SNCA基因多态性与帕金森病认知障碍的相关性分析*

宋天琦，白 洋，闫 旭

(1.北华大学附属医院神经内三科，吉林吉林 132011；2.吉林大学第一医院超声科，长春 130021；3.吉林大学第一医院病理科，长春 130021)



SNCA基因多态性与帕金森病认知障碍的相关性分析*

宋天琦1，白 洋2，闫 旭3

(1.北华大学附属医院神经内三科，吉林吉林 132011；2.吉林大学第一医院超声科，长春 130021；3.吉林大学第一医院病理科，长春 130021)

目的 对帕金森病(PD)患者α-突触核蛋白(SNCA)rs356200和rs356165位点的多态性进行研究，探讨SNCA基因多态性与PD认知障碍的相关性。方法 选择2014年6月至2015年12月该院神经内科120例PD患者(PD组)和120例健康者(对照组)作为研究对象，PD患者根据是否有认知功能障碍分为认知障碍组和非认知障碍组。对各组患者rs356200及rs356165等位基因频率和基因型进行研究。结果 PD组和对照组rs356200等位基因频率比较差异有统计学意义(P<0.05)，PD组和对照组rs356200 G/G、A/A和A/G基因型比较差异有统计学意义(P<0.05)。PD组和对照组rs356165等位基因频率比较差异无统计学意义(P>0.05)，PD组和对照组rs356165 G/G、A/A和A/G基因型比较差异有统计学意义(P<0.05)。PD认知障碍组和非认知障碍组rs356200及 rs356165等位基因频率和基因型比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 PD的发病和SNCA基因rs356200和rs356165位点的多态性有关，PD患者的认知功能障碍和SNCA基因rs356200和rs356165位点的多态性没有显著相关性。

α-突触核蛋白；基因多态性；帕金森病；认知功能障碍

帕金森病(Parkinson′s disease,PD)的发病机制尚不十分清楚，目前认为PD的发病可能和免疫/炎症、氧化应激、氨基酸毒性以及线粒体功能异常等多种机制有关，是在年龄老化的情况下遗传因素和环境因素共同作用引起的[1-2]。在遗传方面，发现了一系列的PD致病基因，α-突触核蛋白(α-synuclein gene polymorphism,SNCA)基因是PD的致病基因之一，PD的病理改变是由SNCA蛋白聚集而成的小体构成，家族性的PD的发病和SNCA基因的重复突变和点突变有关，散发性的PD和SNCA基因关系也比较密切[3-4]，SNCA基因的多态性和PD患者的认知功能也有一定关系[5-6]。SNCA基因的多个多态位点(rs3822086、rs1372525、rs356165等)和PD的发病有关，但研究结果不尽相同。本文对PD患者SNCA基因rs356200和rs356165位点的多态性进行研究，探讨SNCA基因rs356200和rs356165位点的多态性与PD认知障碍的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2014年6月至2015年12月北华大学附属医院神经内科120例PD患者(PD组)和体检中心健康体检的120例健康者(对照组)作为研究对象，PD组根据是否有认知功能障碍分为认知障碍组和非认知障碍组；PD组男67例，女53例，年龄(61.34±6.7)岁；对照组男61例，女59例，年龄(60.31±8.1)岁，对照组和PD组患者性别和年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。排除标准：有精神病病史者，有颅内器质性疾病者，有肝、肾、心、肺严重疾病者，有血管性痴呆等可能引起认知功能异常者。

1.2 方法

1.2.1 认知功能评估 所有研究对象均进行MoCA评估认知功能，根据MoCA评估结果将PD患者分为认知障碍组和非认知障碍组，认知功能障碍为MoCA评分小于26分，认知功能正常为MoCA评分大于或等于26分。

1.2.2 rs356200和rs356165基因型测定 采集受试者外周血，采用氯仿法提取患者外周血基因组DNA，根据SNCA基因的rs356200和rs356165位点两侧序列，用Primer5.0软件设计引物，采用聚合酶链反应(PCR)进行扩增，总反应体系为20 μL，PCR反应为95 ℃预变性2 min，95 ℃、60 ℃和72 ℃各30 s，72 ℃延伸5 min，共40个循环。将PCR酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳分离确定rs356200和rs356165基因型。

1.3 观察指标 观察PD组和对照组rs356200及rs356165等位基因频率和基因型，认知障碍组和非认知障碍组rs356200及rs356165等位基因频率和基因型 。

2 结 果

2.1 rs356200和rs356165电泳分型结果 rs356200位点有3个基因型：G/G、A/A、A/G，A/A纯合子不能被酶切开，只有1个229 bp基因型片段，G/G纯合子被切成64 bp和165 bp 2个基因型片段，A/G杂合子被切为64、165 bp和229 bp 3个片段(图1)。rs356165位点有3个基因型：G/G、A/A、A/G，A/A纯合子不能被酶切开，只有1个297 bp基因型片段，G/G纯合子被切成139 bp和158 bp 2个基因型片段，A/G杂合子被切为139、158 bp和297 bp 3个片段(图2)。

标本1:A/A纯合子；标本2：G/G纯合子；标本3和标本4：A/G杂合子。

图1 rs356200部分电泳图

标本1：A/G杂合子；标本2：A/A纯合子；标本3：G/G纯合子。

图2 rs356165部分电泳图

2.2 PD组和对照组rs356200等位基因频率和基因型比较 PD组和对照组rs356200等位基因频率比较差异有统计学意义(P<0.05)，PD组和对照组rs356200 G/G、A/A和A/G基因型比较差异有统计学意义(P<0.05)，表明PD的发病可能和rs356200基因多态性有关，见表1。

2.3 PD组和对照组rs356165等位基因频率和基因型比较 PD组和对照组rs356165等位基因频率比较差异无统计学意义(P>0.05)，PD组和对照组rs356165 G/G、A/A和A/G基因型比较差异有统计学意义(P<0.05)。表明PD的发病可能和rs356165基因多态性有关，见表2。

2.4 认知障碍组和非认知障碍组rs356200等位基因频率和基因型比较 认知障碍组和非认知障碍组rs356200等位基因频率和基因型比较差异均无统计学意义(P>0.05)，表明PD认知功能障碍和rs356200基因多态性没有相关性，见表3。

表1 PD组和对照组rs356200等位基因频率和基因型比较[n(%)]

表2 PD组和对照组rs356165等位基因频率和基因型比较[n(%)]

表3 认知障碍组和非认知障碍组rs356200等位基因频率和基因型比较[n(%)]

2.5 认知障碍组和非认知障碍组rs356165等位基因频率和基因型比较 认知障碍组和非认知障碍组rs356165等位基因频率和基因型比较差异均无统计学意义(P>0.05)，表明PD认知功能障碍和rs356165基因多态性没有相关性，见表4。

表4 认知障碍组和非认知障碍组rs356165等位基因频率和基因型比较[n(%)]

3 讨 论

SNCA基因是PD的致病基因，SNCA蛋白相对分子质量比较小，在神经可塑性、信号传递和细胞分化等的调节方面发挥一定作用，SNCA蛋白的异常积聚由SNCA基因的重复突变或者点突变引起，异常积聚的SNCA蛋白使神经细胞死亡或者发生功能障碍，引起大脑萎缩[7]。SNCA蛋白聚集形成的路易小体是PD的主要病理特征，SNCA基因的位点多态性和基因重复序列能够使SNCA蛋白的表达水平升高，影响PD的发病。SNCA基因重复序列越长越容易引起PD的发生，SNCA基因的多个位点的多态性和散发性PD的发病关系密切，如rs3857059、rs3733449、rs11931074和rs356165等多种基因位点，SNCA基因位点的多态性增加PD的发病风险[8]。本研究对北华大学附属医院神经内科120例PD患者和120例健康者作为研究对象，PD患者根据是否有认知功能障碍分为认知障碍组和非认知障碍组。对各组患者rs356200及rs356165等位基因频率和基因型进行研究。结果发现：PD组和对照组rs356200等位基因频率比较差异有统计学意义，PD组和对照组rs356200 G/G、A/A和A/G基因型比较差异有统计学意义。PD组和对照组rs356165等位基因频率比较差异无统计学意义，PD组和对照组rs356165 G/G、A/A和A/G基因型比较差异有统计学意义。表明PD的发病和SNCA基因rs356200和rs356165位点的多态性有关。基因的多态性和地区差异等有关，不同地区患者的基因多态性可能不同，本文对我国汉族人群的SNCA基因rs356200和rs356165位点的多态性进行研究，表明在中国汉族人群中，SNCA基因rs356200和rs356165位点的多态性和PD的发病有关。

PD不仅存在运动功能障碍，还包含痴呆、感觉障碍、认知功能障碍等其他非运动症状[9]，其中痴呆和认知功能障碍是PD比较常见的非运动症状，PD的认知功能障碍的发病机制不清楚[10-11]。SNCA基因除了和PD的发病易感性有关，和PD的认知功能也存在一定关系，PD患者中认知功能障碍是一种比较常见的现象，认知功能障碍和PD的路易小体病理改变关系密切。PD患者边缘系统和皮层的SNCA聚集形成路易小体，路易小体的形成是PD认知功能障碍的病因之一，SNCA基因可能通过调节多巴胺的水平影响患者的记忆功能[12-13]。本研究通过对SNCA基因rs356200和rs356165位点的多态性与PD认知障碍的相关性进行研究，结果发现:帕认知障碍组和非认知障碍组rs356200等位基因频率和基因型比较差异均无统计学意义，帕认知障碍组和非认知障碍组rs356165等位基因频率和基因型比较差异均无统计学意义，表明PD认知功能障碍和SNCA基因rs356200和rs356165位点的多态性没有相关性。关于PD认知功能障碍和SNCA基因多态性相关性的研究在不同国家和不同地区结果不同[14-15]，因本研究是对中国汉族人群进行的研究，且样本量较少，为进一步明确SNCA基因rs356200和rs356165位点的多态性与PD认知障碍的相关性，需要进行大样本、多种族、多地区进行进一步的研究。

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Analysis on correlation between SNCA gene polymorphism and cognitive disorders of Parkinson′s disease*

SongTianqi1,BaiYang2,YanXu3

(1.ThirdDepartmentofNeurology,AffiliatedHospitalofNorthChinaUniversity,Jilin,Jilin132011,China； 2.DepartmentofUltrasound,theFirstHospitalofJilinUniversity,Changchun,Jilin130021,China; 3.DepartmentofPathology,theFirstHospitalofJilinUniversity,Changchun,Jilin130021,China)

Objective To study α- synuclein(SNCA)rs356200 and rs356165 loci polymorphism in the patients with Parkinson′s disease(PD)and to investigate the correlation between SNCA gene polymorphism and PD cognitive impairment.Methods One hundred and twenty cases of PD in our hospital from June 2014 to December 2015 and 120 heaalthy people were selected as the research subjects.The PD cases served as the PD group and 120 healthy subjects as control group.The PD cases were also divided into the cognitive impairment group and non-cognitive impairment group according to the cognitive impairment.The rs356200 and rs356165 allele frequencies and genotype in each group were studied.Results The rs356200 allele frequency had statistical difference between the PD group and control group(P<0.05),the rs356200 G/G,A/A and A/G genotype had statistical difference between the PD group and control group(P<0.05).The rs356165 allele frequency had no statistical difference between the PD group and the control group(P>0.05),the rs356165 G/G,A/A and A/G genotype had statistical difference between the PD group and control group(P<0.05).The rs356200 and rs356165 allele frequencies and genotype had no statistical difference between the cognitive impairment group and non-cognitive impairment group(P>0.05).Conclusion The morbidity of PD is related to SNCA gene rs356200 and rs356165 sites polymorphism.PD cognitive dysfunction has no significant correlation with SNCA gene rs356200 and rs356165 loci polymorphism.

α- synuclein gene polymorphism;Parkinson′s disease;cognitive dysfunction

��·临床研究

10.3969/j.issn.1671-8348.2016.33.013

吉林省科技发展计划项目(20130522018JH)。 作者简介：宋天琦(1979-),硕士，主治医师，主要从事脑血管病方面的研究。

R749.1

A

1671-8348(2016)33-4650-03

2016-04-04

2016-05-17)

许魏(1984-)，本科，主治医师，主要从事脑血管病及认知功能方面的研究。△