白芷总挥发油对大鼠佐剂性关节炎的影响

孙守坤 丛立新 郭环宇

(吉林省肿瘤医院中西医结合科，吉林 长春 130012)



白芷总挥发油对大鼠佐剂性关节炎的影响

孙守坤 丛立新1郭环宇

(吉林省肿瘤医院中西医结合科，吉林 长春 130012)

目的 探讨白芷总挥发油(EOAD)对完全弗氏佐剂(CFA)诱导大鼠佐剂性关节炎的治疗作用，并探讨其作用机制。方法 Wistar 大鼠随机分为空白对照组、模型组、地塞米松组(5 mg/kg)、EOAD低剂量组(70 mg/kg)和高剂量组(140 mg/kg)。除空白对照组外，各组大鼠足趾皮内注射CFA诱导佐剂性关节炎模型，于造模第15天起连续给药7 d，观察EOAD对大鼠体重、足肿胀及脏器指数的影响；检测佐剂性关节炎大鼠血清中肿瘤坏死因子(TNF)-α、前列腺素(PG)E2、一氧化氮(NO) 含量及一氧化氮合酶(NOS)活力。结果 与空白对照组比较，模型组大鼠体重增长缓慢，足肿胀明显，关节炎评分增加，胸腺和脾指数明显增加，血清中NO、PGE2和TNF-α含量及NOS活力均明显升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较，EOAD治疗可显著减轻佐剂性关节炎大鼠右后足的足肿胀(P<0.05)，降低关节炎评分，并使大鼠体重及脏器指数增加，同时明显降低血清中NOS活力和NO、TNF-α、PGE2 的含量(P<0.01)。结论 EOAD对大鼠佐剂性关节炎有显著抑制作用，其作用机制可能与降低血清炎症细胞因子TNF-α，PGE2水平及NOS活力有关。

白芷；佐剂性关节炎

风湿性关节炎、颈椎病、肩周炎、滑膜炎等疾病均属于无菌性炎症，发病率很高，严重危害人类的健康〔1〕。中医将无菌性炎症归属于“痹症”，在治疗上有悠久的历史，具有多层面、多靶点的独特优越性〔2〕。白芷为40种大宗常用药材之一，始载于《神农本草经》，性温、味辛，具有祛风止痛、排脓消肿之功效，主治感冒头痛、眉棱骨痛、鼻塞、鼻渊头痛、牙痛、风湿痹痛、疮疡肿痛等，是《中国药典》中出现频率最高，效果最好的中药抗炎镇痛药之一〔3〕。挥发油是白芷的主要有效成分。有研究证实，白芷总挥发油(EOAD)可通过降低疼痛模型大鼠脑干去甲肾上腺素(NE)含量，升高多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)含量，起到确切的镇痛作用〔4〕。但EOAD是否具有抗炎作用尚未见报道。本研究拟观察EOAD对炎症反应的抑制作用，并探讨其可能机制。

1 材料与方法

1.1 药品与试剂 EOAD(沈阳索福尔超临界萃取设备有限公司制备，川白芷饮片4 kg，粉碎过40目筛，经CO2超临界萃取，萃取条件：压力18 mPa，温度40℃，时间2 h，得EOAD 20 g)。完全弗氏佐剂(CFA，北京协和医科大学药物研究所提供)，地塞米松(河南润弘制药股份有限公司)，一氧化氮合酶(NOS)和一氧化氮(NO)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)，前列腺素(PG)E2和肿瘤坏死因子(TNF)-α ELISA检测试剂盒(北京碧云天生物技术研究所)。

1.2 仪器 PV-200足趾容积测量仪(成都泰盟科技有限公司)；Infinite M200TECAN酶标仪(瑞士TECAN集团公司)；ESJ110-4B电子分析天平(沈阳龙腾电子有限公司)；MH-2微量振荡器(海门市其林贝尔仪器制造有限公司)；低温离心机(美国Thermo公司)。

1.3 动物 雄性Wistar大鼠，体重(170±10)g，长春市亿斯实验动物技术有限责任公司提供，动物合格证号：SCXK(吉)：2012-0005。实验前，大鼠适应性喂养1 w，选择活动正常和状态良好的鼠纳入实验，分笼饲养，饲养室温度控制在18℃～22℃，湿度40%～60%，自由饮食饮水，3 d更换1次无菌垫料。

1.4 大鼠佐剂性关节炎模型制备及给药 40只Wistar雄性大鼠随机分为空白对照组、模型组、地塞米松组、EOAD低、高剂量组。除空白对照组大鼠外，其余四组大鼠右后足底部常规消毒，皮内注射CFA 10 mg/ml，0.1 ml/只，诱导大鼠佐剂性关节炎模型。于造模后第15天，地塞米松组大鼠给予5 mg/kg地塞米松皮下注射，EOAD治疗组大鼠分别给予EOAD 70 mg/kg和140 mg/kg灌胃，而空白对照组及模型组大鼠分别给予等体积蒸馏水灌胃，连续用药7 d。

1.5 关节炎的评价 造模前后、治疗前后仔细观察大鼠足部肿胀情况、活动情况、体毛的色泽、神志及进食情况的动态变化。与此同时，每3 d测量1次大鼠体重及大鼠右足足爪容积(ml)。足肿胀度计算：足肿胀度(ml)=致炎后致炎侧后足容积(ml)-致炎前同侧后足容积(ml)。

1.6 血清中NO，PGE2，TNF-α含量及NOS活性的检测 造模后第24天，末次测量足爪容积后，各组大鼠以乌拉坦(100 mg/kg)腹腔注射麻醉，腹主动脉取血并处死。每只大鼠约取血4～5 ml，分离血清，用于检测NO、PGE2、TNF-α含量及NOS活力。血清NO含量及NOS活力检测采用酶法，PGE2和TNF-α含量采用ELISA方法，具体检测方法参照试剂盒说明书进行。

1.7 统计学方法 应用SPSS13.0软件，多组间比较用单因素方差分析(One Way ANOVA)，两组间比较采用最小显著差(LSD)t检验。

2 结 果

2.1 EOAD对佐剂性关节炎大鼠体重的影响 造模前各组大鼠体重无显著性差异，空白对照组大鼠随着时间的增长体重呈现持续稳定增长的趋势。与对照组相比，模型组大鼠在注射CFA后体重增长缓慢，并于第12天体重(234.86±11.36)g低于对照组〔(248.71±11.27)g，P<0.05〕。与模型组相比，EOAD 给药组可不同程度地增加关节炎大鼠体重，于第18天(即给药后第4天)体重高于模型组(P<0.05)。地塞米松组大鼠体重明显下降，低于空白对照组和模型组(P<0.01)。见图1。

2.2 EOAD对佐剂性关节炎大鼠足肿胀的影响 各组大鼠右后足容积在造模前(0 d)没有明显差别，从注射CFA后第3天起，各组大鼠右后足即有明显肿胀，说明大鼠原发性足肿胀造模成功。与模型组比较，地塞米松组大鼠右后足肿胀从给药后第2天起明显减轻(P<0.01)，EOAD低、高剂量组大鼠右后足肿胀从给药后第4天(即造模第18天)起也开始明显减轻(P<0.05)。见图2。

2.3 EOAD对佐剂性关节炎大鼠胸腺和脾指数的影响 如表1所示，模型组大鼠的胸腺、脾指数明显高于空白对照组(P<0.05)；而低、高剂量EOAD组大鼠的胸腺、脾指数低于模型组(P<0.05)。地塞米松组大鼠的胸腺、脾指数不仅明显低于模型组而且低于空白对照组(P<0.01)。见表1。

2.4 EOAD对大鼠血清NO、NOS、PGE2和TNF-α的影响 与空白对照组比较，模型组大鼠血清NO含量、NOS活力、PGE2和TNF-α水平均明显升高(P<0.01)；与模型对照组比较，地塞米松组、EOAD低、高剂量组大鼠血清NO含量、NOS活力、PGE2和TNF-α水平均显著降低(P<0.05 或P<0.01)。见表1。

与空白对照组比较：1)P<0.05，2)P<0.01；与模型组比较：3)P<0.05，4)P<0.01，下图表同图1 EOAD对佐剂性关节炎大鼠体重的影响

图2 EOAD对佐剂性关节炎大鼠足肿胀的影响

组别胸腺指数(%)脾指数(%)NO(μmol/ml)NOS(U/ml)PGE2(ng/L)TNF⁃α(ng/L)空白对照组016±0024027±00262384±5921446±38233537±46491770±189模型组021±00411)035±00371)7041±12042)5296±10262)45833±38832)2170±1991)EOAD低剂量组018±0038031±00426691±7284316±2913)40511±55343)2026±1423)EOAD高剂量组017±00213)025±00293)5317±8823)3708±2843)36081±33734)1924±1473)地塞米松组003±00034)021±00364)3627±8334)2152±3144)34801±39874)1859±1673)

3 讨 论

白芷为伞形科( Umbeliferae)当归属 (Angelica )植物的根，是一种临床常用的解表药，经适当配伍广泛用于全身各部位的疼痛病症，如中药复方制剂都梁丸、元胡止痛片等均含有白芷，疗效显著〔5〕。白芷具有明显的镇痛、抗炎和解痉作用〔6〕，但关于白芷发挥药效的物质基础研究较少。

佐剂性关节炎(AA)大鼠模型是以细胞免疫功能紊乱为主的经典自身免疫性炎症模型，其关节组织学特点包括滑膜增生、单核细胞浸润、关节软骨及骨组织破坏，与人类的类风湿关节炎(RA)相似〔7〕。本研究结果显示EOAD对FCA诱导的大鼠佐剂性关节炎即自身免疫性炎症具有一定抑制作用。虽然其对佐剂性关节炎大鼠关节肿胀的改善程度弱于地塞米松，但是EOAD治疗组大鼠的一般状况明显改善，如饮食量增加、体重增长和关节活动障碍减轻等，而地塞米松组在显著抑制炎症的同时大鼠出现皮毛无光泽、食欲减退、体重减轻甚至低于模型组等症状，提示EOAD对大鼠的副作用弱于地塞米松。

胸腺和脾脏是机体的主要免疫器官，在某些免疫抑制剂的作用下二者均可出现不同程度的萎缩；而免疫增强剂可使二者增重〔8〕。因此，胸腺和脾脏指数是观察药物对免疫功能影响的重要指标。地塞米松可显著抑制机体免疫功能，甚至造成胸腺萎缩，而本实验的研究结果与其一致〔9〕。EOAD可能具有免疫调节作用，并有可能是其治疗关节炎的作用途径，这方面还需要进一步验证。

炎症因子的释放在炎症反应的产生和加剧过程中起到了重要作用。其中NO对机体免疫系统有双重作用，低水平的NO作为信号分子，可参与免疫应答的信号转导，而高水平NO作为细胞毒性因子却发挥细胞毒性作用，并介导免疫损伤〔10〕。RA时关节软骨细胞分泌大量NO，引起RA软骨破坏；同时，NO可促进巨噬细胞合成释放TNF-α和白细胞介素(IL)-1等炎性细胞因子，导致滑膜和炎性细胞产生〔11〕。NO也可通过激活环氧酶促进PGE2产生，PGE2能选择性抑制Ts细胞功能，导致B细胞功能亢进，释放出大量的抗体，损伤体内组织器官，这是形成RA 的重要原因〔12〕。本文结果表明EOAD治疗使佐剂性关节炎大鼠血清中NO合成关键酶NOS活力及NO水平降低的同时，血清中TNF-α、PGE2水平也明显下降，说明EOAD的抗感染作用与其抑制炎症病变部位炎性因子活性和降低这些炎症介质含量有关。

1 Li R，Sun J，Ren LM，etal.Epidemiology of eight common rheumatic diseases in China：a large-scale cross-sectional survey in Beijing〔J〕.Rheumatology (Oxford)，2012；51(4)：721-9.

2 Li Y，Li R，Ouyang Z，etal.Herb network analysis for a famous TCM doctor′s prescriptions on treatment of rheumatoid arthritis〔J〕.Evid Based Complement Alternat Med，2015；2015:451319.

3 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)〔M〕.北京：中国医药科技出版社，2010.

4 聂 红，沈映君，曾 南，等.白芷总挥发油对疼痛模型大鼠神经递质的影响〔J〕.中药药理与临床，2002；18(3)：11-4.

5 邓虹珠，陈育尧，陈江华，等.都梁软胶囊的药效及毒性试验〔J〕.第一军医大学学报，2002；22：561-3.

6 Kang OH，Chae HS，Oh YC，etal.Anti-nociceptive and anti-inflammatory effects of Angelicae dahuricae radix through inhibition of the expression of inducible nitric oxide synthase and NO production〔J〕.Am J Chin Med，2008；36(5)：913-28.

7 Taurog JD，Argentieri DC，McReynolds RA.Adjuvant arthritis〔J〕.Methods Enzymol，1988；162：339-55.

8 Handy RD，Abd-El Samei HA，Bayomy MF，etal.Chronic diazinon exposure：pathologies of spleen，thymus，blood cells，and lymph nodes are modulated by dietary protein or lipid in the mouse〔J〕.Toxicology，2002；172(1)：13-34.

9 Wyllie AH.Glucocorticoid-induced thymocyte apoptosis is associated with endogenous endonuclease activation〔J〕.Nature，1980；284(5756)：555-6.

10 Presle N，Cipolletta C，Jouzeau JY，etal.Cartilage protection by nitric oxide synthase inhibitors after intraarticular injection of interleukin-1beta in rats〔J〕.Arthritis Rheum，1999；42(10)：2094-102.

11 王 强，徐玉川，董 巍.全身调控一氧化氮水平对大鼠佐剂性关节炎的影响〔J〕.中华风湿病学杂志，2002；6(3)：209-10.

12 Amin AR，Attur M，Abramson SB.Nitric oxide synthase and cyclooxygenases：distribution，regulation，and intervention in arthritis〔J〕.Curr Opin Rheumatol，1999；11(3)：202-9.

〔2015-11-19修回〕

(编辑 袁左鸣)

郭环宇(1978-)，男，主治医师，主要从事中西医结合研究。

孙守坤(1978-)，男，主治医师，主要从事中西医结合研究。

R28

A

1005-9202(2016)22-5544-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.22.022

1 长春中医药大学第一附属医院干部二疗区