墨竹工卡和工布江达两县的川藏公路沿线藏猪流感病毒的血清学调查

马兴斌，吴金措姆，拉巴次旦，曾江勇

（1.西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所，西藏拉萨850009；2.甘肃农业大学动物医学院，甘肃兰州730070）

墨竹工卡和工布江达两县的川藏公路沿线藏猪流感病毒的血清学调查

马兴斌1,2，吴金措姆1，拉巴次旦1，曾江勇1

（1.西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所，西藏拉萨850009；2.甘肃农业大学动物医学院，甘肃兰州730070）

鉴于墨竹工卡和工布江达两县的川藏公路沿线是藏猪养殖较为密集区，为了解该地区藏猪流感病毒（SIV）的流行情况，采用抗体ELISA（酶联免疫吸附试验）和血凝抑制试验（HI）同时对墨竹工卡和工布江达两县的川藏公路沿线工卡镇、扎西岗乡、日多乡、加兴乡和金达镇5个乡镇藏猪的600份血清进行H1N1 SIV和H3N2 SIV抗体检测。结果显示，H1N1 SIV抗体检测分析，阳性血清共248份（41.33%）；H3N2 SIV抗体检测分析，阳性血清共90份（15.00%）；H1N1 SIV和H3N2 SIV混合感染抗体检测分析，阳性血清共59份（9.83%）。断奶仔藏猪和1岁以上藏猪的感染率均以海拔相对较低的加兴乡和金达镇为高。研究为墨竹工卡和工布江达两县的川藏公路沿线藏猪H1N1 SIV和H3N2 SIV的预防提供参考依据。

藏猪；流感病毒；血清学调查；ELISA；血凝抑制试验

猪流感病毒（Swine innuenza virus,SIV）在实验室里所分离出来的病毒，多被辨识为A型流感病毒，或者是C型流感病毒的亚种之一，是猪群中一种可引起地方性流行性感冒的正黏液病毒（Orthomyxoviruses）。可以造成猪急性和高度接触性呼吸道疾病，能够引起不同日龄及品种的猪感染发病[1]。

猪流感是猪体内因病毒引起的呼吸系统疾病。猪流感由A型流感[2]引发，通常暴发于猪之间，传染性很高但通常不会引发死亡。猪流感病毒有很多个不同的亚型，计有H1N1和H3N2等亚型的甲型流感病毒都能导致猪流感的发生。

自Guan（1996）等[3]从中国南方以及东南亚地区分离出类禽（Eurasian Avian-1ike,EA）H1N1 SIV以来，EAH1N1 SIV在亚洲地区猪群中广泛流行。证实有猪流感病毒在人际间传染的病例，其传播途径与季节性流感类似，通常是通过感染者咳嗽和打喷嚏等传染。猪呼吸道上皮具有2种流感病毒受体，能够同时感染人流感病毒和禽流感病毒。因此猪被认为是流感病毒的“混合器”，对新型流感病毒的形成起到重要作用。了解猪群中流感的疫情动态是人类流感防控的重要依据，具有重大的公共卫生学意义。

为调查墨竹工卡和工布江达两县的川藏公路沿线藏猪养殖较为密集区藏猪流感病毒的感染情况，笔者于2015年6月对上述两县的5个乡镇采集的600份血清样品进行了H1N1 SIV和H3N2 SIV的血清学检测。

1 材料与方法

1.1 参考毒株与主要试剂

猪流感病毒抗体（SIV Ab-H1N1、SIV Ab-H3N2）检测ELISA（酶联免疫吸附试验）试剂盒购自美国IDEXX公司，受体破坏酶（RDE）购自美国Sigma公司。

1.2 样品的采集

选择墨竹工卡和工布江达两县的川藏公路沿线工卡镇、扎西岗乡、日多乡、加兴乡和金达镇为采样点，采集被检藏猪非抗凝前腔静脉血液5 mL，共采样600份，标明样品采集时间、地点、编号，置于4℃冰箱保存、备用。

采样原则：每个采样点分别采集1岁以上藏猪（公母各半）非抗凝前腔静脉血液80头份，每头份5 mL；断奶仔藏猪（公母各半）40头份，每头份5 mL。

1.3 样品处理

将采集血液凝固后离心分离血清并标记，置-20℃保存，最后低温送实验室于-70℃保存备检。

1.4 检测方法与数据处理

为保证检测结果的准确性，同时对采集的600份血清样品做抗体ELISA检测和血凝抑制试验（HI）。

按照IDEXX公司的H1N1、H3N2猪流感病毒抗体ELISA检测试剂盒说明书对采集的600份血清样品进行抗体检测。

根据参考文献[4]通过血凝抑制试验（HI），对采集的600份血清样品进行血清学检测。为防止血清学检测中非特异性结果，采用RDE处理血清样品，去除血清中非特异性抑制因子。根据各株抗原病毒的血凝（HA）效价配制4个HAU（4单位抗原）。依据OIE标准血清学诊断手册说明进行HI试验，记录HI效价。阳性或阴性的临界值为1∶40，HI效价≥1∶40时，结果判定为阳性。

采用SPSS 13.0统计学软件，比较不同地区、不同年龄藏猪感染情况。

2 结果

2.1 墨竹工卡和工布江达两县的川藏公路沿线藏猪H1N1 SIV抗体检测结果

采用抗体ELISA和HI试验同时对墨竹工卡和工布江达两县的川藏公路沿线藏猪H1N1流感病毒抗体检测分析，阳性血清共248份（41.33%）。断奶仔藏猪以海拔相对较低的日多乡（32.50%）和金达镇（40%）为高；1岁以上藏猪以加兴乡（46.67%）和金达镇（54.17%）为高，见表1。

表1 墨竹工卡和工布江达两县的川藏公路沿线藏猪H1N1 SIV抗体检测情况

2.2 墨竹工卡和工布江达两县的川藏公路沿线藏猪H3N2 SIV抗体检测结果

采用抗体ELISA和HI试验同时对墨竹工卡和工布江达两县的川藏公路沿线藏猪H3N2流感病毒抗体检测分析，阳性血清共90份（15.00%）。断奶仔藏猪以海拔相对较低的金达镇（20.00%）为高；1岁以上藏猪以加兴乡（17.50%）为高，见表2。

表2 墨竹工卡和工布江达两县的川藏公路沿线藏猪H3N2 SIV抗体检测情况

2.3 墨竹工卡和工布江达两县的川藏公路沿线藏猪H1N1 SIV和H3N2 SIV混合感染抗体检测结果

采用抗体ELISA和HI试验同时对墨竹工卡和工布江达两县的川藏公路沿线藏猪H1N1 SIV和H3N2 SIV混合感染抗体检测分析，阳性血清共59份（9.83%）。断奶仔藏猪以海拔相对较低的加兴乡（15.00%）和金达镇（15.00%）为高；同样，1岁以上藏猪以加兴乡（11.25%）和金达镇（11.25%）为高，见表3。

表3 墨竹工卡和工布江达两县的川藏公路沿线藏猪H1N1 SIV和H3N2 SIV混合感染抗体检测

3 分析与讨论

实验室抗体检测同时进行抗体ELISA和HI试验，阳性数据基本一致。在此次调查中，H1N1亚型整体抗体阳性率（41.33%）明显高于H3N2亚型的（15.00%），差异显著（P＜0.05），且两种亚型混合感染率为9.83%。说明H1N1猪流感病毒可能是墨竹工卡和工布江达两县的川藏公路沿线藏猪中流行的猪流感病毒的主要亚型。共同感染使病毒发生重组的几率增加，因此藏猪猪流感病毒抗体共同感染阳性率也说明藏猪已成为流感病毒重组的潜在载体。

此次调查发现，对断奶仔藏猪和1岁以上藏猪，不论是H1N1亚型、H3N2亚型还是两者的混合感染率均以海拔相对较低且空气较湿润的加兴乡和金达镇为高，说明流感病毒与环境气候有一定关系。

由于猪流感病毒在人际间传染的病例，其传播途径与季节性流感类似，通常是通过感染者咳嗽和打喷嚏等传染。此次调查仅为摸底性，由于项目经费限制，暂时未能做具体不同年龄阶段藏猪和季节的动态学研究，特别是与旅游季节相关性分析。

此次调查采样时间为2015年6月，且采样地点不同于时新春（2013）[5]的林芝地区米林县和林芝县，亚型整体抗体阳性率均略低于时新春（2013）[5]抗体ELISA试验结果。

本次调查为骑行旅游人流量相对较多的川藏公路线，且为藏猪养殖较为密集的墨竹工卡和工布江达两县，结果为制定和实施有效的藏猪流感防控措施提供参考，并对西藏居民乃至全国人民H1N1 SIV和H3N2 SIV的防控具有十分重要的公共卫生学意义。

[1]Olsen C W.The emeerence of novel swine influenza viruses in Nonh America[J].Virus Res,2002,85(2):199-210.

[2]猪流感病毒[M/OL].http://baike.baidu.com/link?url=T_BGPv8 WXxbcLGh9TjXwKwXTczW9O IB8 t3OPm-Nv49O8QvI5xB8Q aFhyIB75NZTxPyGTUlpfMLFDqJPC7AVfpK.

[3]Guan Y,Shortridge K F,Krauss S,et al.Emergence of avian H1N1 influenza viruses in pigs in China[J].J Virol,1996,70(11): 8041-8046.

[4]何淑仪，马骏，方博，等.华南地区猪场猪流感和甲型H1N1/ 2009流感病毒的血清学调查[J].中国预防兽医学报，2015，37（9）：660-664.

[5]时新春.西藏林芝地区藏猪群6种传染病的血清学流行病学调查[D].西安：西北农林科技大学，2013.（编辑：柳青）

S858.285.3

A

1002-1957(2016)03-0123-02

2016-03-15

马兴斌（1984-），男，甘肃榆中人，助理研究员，在读博士研究生，主要从事高原动物疫病防控研究.E-mail：309528454@qq.com

曾江勇（1973-），男，湖南桃源人，研究员，博士，主要从事动物流行病学研究.E-mail：zengjiangyong@126.com