腹足目的分类研究中ITS2序列适用于种间及以上分阶亲缘关系的分析；而在线粒体系统发育树中，皮氏蛾螺、水泡蛾螺组成的分支与织纹螺科的动物组成小分支，然后才与蛾螺科的B.areolata、B.lutosa聚到一起，皮氏蛾螺虽与水泡蛾螺在分类上同科不同属，但其线粒体基因组全序列和ITS2序列的一致性都较高，皮氏蛾螺与B.areolata、B.lutosa的亲缘关系还需进一步考证。

软体动物的亲缘关系很复杂，其分类地位一直存在争议，由外部形态和解剖学特征组成的形态特征是确定其分类地位的重要依据[40]，近年来分子层面数据的开发则为系统发育、物种分类提供了新的参考，但与昆虫、脊椎动物相比，软体动物的研究比较落后，而腹足纲动物的许多数据还很缺乏，有效信息有待开发。

[1] 张玺，齐忠彦.中国经济动物志—海产软体动物[M].北京：科学出版社，1962：55-56.

[2] 张素萍.中国海洋贝类图鉴[M].北京：海洋出版社，2008：199-202.

[3] 张玺, 齐钟彦. 中国南海经济软体动物区系[J]. 海洋与湖沼, 1959，2(4)：268-275.

[4] 富惠光. 辽宁兴城沿海腹足类的研究[J]. 东北师大学报：自然科学版, 1983(1)：85-91.

[5] Zhang J L, Xiao N, Zhang S P, et al. A comparative study on the macrobenthic community over a half century in the Yellow Sea, China[J]. Journal of Oceanography, 2016, 72(2):189-205.

[6] 赵汝翼, 程济民, 赵大东, 等.大连海产软体动物志[M]. 北京：海洋出版社, 1982：63-64.

[7] 李凤兰，林民玉.中国近海蛾螺科的初步研究Ⅰ.唇齿螺属及甲虫螺属[J].海洋科学集刊, 2000(42):108-115.

[8] 周峥桢, 沈铭辉, 柯才焕,等. 不同群体东风螺属齿舌的比较[J]. 厦门大学学报：自然科学版, 2007, 46(增刊1):167-170.

[9] 田莹, 张素萍, 常亚青. 黄渤海区蛾螺的齿舌研究[J]. 海洋科学, 2009(10):54-58.

[10] Iguchi A, Ito H, Ueno M, et al. Molecular phylogeny of the deep-seaBuccinumspecies (Gastropoda: Buccinidae) around Japan: inter- and intraspecific relationships inferred from mitochondrial 16S rRNA sequences[J]. Molecular Phylogenetics and Evolution, 2007, 44(3):1342-1345.

[11] 董长永, 侯林, 隋娜,等. 中国沿海蛾螺科5属10种28S rRNA基因的系统学分析[J].动物学报, 2008, 54(5):814-821.

[12] Wang H X, Zhao J, Li D M, et al. Comparison of polysaccharides ofHaliotisdiscushannaiandVolutharpaampullaceaperryiby PMP-HPLC-MS(n) analysis upon acid hydrolysis[J]. Carbohydrate Research, 2015(415):48-53.

[13] Zou S M, Qi L, Kong L F. Additional gene data and increased sampling give new insights into the phylogenetic relationships of Neogastropoda, within the caenogastropod phylogenetic framework[J]. Molecular Phylogenetics and Evolution, 2011, 61(2):425-435.

[14] Mindell D P, Sorenson M D, Dimcheff D E,et al. Interordinal relationships of birds and other reptiles based on whole mitochondrial genomes [J] . Systematic Biology, 1999, 48(1):138-152.

[15] Kumazawa Y, Ota H, Nishida M, et al. The complete nucleotide sequence of a snake (Dinodonsemicarinatus) mitochondrial genome with two identical control regions[J]. Genetics, 1998, 150(1):313-329.

[16] Birky C W. The inheritance of genes in mitochondria and chloroplasts: laws, mechanisms, and models[J]. Annual Review of Genetics, 2001, 35(1):125-148.

[17] Zhu X Q, D′Amelio S, Paggi L, et al. Assessing sequence variation in the internal transcribed spacers of ribosomal DNA within and among members of theContracaecumosculatumcomplex (Nematoda: Ascaridoidea: Anisakidae)[J]. Parasitology Research, 2000, 86(6):677-683.

[18] Zhu X Q, D′Amelio S, Palm H W, et al. SSCP-based identification of members within thePseudoterranovadecipienscomplex (Nematoda : Ascaridoidea : Anisakidae) using genetic markers in the internal transcribed spacers of ribosomal DNA[J]. Parasitology， 2002, 124(6):615-623.

[19] Hillis D M, Davis S K. Ribosomal DNA: intraspecific polymorphism, concerted evolution, and phylogeny reconstruction[J]. Systematic Zoology, 1988, 37(1):63-66.

[20] Ingman M, Kaessmann H, Pääbo S, et al. Mitochondrial genome variation and the origin of modern humans[J]. Nature, 2001, 408(6813):708-713.

[21] Folmer O, Black M, Hoeh W, et al. DNA primers for amplification of mitochondrial cytochrome c oxidase subunit I from diverse metazoan invertebrates[J]. Molecular Marine Biology and Biotechnology, 1994, 3(5):294-299.

[22] 孙博, 张素萍, 王海艳,等. 几种海水贝类甲醛浸渍标本DNA的提取及rRNA基因ITS序列的扩增[J]. 海洋通报, 2004, 23(1):40-44.

[23] Saccone C, Giorgi C D, Gissi C, et al. Evolutionary genomics in Metazoa: the mitochondrial DNA as a model system[J]. Gene, 1999, 238(1):195-209.

[24] Cunha R L, Grande C, Zardoya R. Neogastropod phylogenetic relationships based on entire mitochondrial genomes[J]. BMC Evolutionary Biology, 2009, 9(4):210.

[25] 孟学平, 申欣, 赵娜娜,等. 双壳类线粒体基因组结构分析[J]. 水产科学, 2013，32(12):721-729.

[26] 宋文涛, 高祥刚, 李云峰,等. 双壳贝类线粒体基因组结构的比较[J]. 遗传, 2009, 31(11):1127-1134.

[27] Hong Y, Qi L. Complete mitochondrial DNA sequence ofCrassostreanippona: comparative and phylogenomic studies on seven commercialCrassostreaspecies[J]. Molecular Biology Reports, 2012, 39(2):999-1009.

[28] Ren J F, Liu X, Jiang F, et al. Unusual conservation of mitochondrial gene order inCrassostreaoysters: evidence for recent speciation in Asia[J]. BMC Evolutionary Biology, 2010, 10(1):99-111.

[29] 远洋, 李琪, 孔令锋. 大竹蛏和长竹蛏线粒体基因组的比较研究[J]. 中国海洋大学学报：自然科学版, 2013, 43(9):33-38.

[30] 孟学平, 高如承, 董志国,等. 蛤蜊科3种贝类16SrRNA基因片段及ITS2核苷酸序列分析[J]. 湛江海洋大学学报, 2006, 26(4):8-13.

[31] 刘相全, 包振民, 胡景杰,等. 几种帘形目贝类rDNA ITS序列的比较[J]. 高技术通讯, 2007, 17(4):435-440.

[32] Noack K, Zardoya R, Meyer A. The complete mitochondrial DNA sequence of the bichir (Polypterusornatipinnis), a basal ray-finned fish: ancient establishment of the consensus vertebrate gene order [J]. Genetics, 1996, 144(3):1165-1180.

[33] Zardoya R, Meyer A. The complete DNA sequence of the mitochondrial genome of a "living fossil," the coelacanth (Latimeriachalumnae)[J]. Genetics, 1997, 146(3):995-1010.

[34] 张方, 米志勇. 动物线粒体DNA的分子生物学研究进展[J]. 中国生物工程杂志, 1998(3):25-31.

[35] Curole J P, Kocher T D. Ancient sex-specific extension of the cytochrome c oxidase II gene in bivalves and the fidelity of doubly-uniparental inheritance[J]. Molecular Biology & Evolution, 2002, 19(8):1323-1328.

[36] Doucet-Beaupré H, Breton S, Chapman E G, et al. Mitochondrial phylogenomics of the Bivalvia (Mollusca): searching for the origin and mitogenomic correlates of doubly uniparental inheritance of mtDNA[J]. BMC Evolutionary Biology, 2010, 10(8):1-19.

[37] Korpelainen H. The evolutionary processes of mitochondrial and chloroplast genomes differ from those of nuclear genomes[J]. Naturwissenschaften, 2004, 91(11):505-518.

[38] Rawson P D, Hilbish T J. Evolutionary relationships among the male and female mitochondrial DNA lineages in theMytilusedulisspecies complex[J]. Molecular Biology and Evolution, 1995, 12(5):893-901.

[39] Coleman A W, Vacquier V D. Exploring the phylogenetic utility of ITS sequences for animals: a test case for abalone (Haliotis)[J]. Journal of Molecular Evolution, 2002, 54(2):246-257.

[40] Steiner G, Müller M. What can 18S rDNA do for bivalve phylogeny?[J]. Journal of Molecular Evolution, 1996, 43(1):58-70.

ComparisonofCompleteMitochondrialGenomesandITS2RegionsinWhelksVolutharpaperryiandBucciniumpemphigum

BAO Xiangbo

( Liaoning Key Laboratory of Marine Fishery Molecular Biology, Liaoning Ocean and Fisheries Science Research Institute, Dalian 116023, China )

In this study, we amplified the complete mitochondrial genome and ITS2 nucleotides in whelksVolutharpaperryiandBucciniumpemphigum. After the whelks were sequenced and assembled, the software Bioedit 7.0.1, Mega 5 and Phylip-3.695 were used to analyze the data. The complete mitogenome was 15 255 bp inV.perryiand 15 265 bp inB.pemphigumin length， similar in composition and AT content, and identical in gene order. The ITS2 sequences ofV.perryiandB.pemphigumwere 340 bp and 329 bp in length, with the identity of 83.6%. By comparison, both mitogenome and ITS2 sequences were found to be similar to most known Neogastropoda animals. Phylogenetic trees were constructed by the complete mitogenome and ITS2 sequences, showing a close relationship between the two species.

Volutharpaperryi;Bucciniumpemphigum; mitochondrial genome; ITS2; phylogenetic analysis

10.16378/j.cnki.1003-1111.2016.06.014

S917

A

1003-1111(2016)06-0686-07

2016-02-02；

2016-04-26.

国家科技基础条件平台建设运行项目(2012DKA30470-012).

鲍相渤(1983—)，女，助理研究员；研究方向：海洋生物分子生物学.E-mail: bobo_1325@126.com.