日粮亮氨酸水平与宫内发育迟缓对断奶仔猪肝脏抗氧化功能的影响

苏伟鹏,徐 稳,张 昊,应志雄,黄 强,何进田,张莉莉,王 恬

(南京农业大学动物科技学院,江苏南京 210095)



日粮亮氨酸水平与宫内发育迟缓对断奶仔猪肝脏抗氧化功能的影响

苏伟鹏,徐 稳,张 昊,应志雄,黄 强,何进田,张莉莉,王 恬*

(南京农业大学动物科技学院,江苏南京 210095)

研究日粮亮氨酸水平与宫内发育迟缓(IUGR)对断奶仔猪肝脏抗氧化功能的影响。挑选16头正常初生重(NBW)仔猪和16头IUGR仔猪,公母各半。仔猪于14日龄断奶,采用2×2因子设计,一半NBW与IUGR断奶仔猪饲喂基础日粮,剩余断奶仔猪饲喂添加0.35%亮氨酸的实验日粮,即4个处理组,每个处理组8个重复,每个重复1头仔猪。实验期为21 d。结果表明:与NBW断奶仔猪相比,IUGR断奶仔猪肝脏总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力显著降低,丙二醛(MDA)含量显著升高(p<0.05)。IUGR断奶仔猪肝脏线粒体锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)活力、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、还原型谷胱甘肽(GSH)含量较NBW断奶仔猪均显著降低(p<0.05)。另外,IUGR显著降低断奶仔猪肝脏核转录因子2(Nrf2)、超氧化物歧化酶1(SOD1)、超氧化物歧化酶2(SOD2)、谷胱甘肽过氧化物酶1(GPx1)mRNA表达量(p<0.05)。日粮添加0.35%亮氨酸可显著降低断奶仔猪肝脏MDA含量,显著提高SOD2 mRNA表达量(p<0.05)。高亮氨酸水平日粮可显著缓解IUGR介导断奶仔猪线粒体GSH含量降低与肝脏SOD2和GPx1 mRNA表达下调(p<0.05)。因此,日粮添加0.35%亮氨酸,可降低断奶仔猪肝脏脂质过氧化程度,一定程度缓解了IUGR对断奶仔猪肝脏抗氧化功能的不良影响。

亮氨酸,宫内发育迟缓,断奶仔猪,肝脏,抗氧化功能

宫内发育迟缓(intrauterine growth retardation,IUGR)是胎儿在母体子宫内发育障碍的总称,具体表现为胎儿初生重较低,各组织器官的生长发育出现一定程度的迟缓,遗传潜力未能得到充分发挥等[1-2]。流行病学研究发现,IUGR会导致胎儿成年后发生代谢综合征的风险升高,如肥胖症、2型糖尿病与高血压等[3]。这可能与IUGR损伤后代肝脏功能有关。肝脏是机体内重要的代谢器官,而诸多研究表明,IUGR可造成肝脏抗氧化功能受损,自由基产生增多,细胞氧化损伤加剧,最终导致代谢功能紊乱[4-5]。

亮氨酸(leucine,Leu)属于支链氨基酸,是机体的必需氨基酸之一。近年来,膳食蛋白质和某些氨基酸,特别是亮氨酸的临床应用,在膳食干预代谢性疾病方面已受到广泛关注[6]。亮氨酸作为一种新的营养信号分子,在蛋白质代谢、能量代谢、提高机体免疫力等方面具有重要作用[7-8]。同时,研究发现支链氨基酸作为食品添加剂具有潜在的抗氧化作用[9]。Katayama等[10]研究表明,支链氨基酸能够提高抗氧化酶的活力,增强抗氧化能力。Li等[11]发现,1.5%亮氨酸可减少高脂大鼠血清MDA含量,缓解脂质过氧化。

但有关亮氨酸缓解IUGR后代机体氧化应激方面的报道较少,特别是在出生后早期这一敏感阶段。猪和人在解剖学、生理学以及代谢特点方面均有较好的相似性,IUGR猪已被广泛应用于临床实验中,对于预防和治疗人类IUGR具有重要的参考意义[12]。因此,本研究以IUGR断奶仔猪为实验模型,探讨亮氨酸对IUGR断奶仔猪肝脏抗氧化功能的影响,为改善IUGR新生胎儿肝脏抗氧化功能提供新的方法,同时为亮氨酸在IUGR后代日常饮食中的应用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

L-亮氨酸(纯度98%) 美国Sigma-Aldrich公司;总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)试剂盒、过氧化氢酶(catalase,CAT)试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)试剂盒、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)试剂盒、谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase,GR)试剂盒、丙二醛(malondialdehyde,MDA)试剂盒、蛋白质羰基(protein carbonyl,PC)试剂盒、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)分型试剂盒、总蛋白定量测定(BCA法)试剂盒 南京建成生物工程研究所;Trizol、反转录试剂盒、SYBR® Premix Ex TaqTM定量试剂盒 日本TaKaRa生物科技股份有限公司。

匀浆机(Bio-Gen Series PRO 200) 美国PRO Scientific公司;台式高速冷冻离心机(5804R) 德国eppendorf公司;数显电子恒温循环水浴锅(HH-4) 常州国华电器有限公司;医用低温保存箱(DW-25L262) 青岛海尔特种电器有限公司;-80 ℃超低温冰箱(8925)，Real-Time PCR仪(QuantStudio®5) 美国Thermo Fisher Scientific公司。

1.2 实验设计

在体况相似、胎次接近、品种相同(长白×大白)的母猪所产的16窝新生仔猪(杜洛克×长白×大白)中,每窝各选择1头正常初生重(normal birth weight,NBW)仔猪((1.52±0.06) kg)和1头IUGR仔猪((0.87±0.04) kg),公母各半,分成NBW组和IUGR组。IUGR仔猪的挑选标准参照Xu等[13]的方法,计算平均初生重以及标准差,将初生重低于该猪场仔猪平均初生重2个标准差的仔猪定为IUGR仔猪。出生后12小时内分别寄养于体况相似、胎次相同的4头母猪,自然哺乳,母猪日粮满足NRC(2012)饲养标准[14]。所有仔猪于14日龄断奶,随后采用2×2因子设计,一半NBW与IUGR断奶仔猪饲喂基础日粮,剩余的NBW与IUGR断奶仔猪饲喂添加0.35%亮氨酸的实验日粮,即4个处理组,每个处理组8个重复,每个重复1头仔猪。实验期为21 d。日粮配制参照NRC(2012)猪的营养需要[14],日粮配方和营养水平见表1。

1.3 饲养管理

本实验所有实验猪饲养在环境卫生良好的猪舍中,实验猪均单栏饲养(1.0 m×0.6 m),自由采食和饮水。每天清扫和消毒猪舍,猪舍温度和相对湿度分别控制在25～28 ℃和50%～70%之间。仔猪的免疫按照猪场常规的免疫措施进行,饲养管理严格执行卫生防疫制度。

1.4 样品采集

实验结束时,在实验猪耳静脉注射戊巴比妥钠(50 mg/kg体重)麻醉后处以安乐死,迅速打开腹腔取出肝脏,并在相同部位选取5 g左右样本置于液氮速冻后于-80 ℃超低温冰箱保存。

1.5 测定指标及方法

1.5.1 肝脏匀浆液制备与指标测定 称取0.2 g左右肝脏组织样品,按照重量(g)∶体积(mL)=1∶9的比例加入预冷的生理盐水,冰水浴条件下机械匀浆,3000 r/min,离心10 min,取上清即10%肝脏组织匀浆液,放置于-20 ℃冰箱保存待用。肝脏线粒体的提取参考Tang等[15]的方法。BCA法测定蛋白浓度,严格按照产品说明书进行操作。肝脏组织匀浆液中T-SOD活力采用黄嘌呤氧化酶法测定[16];CAT活力采用钼酸铵法测定[17];GSH-Px活力和GSH含量采用2-硝基苯甲酸法测定[18];GR活力采用还原型辅酶Ⅱ法测定[19];MDA含量采用硫代巴比妥酸法测定[20];PC含量采用2,4-二硝基苯肼法测定[21]。肝脏线粒体中锰超氧化物歧化酶(Mn-superoxide dismutase,Mn-SOD)活性采用黄嘌呤氧化酶法测定[16],Mn-SOD活力为T-SOD活力与铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-superoxide dismutase,Cu/Zn-SOD)活力的差值;GSH-Px活性和GSH含量采用2-硝基苯甲酸法测定[18]。以上指标均严格按照产品说明书进行操作。

表1 日粮配方和营养水平

Table 1 The composition and nutrient content of diets

原料(%)基础日粮实验日粮营养水平(计算值，%)基础日粮实验日粮玉米40003965消化能(Mcal/kg)340340碎米15001500粗蛋白20202020发酵豆粕10001000钙085085去皮豆粕600600总磷070070血浆蛋白500500赖氨酸145145乳清粉700700蛋氨酸+胱氨酸079079鱼粉400400苏氨酸081081白糖450450色氨酸023023葡萄糖300300异亮氨酸074074豆油150150缬氨酸089089L-赖氨酸盐酸盐(98%)030030亮氨酸145180L-蛋氨酸015015L-苏氨酸020020L-色氨酸005005L-异亮氨酸005005L-缬氨酸005005L-亮氨酸000035食盐030030石粉110110磷酸氢钙080080预混料∗100100合计1000010000

注*:预混料为每kg全价料提供:维生素A,15000 U;维生素D3,3000 U;维生素E,150 mg;维生素K3,3 mg;维生素B1,3 mg;维生素B2,6 mg;维生素B6,5 mg;维生素B12,0.03 mg;烟酸,45 mg;维生素C,250 mg;泛酸,9 mg;叶酸,1 mg;生物素,0.3 mg;氯化胆碱,500 mg;铁,170 mg;铜,150 mg;碘,0.90 mg;硒,0.20 mg;锌,150 mg;镁,68 mg;锰,80 mg;钴,0.30 mg。

1.5.2 肝脏抗氧化相关基因mRNA表达量测定 从-80 ℃超低温冰箱中取出肝脏组织样品200～300 mg,采用Trizol溶液提取总RNA。检测所有样品RNA浓度和提取完整性,并用0.1%焦碳酸二乙酯(diethyl pyrocarbonate,DEPC)处理水将各样品RNA浓度调整一致。采用相同浓度的总RNA样品按照Takara反转录试剂盒说明书,加入总RNA 2.0 μL、20×RT Enzyme Mix 4.0 μL、Nuclease-free H2O 14.0 μL,按照下列条件进行反转录反应:37 ℃,15 min;85 ℃,5 s。反应结束后所得的cDNA原液用超纯水进行1∶4稀释。按照Takara SYBR® Premix Ex TaqTM定量试剂盒说明书进行操作,依次往定量PCR管中加入以下试剂(20 μL体系):cDNA 2 μL、SYBR Premix Ex Taq 10 μL、上游引物 0.4 μL、下游引物 0.4 μL、ROX Reference Dye 0.4 μL、超纯水 6.8 μL,混匀离心后在Real-time PCR仪上反应检测。反应程序如下:95 ℃ 10 min,95 ℃ 15 s,60 ℃ 45 s,重复40个循环。选择β-actin作为内参基因,利用2-ΔΔCt法对目的基因mRNA表达进行相对定量,将NC组基因mRNA表达量定为1,其余各组的基因mRNA表达量以相对于NC组基因mRNA表达量的比值得出。各目的基因引物序列见表2。

1.6 数据统计与分析

实验数据应用SPSS 16.0统计软件中的一般线性模型(general liner model,GLM)进行主效应(初生重和日粮亮氨酸水平)及互作效应的差异显著性检验。p值小于0.05时认为差异显著，p值介于0.05到0.10之间时认为有差异显著的趋势。当互作效应的p值小于0.05时，各处理组采用Duncan’s法进行多重比较。统计结果以平均值±标准误(means±SEM)表示。

2 结果与分析

2.1 Leu与IUGR对断奶仔猪肝脏抗氧化酶活性和GSH含量的影响

由图1可知,与NBW组相比,IUGR组仔猪肝脏中T-SOD活力显著降低(p<0.05),GSH-Px活力有降低趋势(p=0.086),CAT活力、GR活力和GSH含量均无显著差异(p>0.05)。与基础日粮组相比,添加0.35%亮氨酸有提高T-SOD活力的趋势(p=0.090),对CAT活力、GSH-Px活力、GR活力和GSH含量均无显著影响(p>0.05)。

表2 RT-PCR引物序列

Table 2 The primer sequences used in the real-time PCR

项目登录号序列(5′-3′)长度(bp)Nrf2NM＿0011851521F-GGACAGCAGAAGTGATCCCCR-CAAAACCGTATCACTGGCCG97SOD1NM＿0011904221F-AGGGAGAGAAGACAGTGTTAGTR-GTACACAGTGGCCACACCAT224SOD2NM＿2141272F-CAAGAAGGGGCACCACGTTR-CTCAGGGGACGCAAGAACTG70CATNM＿2143012F-TGTACCCGCTATTCTGGGGAR-TCACACAGGCGTTTCCTCTC119GPx1NM＿2142011F-CCTCAAGTACGTCCGACCAGR-GTGAGCATTTGCGCCATTCA85β-actinDQ8451711F-TCATGGACTCTGGGGATGGGR-GCAGCTCGTAGCTCTTCTCC273

图1 Leu与IUGR对断奶仔猪肝脏抗氧化酶活性和GSH含量的影响Fig.1 Effect of leu and IUGR on antioxidant enzyme activities and glutathione concentration in the liver of weaned piglets注:NC:NBW仔猪饲喂基础日粮,NL:NBW仔猪饲喂基础日粮添加0.35%亮氨酸,IC:IUGR仔猪饲喂基础日粮,IL:IUGR仔猪饲喂基础日粮添加0.35%亮氨酸;同行小写字母不同表示差异显著(p<0.05)。下同。

机体在正常的新陈代谢过程中会不断地产生活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS),但细胞内同时存在着清除ROS的抗氧化防御系统[22]。当细胞内ROS产生过多或清除ROS的能力降低时,会造成细胞氧化损伤,进而引起机体氧化应激[23]。本实验研究发现,IUGR断奶仔猪肝脏T-SOD活力显著下降,GSH-Px活力有下降趋势。T-SOD是清除ROS的金属酶,可特异性地捕捉体内生成的ROS[24]。GSH-Px同时分布于胞浆和线粒体中,负责清除有机氢过氧化物和过氧化氢[25]。何进田等[26]研究发现,IUGR导致哺乳仔猪肝脏SOD与GSH-Px活力降低。由此可见,IUGR仔猪可能会加剧肝脏氧化应激程度,降低机体抗氧化能力。本实验研究发现,通过日粮添加亮氨酸有提高IUGR断奶仔猪肝脏T-SOD的趋势。袁雪薇等[27]给高脂大鼠饲喂高浓度亮氨酸可提高肝脏T-SOD活力和GSH-Px活力,与本实验结果相似。

2.2 Leu与IUGR对断奶仔猪肝脏MDA和PC含量的影响

由图2可知,与NBW组相比,IUGR组仔猪肝脏中MDA含量显著升高(p<0.05),PC含量无显著差异(p>0.05)。与基础日粮组相比,添加0.35%亮氨酸显著降低仔猪肝脏中MDA含量(p<0.05),PC含量无显著差异(p>0.05)。

图2 Leu与IUGR对断奶仔猪肝脏MDA和PC含量的影响Fig.2 Effect of leu and IUGR on malondialdehydeand protein carbonyl concentrations in the liver of weaned piglets

研究发现,IUGR与氧化应激密切相关,易加剧机体脂质过氧化和蛋白质氧化的程度[28]。MDA是ROS作用于生物膜中的不饱和脂肪酸所产生的脂质过氧化产物,常用来表示机体内脂质过氧化程度和细胞的受损程度[29]。通过PC含量的测定可以反映机体蛋白质氧化损伤的情况[30]。本实验研究发现,IUGR断奶仔猪肝脏MDA含量显著升高。李博等[31]实验发现,23日龄IUGR仔猪肝脏MDA含量显著升高,与本实验结果基本一致。Kamath等[28]证实,IUGR新生胎儿氧化应激严重,导致MDA含量显著升高。本实验研究发现,通过日粮添加亮氨酸可显著降低肝脏MDA含量。另外,Li等[11]发现,1.5%亮氨酸可减少高脂大鼠血清MDA含量,与本实验结果相似。

2.3 Leu与IUGR对断奶仔猪肝脏线粒体抗氧化系统的影响

由图3可知,与NBW组相比,IUGR组仔猪肝脏线粒体中Mn-SOD活力、GSH-Px活力、GSH含量均显著降低(p<0.05)。与基础日粮组相比,添加0.35%亮氨酸有提高GSH-Px活力的趋势(p=0.087),对Mn-SOD活力和GSH含量均无显著影响(p>0.05)。GSH含量受初生重和亮氨酸互作效应的影响,日粮添加亮氨酸显著缓解了IUGR造成的线粒体GSH含量降低(p<0.05)。

图3 Leu与IUGR对断奶仔猪肝脏线粒体抗氧化系统的影响Fig.3 Effect of leu and IUGR on mitochondrial antioxidant system in the liver of weaned piglets

线粒体是细胞内氧化磷酸化以及形成ATP的主要场所,能为细胞的生命活动提供所需能量。同时,线粒体也是机体内源性ROS的主要来源,容易受到ROS的攻击。因此,线粒体在真核细胞的生存和凋亡中起着关键的作用[32-33]。Lee等[34]表明,线粒体功能损伤会降低肝脏抗氧化能力,使ROS含量增加。Park等[35]研究发现,IUGR会通过线粒体途径损害后代抗氧化系统,导致氧化应激。本实验中,IUGR断奶仔猪肝脏线粒体Mn-SOD活力、GSH-Px活力和GSH含量均显著降低。Mn-SOD特异性的存在于线粒体内[36],是生物体内重要的ROS清除剂。可见,IUGR肝脏线粒体氧化损伤是导致其氧化应激的另一重要因素。本实验研究发现,日粮添加亮氨酸改善断奶仔猪肝脏氧化损伤可能与缓解IUGR介导线粒体GSH含量降低有关。GSH是细胞内最丰富的非蛋白巯基化合物,在GSH-Px作用下负责清除细胞内的过氧化氢,参与体内ROS的代谢调节[37]。

2.4 Leu与IUGR对断奶仔猪肝脏抗氧化基因mRNA表达量的影响

由图4可知,与NBW组相比,IUGR组仔猪肝脏中Nrf2、SOD1、SOD2、GPx1 mRNA表达量均显著降低(p<0.05),CAT mRNA表达量差异不显著(p>0.05)。与基础日粮组相比,添加0.35%亮氨酸显著提高SOD2 mRNA表达量(p<0.05),有提高SOD1 mRNA表达量的趋势(p=0.084),对Nrf2、CAT、GPx1 mRNA表达量无显著影响(p>0.05)。SOD2、GPx1 mRNA表达量受初生重和亮氨酸互作效应的影响,日粮添加亮氨酸显著缓解了IUGR对SOD2、GPx1 mRNA表达的抑制作用(p<0.05)。

图4 Leu与IUGR对断奶仔猪肝脏抗氧化基因mRNA表达量的影响Fig.4 Effect of leu and IUGR on mRNA expressions of antioxidant genes in the liver of weaned piglets

为进一步研究其机制,本实验对抗氧化相关基因mRNA表达量进行测定,IUGR断奶仔猪肝脏Nrf2、SOD1、SOD2、GPx1 mRNA表达量显著降低。Yin等[38]研究发现,氧化损伤会造成新生仔猪Nrf2信号传导途径受损,导致抗氧化相关基因mRNA表达量下降及抗氧化酶活性降低。另有研究表明,IUGR降低断奶仔猪肝脏SOD1、GPx1 mRNA表达量[39-40]。上述研究与本实验结果基本一致。有研究报道,支链氨基酸提高抗氧化酶表达的机制可能与上调Keap1/Nrf2信号传导通路有关[10]。本实验中亮氨酸未显著影响Nrf2 mRNA的表达,其对Keap1/Nrf2信号传导通路的影响还需进一步的实验研究。Li等[11]研究发现,向高脂日粮模型大鼠长期饲喂1.5%亮氨酸可抑制高脂日粮造成的肝脏SOD2 mRNA表达量升高,并降低血清MDA水平,其机制可能与亮氨酸改善线粒体功能有关。D’Antona等[41]报道,日粮添加支链氨基酸可提高小鼠心肌与骨骼肌线粒体生物合成,降低ROS产生。SOD2编码线粒体Mn-SOD蛋白,其负责清除线粒体ROS。细胞抗氧化功能正常情况下,Mn-SOD表达受ROS水平的正向调节作用。而本实验中,日粮添加亮氨酸提高了断奶仔猪肝脏SOD2 mRNA的表达量,这与Li等[11]结果不同,说明亮氨酸对线粒体抗氧化酶表达的调节作用可能受物种、饲喂方式以及机体状态等因素的影响。Mn-SOD转录活性增强一定程度解释了日粮添加亮氨酸缓解IUGR断奶仔猪肝脏线粒体氧化损伤的作用机制。同时,高亮氨酸水平日粮可显著缓解IUGR介导断奶仔猪肝脏GPx1 mRNA表达下调,这可能与线粒体GSH含量升高导致的底物诱导效应有关。

3 结论

本实验结果表明,IUGR导致断奶仔猪肝脏MDA含量显著升高,抗氧化酶活性和相关基因mRNA表达水平降低。日粮添加0.35%亮氨酸可显著降低断奶仔猪肝脏MDA含量,并显著缓解IUGR介导断奶仔猪线粒体GSH含量降低与肝脏SOD2和GPx1 mRNA表达下调。上述结果提示,IUGR可导致断奶仔猪肝脏氧化损伤,破坏抗氧化防御系统;日粮添加0.35%亮氨酸可通过改善断奶仔猪肝脏抗氧化功能,缓解IUGR导致的肝脏脂质过氧化。本研究进一步丰富了亮氨酸在抵抗动物机体氧化应激方面的积极作用,也为建立IUGR胎儿早期营养策略提供新的思路与实验依据。

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Effect of dietary concentrations of leucine and intrauterine growth retardation on antioxidant function in the liver of weaned piglets

SU Wei-peng,XU Wen,ZHANG Hao,YING Zhi-xiong,HUANG Qiang,HE Jin-tian,ZHANG Li-li,WANG Tian*

(College of Animal Science and Technology,Nanjing Agricultural University,Nanjing 210095,China)

Toinvestigatetheeffectofdietaryconcentrationsofleucineandintrauterinegrowthretardation(IUGR)onantioxidantfunctionintheliverofweanedpiglets.Sixteennormalbirthweight(NBW)andsixteenIUGRnewbornpigletswereselected.Allpigletsweanedat14dofpostnatalageandfedeitheracontroldietoracontroldietsupplementedwith0.35%leucinefor21days.Therefore,one2×2factorialexperimentaldesignwasusedandeachgrouphadeightreplications,withonepigletperreplication.ComparedwithNBWpiglets,IUGRpigletshadlowertotalsuperoxidedismutase(T-SOD)activitywhereasincreasedmalondialdehyde(MDA)contentinliver(p<0.05).ThereweresignificantdecreasesintheactivitiesofMn-superoxidedismutase(Mn-SOD)andglutathioneperoxidase(GSH-Px),andthecontentofglutathione(GSH)inthehepaticmitochondrialofIUGRpigletsthanthoseintheNBWpiglets(p<0.05).Inaddition,IUGRdecreasedthemRNAexpressionlevelsofnucleartranscriptionfactor2(Nrf2),superoxidedismutase1(SOD1),superoxidedismutase2(SOD2)andglutathioneperoxidase1(GPx1)inliver(p<0.05).Dietarysupplementationof0.35%leucinesignificantlydecreasedMDAcontentbutincreasedSOD2mRNAabundanceinliver(p<0.05).AhigherleucineinclusionalleviatedthedecreasedmitochondrialGSHcontentandthedown-regulatedSOD2andGPx1mRNAabundancesinliver(p<0.05).Thus,dietarysupplementationof0.35%leucineattenuatesthehepaticlipidperoxidationinducedbyIUGR,whichmaybeassociatedwiththepartiallyimprovedantioxidantcapacityintheliverofpiglets.

leucine;intrauterinegrowthretardation;weanedpiglets;liver;antioxidantfunction

2016-04-05

苏伟鹏(1993-)，男，硕士研究生，研究方向：动物营养与饲料科学，E-mail：weipengsu@126.com。

*通讯作者:王恬(1958-)，男，博士，教授，研究方向：动物营养与饲料科学，E-mail：twang18@163.com。

国家重点基础研究发展计划(2012CB124703)。

TS201.4

A

1002-0306(2016)19-0345-07

10.13386/j.issn1002-0306.2016.19.059