猪血清中葡萄糖转运蛋白2发育性变化研究

杨雪梅，顾以韧，曾凯，陶璇，梁艳，杨跃奎，钟志君，陈晓晖，吕学斌

（1.四川省畜牧科学研究院，四川成都610066；2.动物遗传育种四川省重点实验室，成都610066）

遗传育种

猪血清中葡萄糖转运蛋白2发育性变化研究

杨雪梅1，2，顾以韧1，2，曾凯1，2，陶璇1，2，梁艳1，2，杨跃奎1，2，钟志君1，2，陈晓晖1，2，吕学斌1，2

（1.四川省畜牧科学研究院，四川成都610066；2.动物遗传育种四川省重点实验室，成都610066）

采用ELISA（酶联免疫吸附试验）方法检测了不同体重梯度的川藏黑猪配套系和杜长大猪血清中葡萄糖转运蛋白2的含量变化，并分析其与肌内脂肪含量的关系。结果表明：川藏黑猪在90 kg、110 kg和130 kg体重时血清中的葡萄糖转运蛋白2含量分别为56.33、54.51和54.28 μg/L，肌内脂肪含量分别为3.72%、4.41%和4.96%；杜长大猪血清中的葡萄糖转运蛋白2含量则分别为47.28、49.11和47.82 μg/L，肌内脂肪含量分别为2.00%、2.50%和2.61%，葡萄糖转运蛋白2相同猪种不同体重间和110 kg、130 kg体重不同猪种间差异均不显著，90 kg体重不同猪种间差异显著（0.01＜P＜0.05）。相关性分析显示，葡萄糖转运蛋白2与肌内脂肪含量呈极显著正相关（P＜0.01），提示葡萄糖转运蛋白2可能是通过血液来实现对猪肌内脂肪的整体调控。

川藏黑猪配套系；杜长大猪；肌内脂肪含量；葡萄糖转运蛋白2

葡萄糖是大多数生物获取能量的主要来源。维持血糖稳定对于哺乳动物的代谢和内环境稳定来说至关重要。所有组织中，尤其是大脑细胞，需要葡萄糖的持续稳定供应，如果血液中葡萄糖浓度过低就会引起惊厥，丧失意识等反应，严重的话可能引起脑部不可逆的损伤[1]。大多数的哺乳动物细胞通过协同扩散的方式来转运糖类，葡萄糖转运蛋白家族蛋白参与这一过程，它是一类介导葡萄糖摄取的膜蛋白。肌内脂肪含量是猪肉嫩度和食用品质的重要决定因素，猪肉产品中大部分的挥发性风味成分如直链醛、醇、烃和酮类也主要是由肌内脂肪加热时产生的[2]，是衡量猪肉品质的一个重要指标。

本研究以四川省畜牧科学研究院培育的优质猪配套系—川藏黑猪和瘦肉型的杜长大猪为研究对象，采用ELISA（酶联免疫吸附试验）方法测定其90 kg、110 kg和130 kg体重梯度时血清样本中葡萄糖转运蛋白2含量，并研究其含量与肌内脂肪含量的关系，以揭示不同猪种血清中葡萄糖转运蛋白2的发育性变化规律及其对肌内脂肪沉积的影响。

1 材料和方法

1.1 试验动物及采样

试验猪采用的川藏黑猪配套系以及外三元杜长大猪均由四川省畜牧科学研究院科研实验猪场提供，于2013年在四川省畜牧科学研究院科研实验猪场进行试验。随机挑选川藏黑猪和杜长大猪各12头（每个梯度4头），共计24头，设置90 kg、110 kg和130 kg 3个体重梯度。所有试验猪于同一时间开始组建群体，35日龄断奶，采用相同营养水平和饲喂方式，达到要求体重时进行屠宰，屠宰前停食24 h，自由饮水。采集前腔静脉血，室温放置15 min后离心10 min，吸取血清。采集倒数3～4肋骨间对应处的背最长肌样品进行肌内脂肪含量测定。

1.2 肌内脂肪含量测定

屠宰后采集倒数3～4肋骨间背最长肌样品10 g左右，样品处理和操作严格按照猪肌肉品质测定技术规范（NY/T 821—2004）进行，采用全自动快速索氏抽提仪（瑞士，Buchi）进行抽提，抽提仪程序设置为萃取2 h，淋洗5 min，干燥20 min。每个样品重复2次。

1.3 ELISA测定葡萄糖转运蛋白2含量

血清中葡萄糖转运蛋白2含量的测定严格按照猪葡萄糖转运蛋白2 ELISA试剂盒操作说明进行：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔和待测样品孔，在酶标包被板上标准品孔中准确加样50 μL，待测样品孔中先加样品稀释液40 μL，然后再加待测样品10 μL（样品最终稀释度为5倍），用封板膜封板后置37℃温育30 min，小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 s后弃去，如此重复5次，拍干。加入酶标试剂50 μL（空白孔除外），37℃温育30 min，再洗板5次后分别加入显色剂A和B各50 μL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 min后加终止液50 μL，终止反应（此时蓝色立刻转为黄色）。在加终止液后15 min内用450 nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值），每个样品做3个重复。以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

1.4 统计分析

运用Excel进行数据的统计分析，结果以平均数±标准误表示，均数间的比较用SPSS 13.1的TTest和Pearson Correlation程序进行显著性和相关性分析。

2 结果与分析

2.1 肌内脂肪含量

由表1可知，同一品种不同体重梯度间，肌内脂肪含量随着屠宰体重的增加而升高。川藏黑猪90 kg、110 kg和130 kg体重梯度时的肌内脂肪含量分别为3.72%、4.41%和4.96%，其中90 kg与110 kg梯度间肌内脂肪含量差异达显著水平（P＜0.05），与130 kg梯度间肌内脂肪含量差异极显著（P＜0.01），而110 kg与130 kg梯度间肌内脂肪含量差异不显著（P＞0.05）；杜长大猪90 kg、110 kg和130 kg梯度时肌内脂肪含量分别为2.00%、2.50%和2.61%，各体重梯度间肌内脂肪含量差异均不显著（P＞0.05）。相同体重梯度不同猪种间，90 kg和110 kg梯度时的两猪种间的肌内脂肪含量差异均达显著水平（P＜0.05），而130 kg梯度时两猪种间肌内脂肪含量差异极显著（P＜0.01）。

表1 川藏黑猪和杜长大猪不同体重梯度的肌内脂肪变化

2.2 葡萄糖转运蛋白2含量

由表2可知，川藏黑猪90 kg、110 kg和130 kg梯度时的葡萄糖转运蛋白2含量分别为56.33、54.51和54.28 μg/L，杜长大猪90 kg、110 kg和130 kg的葡萄糖转运蛋白2含量分别为47.28、49.11和47.82 μg/L，品种内不同体重梯度间差异均不显著（P＞0.05）。不同猪种间，葡萄糖转运蛋白2含量在90 kg体重梯度时均表现为川藏黑猪高于杜长大猪，差异显著（0.01＜P＜0.05），110 kg和130 kg体重间差异不显著。

表2 川藏黑猪和杜长大猪不同体重梯度的葡萄糖转运蛋白2变化

2.3 葡萄糖转运蛋白2水平与肌内脂肪含量的相关性分析

相关性分析表明，葡萄糖转运蛋白2水平与肌内脂肪含量的Pearson相关系数为0.584（表3），呈极显著正相关（P＜0.01）。

表3 葡萄糖转运蛋白2与肌内脂肪含量的相关性分析（n=4）

3 讨论

3.1 肌内脂肪含量对肉质的影响

肉质受很多因素的影响，其中肌内脂肪含量对肉的感官品质、加工品质、营养品质以及风味的影响较为显著，是肉质的重要决定因素之一。肌内脂肪在一定的含量范围内，肌肉中的脂肪越多，则肉的多汁性越好[3]。先前的研究表明，中国地方猪种与外种猪相比具有肉质优势一个重要原因就是肌内脂肪含量更加丰富，一般高出2个百分点左右[4]。而在不同猪肉的专家小组主观评定中，含有我国地方猪种血缘的杂种猪肉更加细嫩多汁、鲜香味浓，口感优于外种猪[5]。川藏黑猪配套系是四川省畜牧科学研究院采用现代遗传育种技术，利用国内外两类优质遗传资源培育而成的优质猪配套系。本研究结果显示两猪种的肌内脂肪含量均随体重的增加而升高，川藏黑猪配套系的肌内脂肪沉积能力显著高于杜长大猪，表明川藏黑猪配套系的口感和风味比杜长大猪更佳，肉质更好。

3.2 葡萄糖转运蛋白2含量对肌内脂肪沉积的影响

肌内脂肪沉积是反映猪肉质优良的一个重要指标，本研究就肌内脂肪含量与葡萄糖转运蛋白2的关系进行研究发现，猪血清中的葡萄糖转运蛋白2含量在相同猪种不同体重梯度间无显著差异，在不同猪种间，表现为川藏黑猪的葡萄糖转运蛋白2水平高于杜长大猪，在90 kg体重梯度时差异显著，110 kg、130 kg体重梯度时差异不显著，与此相对应的是川藏黑猪配套系的肌内脂肪含量高于杜长大猪，相关性分析表明，猪葡萄糖转运蛋白2水平与肌内脂肪含量呈正相关（P=0.584）。葡萄糖转运蛋白2对脂肪代谢具有重要的调控功能，无论体内或体外的试验均证明，血液循环中游离脂肪酸对葡萄糖刺激的胰岛素分泌有重要的作用，游离脂肪酸升高会增加葡萄糖刺激的胰岛素分泌，因此，葡萄糖转运蛋白2能间接反映猪肌内脂肪含量。我们推测川藏黑猪配套系和杜长大猪的肌内脂肪沉积受到血液中的葡萄糖转运蛋白2的调控，也说明猪肌内脂肪的沉积与其在血清中含量密切相关。

本研究通过对不同猪种血清中葡萄糖转运蛋白2水平的发育性变化及其与肌内脂肪沉积关系的研究，初步揭示了葡萄糖转运蛋白2可能通过血液完成对猪肌内脂肪沉积的调控，为深入研究猪脂肪沉积能力的形成机理提供了基础数据，并有助于促进对人类肥胖的研究。

[1]江诚，谢俊，陈海峰.葡萄糖转运蛋白的转运机制研究[J].基因组学与应用生物学，2015，34（7）：1372-1377.

[2]黄业传，贺稚非，李洪军，等.皮下脂肪和肌内脂肪对猪肉风味的作用[J].中国农业科学，2011，44（10）：2118-2130.

[3]陈国顺.子午岭野家杂种猪和合作猪肉质特性比较及风味挥发性成分的提取与分析[D].甘肃：甘肃农业大学，2004.

[4]张永泰.中国地方猪种的肉质优势[J].养猪，2003（2）：50.

[5]孙玉民，罗明.畜禽肉品学[M].济南：山东科学技术出版社，1993：300.

（编辑：郭玉翠）

午睡不宜超过40分钟

【俄罗斯连塔网3月24日报道】题：午睡超过40分钟对健康不利

午睡时间过长可能导致代谢综合征，例如胰岛素敏感性下降。美国医学研究人员将在第65届美国心脏病学会年会上通报上述研究结果。

午睡超过40分钟将大大增加与代谢紊乱相关的疾病的发病率，导致血压、血糖和胆固醇水平上升，使腰部更容易堆积脂肪。

医学专家通过对21次试验的结果进行综合分析，得出了白天过于疲倦或嗜睡与代谢紊乱有关的结论。这21次试验总计有307 237名亚洲人和欧洲人参加，是该领域全球范围内规模最大的一次研究。

专家们想知道试验参加者是否午睡、午睡时间多长，随后将收集到的数据与反映人体健康状况的医学资料（2型糖尿病和肥胖症等代谢综合征患者的病史）相比较。

结果显示，午睡时间与患代谢综合征的风险存在关联。午睡时间少于40分钟的人，患代谢综合征的几率较低；午睡时间超过1.5小时的人，患这类疾病的几率提高50%。（不过，午睡时间少于30分钟的人，患代谢综合征的几率降低得并不明显。）

本次研究并未发现午睡时长与肥胖之间有直接关联。但既然午睡时长与出现代谢综合征的风险有关联，而代谢综合征与肥胖有关联，这就意味着午睡时间过长可间接引起肥胖。

此前，医学专家也曾发现，午睡时间超过1小时会加大罹患心血管疾病和糖尿病的风险。

（转自参考消息[N]，2016-03-25）

The Research on Developmental Changes of Glucose Transporter Type 2 in Serum of Pigs

YANGXuemei1，2,GUYiren1，2,ZENGKai1，2,TAOXuan1，2,LIANGYan1，2,YANGYuekui1，2, ZHONGZhijun1，2,CHENXiaohui1，2,LVXuebin1，2
(1.Sichuan Animal Science Academy,Chengdu 610066,China; 2.Animal Breeding and Genetics Key Laboratory of Sichuan Province,Chengdu 610066,China)

Detect the glucose transporter type 2 content of Chuanzang Black Swine Hybrid and DLY pigs by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)and analyze its relationship with intramuscular fat content.The results showed that the glucose transporter type 2 content of Chuanzang Black Swine Hybrid of 90 kg,110 kg,130 kg bodyweight respectively were 56.33 μg/L,54.51 μg/L and 54.28 μg/L,and intramuscular fat content respectively were 3.72%,4.41%and 4.96%;glucose transporter type 2 content of DLY respectively were 47.28 μg/L,49.11 μg/L and 47.82 μg/L,and intramuscular fat content respectively were 2.00%,2.50%and 2.61%.There was no significant difference in different bodyweight of the same breeds and different breeds of the same bodyweight（110 kg,130 kg）of glucose transporter type 2(P＞0.05).There was significant difference of the different breeds of 90 kg bodyweight（0.01＜P＜0.05）.Correlation analysis showed that glucose transporter type 2 and intramuscular fat content had a significant positive correlation,which prompt glucose transporter type 2 may be achieved the overall regulation of intramuscular fat through blood.

Chuanzang Black Swine Hybrid;DLY;intramuscular fat content;glucose transporter type 2

S828

A

1002-1957(2016)03-0065-03

2016-04-20

四川省科技计划项目（2014NZ0092）；四川省基本科研业务费专项资金（SASA2013A03）；四川省基本科研业务费专项资金（SASA2013B02）；国家生猪产业技术体系-综合试验站（CARS-36）；四川省财政运行专项（SASA2014CZYX001）

杨雪梅（1981-），女，四川阆中人，助理研究员，硕士，研究方向为猪的遗传育种.E-mail：544859309＠qq.com

吕学斌（1965-），男，研究员，博士，研究方向为猪的遗传育种.E-mail：lvxuebin＠21cn.com