不同提取方法马勃中药材挥发性成分的GC-MS分析

相聪坤 关胜江 王巧 安福丽 陈迎春 吴海燕



·论著·

不同提取方法马勃中药材挥发性成分的GC-MS分析

相聪坤 关胜江 王巧 安福丽 陈迎春 吴海燕

目的 通过对马勃中挥发性成分的比较分析，以期为马勃类药材的质量控制与资源开发利用提供科学依据。方法 利用水蒸气蒸馏法和超声提取法提取马勃中挥发油类成分；运用GC-MS对马勃中挥发油成分进行分析鉴定。结果 比较水蒸气蒸馏法和超声法提取的马勃挥发油的成分，水蒸气蒸馏法所得挥发油中主要化学成分为2,2'-亚甲基双-(4-甲基-6-叔丁基苯酚)和7-Amino-1,4-dimethylpyrimido [4,5-c]pyridazine-3,5-(1H,2H)-dione；乙酸乙酯超声提取法3种正品马勃的主要成分为十六烷酸乙酯；乙醚提超声取法的马勃挥发油中共有成分为2,2'-亚甲基双-(4-甲基-6-叔丁基苯酚)。结论 不同品种、不同制备方法马勃挥发性成分存在明显差异。因此，对于马勃药材的质量控制尚需进一步规范化和标准化。本文研究结果为马勃药材质量控制提供了一定的参考和依据。

马勃；GC-MS；挥发性成分

马勃(lasiosphaera Calvatia)为灰包科真菌脱皮马勃(Lasiosphoera fenzlii reich)、大马勃Calvatia gigantea(Batsch ex pers.)Lloyd或紫色马勃Calvatia lilacina(Mont.et Berk.)Lloyd的干燥子实体[1]。马勃性平、味辛，具有清肺利咽、止血的功效，是一种用于解毒、消肿的药用真菌，更是一种止血良药[2]。研究表明，马勃中主要化学成分为萜类化合物、甾体化合物、马勃多糖、小分子的含氮化合物等[3]。此外，马勃中尚含有具有较强生理活性的挥发油类成分，但研究尚不够深入。马勃作为传统的清热解毒药，具有抑菌的生物活性[4]，其主要活性物质主要为挥发油类成分。迄今为止，对马勃的研究主要集中在其非挥发性成分及其药理活性研究，而对其挥发性成分的研究报道较少[5]。本文采用脂溶性溶剂超声法提取马勃中的挥发性成分，并与传统的水蒸气蒸馏法进行比较研究；并比较药典收录的3种正品马勃和1种伪品马勃中挥发性成分的异同。为马勃的质量控制和综合利用提供一定的科学依据和参考。

1 资料与方法

1.1 仪器与材料 Agilent HP-6890GC/5973MS 气质联用系统，数据库为 NIST-05 标准质谱图库。乙酸乙酯、乙醚等所用试剂均为国产分析纯。经河北省药品检验研究院段吉平鉴定，正品马勃为灰包科脱皮马勃(Lasiosphoera fenzlii Reich)、大马勃[Calvatia gigantea(Batsch ex pers.)Lloyd]或紫色马勃[C.lilacina(Mont.et Berk.)Lloyd]的干燥子实体；非正品马勃为灰包科大口静灰球(Bovistella sinensis Lloyd)的干燥子实体。

1.2 方法

1.2.1 水蒸气蒸馏法:取马勃样品80 g破碎后放入圆底烧瓶中，采用 2010 年版《中国药典》中挥发油提取装置进行提取，加蒸馏水1 600 ml，振摇使样品完全浸入水中，蒸馏14 h，流出液用乙醚萃取，用无水硫酸钠除水干燥后作为供试品溶液。0.22 μm 滤膜过滤，取续滤液，进行GC-MS分析。

1.2.2 超声提取法:取干燥后的马勃样品，粉碎，分别称取10 g不同品种的马勃样品，各加入乙酸乙酯或乙醚200 ml，静置过夜后，超声1 h，过滤，将滤液减压浓缩至10 ml，0.22 μm 滤膜过滤，取续滤液，进行 GC-MS分析。

1.3 分析测试条件 (1)气相色谱条件:HP-5MS 毛细管色谱柱 (0.1 mm×0.45 mm×30 m)，柱温50℃，保持2 min，然后以4℃/min升温至230℃，保持20 min，气化室温度 250℃，载气为高纯度氮气(99.999%)，柱前压15.08 psi，载气流量2.0 ml/min，进样量 2 μl，分流比40∶1。(2)质谱条件：EI离子源，离子源温度230℃，四极杆温度150℃，电子能量70 eV，发射电流34.6 μA，倍增器电压1 936 V，接口温度 280℃，质量范围(m/z)10～550。

2 结果

2.1 水蒸气蒸馏法

2.1.1 马勃挥发性成分总离子流图：采用 GC-MS 进行分析，得马勃挥发性化学成分的总离子流图。见图1。

图1 水蒸气-马勃气相色谱-质谱总离子流色谱图

2.1.2 GC-MS分析结果:选用水蒸气蒸馏法提取，共分离鉴定出66个峰，通过GC-MS分析工作站和 NIST标准图库进行检索,并参照有关文献，鉴定出马勃挥发性化学成分16个化学成分，占总挥发油总量的64.814%，其中主要成分为2,2'-亚甲基双-(4-甲基-6-叔丁基苯酚)(12.72%)和7-Amino-1,4-dimethylpyrimido[4,5-c]pyridazine-3,5-(1H,2H)-dione(14.61%)。见表1。

表1 水蒸气-马勃挥发性成分GC-MS分析结果

2.2 乙酸乙酯超声提取GC-MS分析结果 选用乙酸乙酯为提取溶剂。其中大马勃共分离出12个峰，鉴定出7个化学成分，占总挥发油总量的94.451%，其中主要成分为2,2'-亚甲基双-(4-甲基-6-叔丁基苯酚)(39.64%)，n-Propyl-9,12-octadecadienoate(29.83%)；紫色马勃共分离出9个峰，鉴定出5个化学成分，占总挥发油总量的85.237%，其中主要成分为3,4-二甲基苯胺(24.05%)，Racemosol (25.45%)；脱皮马勃共分离出13个峰，鉴定出7个化学成分，占总挥发油总量的87.561%，其中主要成分n-Propyl-9,12-octadecadienoate (34.70%)，十六烷酸乙酯(17.03%)，油酸乙酯(14.47%)；伪品马勃共分离出6个峰，鉴定出4个化学成分，占总挥发油总量的73.153%，其中主要成分为3,4-二甲基苯胺(31.33%)，2,2'-亚甲基双-(4-甲基-6-叔丁基苯酚)(28.25%)。见表2。

2.3 乙醚超声提取GC-MS分析结果 乙醚为提取溶剂，大马勃共分离出7个峰，鉴定出4个化学成分，占总挥发油总量97.679%，主要成分为2,2'-亚甲基双-(4-甲基-6-叔丁基苯酚)(71.08%)；紫色马勃共分离出5个峰，鉴定出3个化学成分，占总挥发油总量96.013%，主要成分为4-苯乙炔基苯乙酮(45.05%)，2,2'-亚甲基双-(4-甲基-6-叔丁基苯酚)(49.11%)；脱皮马勃共分离出10个峰，鉴定出6个化学成分，占总挥发油总量86.620%，主要成分为 4-苯乙炔基苯乙酮(25.40%)，2,2'-亚甲基双-(4-甲基-6-叔丁基苯酚)(41.74%)；伪品马勃共分离出6个峰，鉴别出4个峰，占总挥发油总量96.163%，主要成分为2,2'-亚甲基双-(4-甲基-6-叔丁基苯酚)(46.25%),3-(Dimethyphenysilyl)-2-methylpropionamide(47.88%)。见表3。

表2 乙酸乙酯-马勃挥发性成分GC-MS分析结果

表3 乙醚-马勃挥发性成分GC-MS分析结果

3 讨论

通过对水蒸气蒸馏法和超声提取法比较研究发现，不同品种、不同制备方法马勃挥发性成分存在明显差异。3种正品马勃：脱皮马勃、大马勃或紫色马勃均含有化合物十六烷酸乙酯(又称棕榈酸乙酯)，作为一种香精、香料，主要被用来作为乳化剂、生物柴油和食品添加剂等广泛使用[6]。同时棕榈酸乙酯是合成蔗糖酯(SE)及蔗糖多酯(SPE)的重要原料[7]。而非正品马勃中不含有该成分。同时在乙酸乙酯提取中，3,4-二甲基苯胺是4种马勃的共有成分，据报道，3,4-二甲基苯胺作为一种重要的精细化工中间体，是合成核黄素 (维生素 B2)的重要原料，还广泛应用于医药、染料、农药等化工产品的合成中，国内外需求量很大 ,市场前景较好[8]。

1 国家药典委员会主编.中华人民共和国药典(2015 年版).第一部.北京：中国医药科技出版社，2015.50.

2 郭晶.马勃化学成分及药理作用研究进展.现代医药卫生，2013，29：386-389.

3 邓志鹏,孙隆儒.中药马勃的研究进展.中药材,2006，28:996．

4 邓永中,陆梦怡.中药抗菌有效化学物质的研究进展.中药现代药物应用，2008,18:110-112.

5 徐淑楠,司攀,高玉琼.脱皮马勃挥发性成分的GC-MS分析.中国实验方剂学杂志,2012,18:132-134.

6 李洋.SBA-15固定化脂肪酶催化合成棕榈酸乙酯的研究.吉林大学,2014.

7 张艳,章亚东,蒋登高.固体酸催化合成棕榈酸乙酯.精细化工,2003,20:230-233.

8 吴崖迪,王桂林.3,4-二甲基苯胺合成进展.浙江化工,2003,34:22-24.

GC-MS analysis for the volatile constituents of Lasiosphaera calvatia extracted by different extraction methods

XIANGCongkun*,GUANShengjiang*,WANGQiao,etal.

*DepartmentofPharmacy,Hebei,ProvincialTCMHospital,Shijiazhuang050017,China

Objective To use GC-MS to analyze the volatile constituents of Lasiosphaera calvatia obtained by different extraction methods in order to provide scientific basis for evaluating and controlling the quality of Lasiosphaera calvatia.Methods The volatile oil constituents in Lasiosphaera calvatia were extracted by steam distillation method and ethyl acetate ultrasound extraction method,respectively,then the volatile oil constituents in Lasiosphaera calvatia were analyzed and identified by means of GC-MS. Moreover the two kinds of extraction methods were compared.Results The volatile oil compositions extracted by steam distillation method were mainly phenol,2,2'-methylenebis[6-(1,1-dimethylethy)]-4-methyl and 7-amino-1,4-dimethylpyrimido [4,5-c]pyridazine-3,5-(1H,2H)-dionethe,however, which extracted by ethyl acetate ultrasound extraction method were mainly hexadecanoic acid ethyl ester,moreover, which extracted by ethyl ether extraction method were mainly the common composition of 2,2'- methylene double (4-methyl-6-tertiary butyl phenol).Conclusion There are significant differences in the volatile constituents of Lasiosphaera calvatia extracted by different extraction methods,thus it is need to normalize and standardize the quality control of Lasiosphaera calvatia further.The research results in this article provide a certain reference and basis for quality control of puffballs.

Lasiosphaera calvatia; GC-MS；volatile constituents

10.3969/j.issn.1002-7386.2016.23.006

项目来源：河北省科学技术研究与发展指导计划项目(编号：12277794)

050011 石家庄市，河北省中医院药学部(相聪坤、关胜江、安福丽、陈迎春)；河北医科大学药学院药物分析教研室(王巧、吴海燕)

R 917

A

1002-7386(2016)23-3545-03

2016-07-23)